王丽华
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌ArsRS双组分系统与其药物敏感性的相关研究
- 目的鉴定幽门螺杆菌ArsRS双组分系统基因突变对其药物敏感性的影响。方法以幽门螺杆菌标准株NCTC11637 DNA为模板,用PCR方法扩增ArsS和ArsR基因不完整片段:扩增产物分别克隆于信号标签载体pID700A1...
- 马越云陈静园王丽华彭道荣苏明权郝晓柯
- 关键词：双组分系统幽门螺杆菌
- 文献传递
- 重组和天然HBHA蛋白制备及其活性研究被引量：7
- 2010年
- 目的制备天然和重组HBHA蛋白，并比较其诱导产生的抗体对其聚集BCG活性的抑制效应。方法将7H9液体培养基中的BCG培养至稳定生长期，用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白（nHBHA）。同时，克隆HBHA基因片段，表达于大肠杆菌BL-21中，经亲和层析法纯化蛋白，并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体。在BCG的液体培养基中分别加入不同浓度的HBHA蛋白，观察菌体的聚集情况。同时，用抗HBHA抗体与HBHA蛋白孵育后，加入BCG培养基中，观察菌体聚集情况。结果获得天然HBHA蛋白纯度为99％，浓度为1．016mg／mL重组蛋白表达量约占菌体蛋白总量的36％，纯化得到纯度为97．1％，浓度为10．98mg／m]的重组HBHA蛋白。所得天然和重组蛋白均有诱导BCG聚集的作用，当nHBHA浓度为0．2μg/ml时BCG出现少量聚集，而rHBHA浓度达到2μg／ml时BCG才出现聚集。并且此聚集现象均可被多克隆抗体抑制。结论成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白；证实了两者均具有促进BCG聚集的功能，并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制。从而为进一步研究HBHA的临床诊断和疫苗价值提供了实验依据。
- 周珊马越云刘家云苏明权张海师长宏王丽华郭旭光郝晓柯
- 关键词：抗体
- 幽门螺杆菌STM文库重组质粒的构建
- 2010年
- 目的:应用信号标签突变技术(Signature tagged mutagenesis,STM)构建幽门螺杆菌突变体文库重组质粒。方法:采用平末端内切酶随机酶切幽门螺杆菌基因组DNA,并回收300～500bp片段(记作Fr),基因重组技术构建重组质粒pID700-Fr,电转化E.coliDH5α筛选阳性克隆,提取重组质粒酶切鉴定。结果:成功构建了1200个幽门螺杆菌STM文库重组质粒。结论:STM技术可用于幽门螺杆菌致病以及耐药相关基因的筛选,为幽门螺杆菌致病及耐药机理的研究奠定了基础。也将为幽门螺杆菌的治疗提供新的药物靶点。
- 王丽华马越云曾宪飞苏明权郝晓柯
- 关键词：幽门螺杆菌重组质粒
- 重组和天然HBHA蛋白制备及其活性研究
- 周珊马越云刘家云苏明权张海师长宏王丽华郭旭光郝晓柯
- 肿瘤靶向治疗活性人羧肽酶A1最适片段的分析和克隆被引量：1
- 2010年
- 目的:获得肿瘤靶向治疗用活性人羧肽酶A1(hCPA1)的最适片段。方法:计算机分析hCPA1活性相关氨基酸,PCR扩增选择最适基因片段,克隆入PQE-80载体,转化Rosetta gami2(DE3)进行表达,与hCPA1活性中心片段比较酶活性。结果:PCR成功扩增了hCPA1活性中心和hCPA1活性短片段基因,酶切鉴定和测序均证实重组表达载体构建成功,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,分别在约25×103和20×103处出现新生蛋白条带,蛋白质印迹法实验证实了新生蛋白为目的蛋白。Hippuryl-L-Phenylalanin(H-L-P)实验显示两者均具有羧肽酶活性,且hCPA1活性短片段的活性与活性中心相当。MTT和细胞凋亡实验结果表明两者均能有效地水解前体药物MTX-α-Phe,抑制前列腺癌细胞株PC-3增殖,促进PC-3细胞凋亡。结论:成功克隆和表达了人hCPA1活性短片段基因和hCPA1活性中心,获得相对分子质量小而具有相似活性的hCPA1蛋白,为进一步将其应用于前列腺癌的ADEPT导向治疗创造了条件。
- 郑佩婵马越云卢雪涛岳乔红周珊王丽华郭旭光曾宪飞郝晓柯
- 关键词：前列腺肿瘤原核表达
- 幽门螺杆菌ArsRS双组分系统与其药物敏感性的相关研究
- 马越云陈静园王丽华彭道荣苏明权郝晓柯
