王宏
- 作品数：19 被引量：53H指数：4
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划总后勤部科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- HIV－1治疗性重组鸡痘病毒疫苗
- 一种HIV－1治疗性重组鸡痘病毒疫苗，属于生物技术领域。本发明的目的在于，提供根据HIV－1抗原表位的构象特点，设计、构建最佳的疫苗抗原构象，开发以HIV－1抗原表位为基础、以HIV－1结构蛋白P24为载体分子，对抗原进...
- 金宁一张立树李子健江文正宋英今王宏金洪涛马鹤雯
- 文献传递
- 表达HIV-1 gp160膜蛋白靶细胞的制备及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的获得表达INV-1 gp160膜蛋白的靶细胞,用于HIV-1特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和抗HIV-1重组毒素细胞杀伤活性检测。方法采用PCR方法,从质粒pJen 10中扩增HIV-1 gp160基因,插入pGEM-T载体,测序后克隆入pIRESl neo载体中构建成重组质粒pIRE160,酶切鉴定正确后,转染人肝癌细胞(SMMG-7721),CA18加压筛选至细胞不再死亡为止,并采用Western blot和间接免疫荧光法对制备的靶细胞进行检测。结果HIV-1 gp160在SMMC7721表面表达,并裂解为gp120和gp41蛋白。结论已成功得到稳定表达HIV-1 gp160的靶细胞,且表达的蛋白具有良好的特异性。
- 王宏金宁一金洪涛徐一鸣张立树宋英今
- 关键词：HIV-1膜蛋白靶细胞毒素人类获得性免疫缺陷综合征
- 抗HIV－1重组导向毒素
- 本发明提供抗HIV-1重组导向毒素，属于生物技术领域。重组导向毒素分别由抗HIV-1表面糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白gp41的单链抗体与金黄色葡萄球菌外毒素A(Staphylococcus enterotoxin A，S...
- 金宁一王宏金洪涛张立树金扩世夏志平徐一鸣
- 文献传递
- 共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究被引量：2
- 2003年
- 目的 构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果 重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论 成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。
- 江文正金宁一李子健张立树王宏金洪涛
- 关键词：重组鸡痘病毒
- 共表达新城疫病毒F基因、传染性法氏囊病病毒VP_0基因的重组鸡痘病毒的抗原性和免疫原性被引量：22
- 2003年
- 以鸡痘病毒 (FPV) 2 82 E4 株 TK基因为侧翼 ,将 2个相同的复合启动子 ATI· p7.5× 2 0以反向方式连接 ,分别调控新城疫病毒 (NDV) F基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP0 基因 ,得到重组转移质粒 p VP0 - 2 ATI· p7.5× 2 0 -F。然后将该重组转移质粒用脂质体转染预先感染 FPV 2 82 E4 株的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,在经 Brd U (5 -溴 -脱氧尿嘧啶 )加压处理后的 CEF上传代 ,用间接免疫荧光试验、Western blot检测 ,有 2株鸡痘病毒能同时表达 NDV F蛋白和IBDV VP0 蛋白。用这 2株重组鸡痘病毒刺种商品 L eghorn雏鸡 ,于刺种前及刺种后 1、2、3周对抗 NDV特异性抗体水平和淋巴细胞转化能力检测 ,结果发现 ,重组鸡痘病毒能激发机体产生良好的免疫反应。结果表明 。
- 夏志平金宁一金扩世郭志儒许凌峰王宏郑敏张洪勇赵怀龙
- 关键词：重组鸡痘病毒共表达免疫原性新城疫病毒法氏囊病病毒
- 新城疫病毒F基因与传染性法氏囊病毒VP0基因在鸡痘病毒中共表达被引量：4
- 2002年
- 目的 新城疫病毒（NDV）F基因和传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP0基因在鸡痘病毒中表达,以便研制新城疫和传染性法氏囊多价重组疫苗。方法 利用鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因构建的表达载体PU-TA2,在已存在的复合启动子p7.5ATI下游同向插入F基因,反向插入复合启动子P7.5ATI,并在其下游反向插入VP0基因,构建由2个相同的复合启动子在相反方向分别表达F和VP0蛋白的PATI2-F-VP0表达载体。使其与鸡痘病毒282E4株共转染CEF细胞后,用BUDR法筛选重组病毒,通过间接免疫荧光法检测阳性重组病毒。用Western blot法检测F和VP0蛋白。结果 在重组病毒株中,用Western blot法可检测到F和VP0蛋白。结论 已成功地获得可同时表达F蛋白和VP0蛋白的重组鸡痘病毒。
- 许凌峰夏志平郭志儒王宏王兴龙金宁一
- 关键词：新城疫病毒F基因传染性法氏囊病毒鸡痘病毒NDVIBDV
- 抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达被引量：2
- 2004年
- 人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120，经条件优化，pBV—120和pBV—SL120分别在E．coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达，表达量分别占菌体总蛋白的27．673％和32．519％。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。
- 王宏金宁一金洪涛张立树江文正徐一鸣连海
- 关键词：GP120原核抗HIV-1BV密码子表达载体构建
- 共表达新城疫病毒F基因、传染性法氏囊病病毒VP0基因的重组鸡痘病毒构建及实验免疫学研究
- 为了使雏鸡能抵抗新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)的感染,常通过对130日龄左右的产蛋鸡使用NDV—IBDV二联油乳剂灭活苗免疫,以使雏鸡获得高水平的母源抗体。然而这些母源抗体对雏鸡接种弱毒疫苗能产生明...
- 夏志平金宁一金扩世郭志儒许凌峰王宏
- 文献传递
- 抗HIV-1gp120单链抗体的原核表达与初步纯化被引量：4
- 2002年
- 目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51％,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85％。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。
- 金洪涛金宁一王宏伟江文正王宏
- 关键词：原核表达纯化
- HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达被引量：2
- 2002年
- 目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。
- 江文正金宁一李子健金洪涛王宏韩文瑜
- 关键词：HIV-1DNA疫苗质粒艾滋病
