王树军
- 作品数：103 被引量：299H指数：10
- 供职机构：上海交通大学医学院上海市免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市高等学校科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程文化科学更多>>
- CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2003年
- 目的:获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术从睾丸中获得cML66的cDNA,亚克隆至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE、Westernblot鉴定后,应用纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列 一致。用纯化的目的蛋白免疫家兔后,获得高滴度的特异性兔抗血清。结论:成功地克隆CML66基因,建立了原核表达、纯化体系。制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清。
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍葛海良
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位预测被引量：6
- 2009年
- 目的:预测人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位。方法:B细胞表位预测,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、极性)预测为基础,结合ABCpred预测结果,并经二级结构预测筛选等综合分析。结果:OVA66的B细胞表位可能位于209-216,266-275,294-301,362-368和391-396氨基酸残基的区域内或附近。结论:该结果对应用合成肽抗原进行肿瘤患者的早期诊断研究具有重要指导意义。
- 刘争春王颖王树军张惠珍荣婷婷王庆飞谢国化葛海良
- 关键词：表位B淋巴细胞抗原肿瘤相关
- Pristane诱导小鼠系统性红班狼疮动物模型的研究被引量：5
- 2011年
- 目的:建立pristane诱导的系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,并对该小鼠模型的发病机制进行初步的探讨。方法:6-8周龄雌性BALB/c小鼠单次腹腔注射pristane0.5mL,对照组单次腹腔注射PBS0.5mL,注射前及注射后每2周行流式细胞术(FCM)检测外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例及细胞活化状态B220+Aβ1dhigh),ELISA检测血清中自身抗体(anti-dsDNA,anti-smRNP,anti-ribosomalP0)的含量。至6个月处死动物,FCM检测腹腔细胞中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例和脾脏中细胞的活化(B220,Aβ1d),采用直接免疫荧光法标记小鼠肾脏免疫球蛋白复合物及H&E染色评估小鼠肾脏免疫复合物的沉积及损伤情况。结果:小鼠腹腔注射pristane第2个月开始血清总IgG升高,第3个月起出现自身抗体阳性,到个6月时达到最高,并维持高水平至被处死;Pristane处理6个月后,Pristane处理组小鼠出现关节炎症状,肾脏免疫复合物的大量沉积和明显肾脏损伤。Pristane注射2周起,小鼠外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例明显高于PBS注射组,小鼠腹腔细胞中IFN-α分泌细胞的比例也明显升高;同时外周血和脾细胞中B细胞表面MHCII分子Aβ1d的平均荧光强度(MFI)均高于对照组,表明pristane处理组小鼠中B细胞发生了显著活化。结论:BALB/c小鼠腹腔注射pristane可诱导构建小鼠SLE模型,其SLE的发病可能与IFN-α的持续分泌导致B细胞的异常活化有关。该模型的建立为进一步研究SLE的发病机制提供了良好的动物模型。
- 李金枝丁隽Merim Boukherouba李昊文张勇沈浩陈学进王树军王颖
- 关键词：小鼠模型IFN-ΑB细胞活化自身抗体
- Ⅰ型干扰素参与调节SLE外周T细胞活化和TLR表达谱的研究被引量：1
- 2012年
- 血清高水平Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon)是系统性红斑狼疮(SLE)患者重要的病理特征之一,外周高水平IFN-α对T细胞的免疫调节作用值得深入探讨。本研究首先比较分析了SLE患者外周血T细胞活化和TLR分子表达格局,结果显示SLE患者外周血CD4^+或CD8^+T细胞和正常人相比呈现出更加活化的表型变化,其表面活化标志CD69和HLA-DR表达阳性率均高于正常人;分析T细胞表达TLR分子格局发现,SLE患者较正常人T细胞中TLR分子的表达有明显升高,其中CD4^+T细胞中TLR8和TLR9的升高明显,而在CD8^+T细胞中明显升高的TLR分子有TLR3和TLR8;结合SLE病理状态下外周高水平IFN-α的持续存在,我们进一步分析了IFN-α对正常T细胞活化和TLR分子表达谱的影响,结果显示IFN-α协同TCR信号可以促进T细胞的活化,并上调T细胞中部分TLR分子的表达,其中CD4^+和CD8^+T细胞中TLR8的表达均明显上升。综合分析SLE患者和经IFN-α活化的正常T细胞的活化和TLR分子表达谱的变化格局,提示SLE病理状态下高水平的Ⅰ型干扰素可以与T细胞的持续活化有关,其对T细胞表达TLR分子格局的影响,特别是与核酸类分子配体相关的TLR分子的表达增高为内源性核酸类配体参与T细胞的活化提供了分子基础。
- 梅瑞安王树军刘芝翠李金枝张勇王佳琦沈浩潘萌王颖
- 关键词：T细胞TOLL样受体
- 黄连解毒汤对荷瘤小鼠免疫调节作用的实验研究被引量：14
- 2007年
- 目的:探讨黄连解毒汤对荷瘤小鼠免疫调节作用。方法:选择H22肝癌小鼠模型,通过检测免疫指标,研究黄连解毒汤对正常小鼠和模型小鼠免疫反应的影响。结果:实验组小鼠的自然杀伤细胞(NK)杀伤活性及T细胞分泌白细胞介素-4(IL-4)的能力均有显著增高(P<0.01,P<0.001)。结论:黄连解毒汤能增强荷瘤小鼠体内NK细胞的杀伤功能及体液免疫功能。
- 周阿高张勇孔德云王颖张惠珍王树军蒉纲洪声葛海良任秋华毛旭明董佳容
- 关键词：黄连解毒汤肝癌免疫调节
- 肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。(2)应用Hoechst 33258染色和FACS检测5-氟尿嘧啶(5-FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。(2)5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。
- 金姝王俐王颖谢国化陈惠娟王树军张惠珍张勇葛瑜葛海良
- 关键词：线粒体逆转录病毒载体HEPG2细胞氟尿嘧啶细胞凋亡
- 一种简单快速的γδT细胞扩增方法被引量：8
- 2000年
- 建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法。用 5～ 10ml外周血通过CD3细胞的富集、γδ单抗的诱导以及肿瘤细胞刺激的培养体系进行γδT细胞的体外扩增。结果显示 ,γδT细胞能在短时间内快速大量扩增到 10 9～ 10 10 的数量级 ;诱导 4周的CD8、γδ阳性的细胞百分率分别为 42 6 9%和 5 8 6 7% ,明显高于诱导前的 2 3 97%和 6 6 2 % ;γδT细胞对NK敏感的K5 6 2细胞和NK抵抗的Daudi细胞均有较高的杀伤活性 ;γδT细胞对经抗HSP单抗封闭后的Daudi细胞的杀伤率明显下降。该培养体系是一种用血量少、特异、经济、快速的人外周血γδT细胞体外扩增方法。
- 陈雪华马安伦张冬青王树军张笑人张惠珍葛海良
- 关键词：ΓΔT细胞细胞毒活性热休克蛋白细胞扩增
- 大鼠IL-10真核表达载体在软骨细胞中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 构建大鼠IL-10真核表达载体并在大鼠软骨细胞中进行表达。方法 将目的基因片段通过酶切连入真核表达载体pcDNA3,并以Super Fect Transfection Reagent介导转入大鼠软骨细胞表达,RT-PCR检测细胞中mRNA水平,及ELISA检测细胞培养上清液中的IL-10蛋白含量。结果 成功构建了大鼠IL-10真核表达载体,转入软骨细胞后,检测到细胞内IL-10mRNA转录,细胞培养24、48和72 h后,经ELISA检测上清液中IL-10蛋白含量分别为36、62和100 pg/mL。结论 大鼠IL-10真核表达载体的构建并在软骨细胞中表达,为研究IL-10诱导软骨细胞同种异体移植耐受奠定了基础。
- 赵阳柳子星王颖张惠珍王树军葛海良
- 关键词：大鼠软骨细胞真核表达
- 肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:制备和鉴定人卵巢癌cDNA文库筛选到的肿瘤相关抗原OVA66的单克隆抗体,为研究其生物学功能提供手段。方法:采用基因重组方法构建pET32b-OVA66重组表达质粒,经大肠杆菌诱导表达OVA66融合蛋白,利用Ni-TED亲和层析技术分离纯化His-OVA66融合蛋白;采用经典的杂交瘤技术制备OVA66单克隆抗体;ELISA和Western blotting鉴定单克隆抗体的生物学和免疫学特性,并对OVA66单克隆抗体在细胞免疫荧光法、流式细胞术和免疫组化等方法中进行了初步应用。结果:成功构建重组表达载体pET32b-OVA66,并诱导表达和纯化OVA66融合蛋白。制备获得两株小鼠OVA66单克隆抗体杂交廇细胞株5F4和4G9。两株细胞分泌的抗体亚类均为IgG1,轻链为κ型,亲和力常数Ka分别为2.96×1010和0.4×1010L/mol,初步表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可以采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测OVA66的表达,5F4还可通过免疫组织化学检测肿瘤组织中OVA66的表达。结论:成功制备两株特异性的小鼠OVA66单克隆抗体杂交瘤细胞株,为进一步研究OVA66的生物学特性和临床应用奠定了基础。
- 荣婷婷陈惠娟张惠珍刘争春张勇王树军王颖葛海良
- 关键词：肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体原核表达蛋白纯化ELISA
- 系统性红斑狼疮中干扰素α对CD4~+T细胞功能调控的初步探究
- Ⅰ型干扰素IFN-α在系统性红斑狼疮(SLE)发生发展中发挥着重要的免疫增强作用,并由此引起机体外周免疫耐受的失衡而致病,其免疫调节机制包括外周不成熟的髓样树突状细胞和B细胞的异常活化。CD4~+T细胞表面表达Ⅰ型干扰素...
- 张晨星刘芝翠王树军李金芝张勇沈浩王颖
- 关键词：干扰素Α磷酸化
- 文献传递
