王泽慧
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨miR-145对PDGF-BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)的作用及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR-NC组、PDGF-BB+miR-145组及PDGF-BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT-PCR方法检测PCNA、c-Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1/2和p-ERK1/2的表达、JNK和p-JNK的表达以及p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果 miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF-BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论 miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。
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- 关键词：MIR-145MAPK途径
- miR-145对VSMC表型转化和增殖的影响及机制探讨
- 第一部分大鼠miR-145慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的：
构建针对rno-miR-145的慢病毒表达载体并鉴定其在血管平滑肌细胞(VSMC)中是否过表达。
方法：
人工合成含有酶切位点粘端mi...
- 王泽慧
- 关键词：VSMC增殖表型转化MAPK信号通路磷酸化
- 文献传递
- 肿瘤坏死因子受体2编码基因重组质粒的构建及意义
- 2012年
- 目的 构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2^196MET和pcDNA6.0-TNFR2^196ARG.方法 人工合成TNFR2196MET目的 片段,与pMD18-T simple 载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增.抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-T simple-TNFR^2196ARG.双酶切pMD18-T simple-TN-FR^2196MET、pMD18-T simple-TNFR^2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR^2196MET、TNFR^2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR^2196MET和pcDNA6.0-TNFR^2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定.结果 酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功.结论 成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础.
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- 关键词：突变心血管疾病
- miR-145抑制VSMC增殖的机制探讨
- 目的:构建miR-145慢病毒表达载体,使其过表达,选择丝裂原活化蛋白激酶信号系统(MAPKs)家族的3个亚类:ERK1/2、JNK/SAPK、p38MAPK,探讨miR-145过表达对PDGF-BB诱导的p-ERK/E...
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- 关键词：血管平滑肌细胞增殖MAPK信号通路
- 吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及机制被引量：2
- 2012年
- 目的研究吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法将36只SD雄性大鼠随机平均分为6组:对照组、糖尿病组、钙化组、糖尿病+钙化组、钙化+吡格列酮组、糖尿病+钙化+吡格列酮组;建立大鼠血管钙化模型(维生素D3+华法林)和糖尿病模型(链尿佐菌素);并对血管组织进行Von Kossa染色、钙含量和碱性磷酸酶活性检测,qRT-PCR检测mRNA表达,免疫组织化学法检测骨保护素蛋白表达。结果钙化组血管平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积;糖尿病+钙化组较糖尿病组和钙化组血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性分别升高3.63倍、1.35倍和3.69倍、1.30倍(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达降低(P<0.05);糖尿病+钙化+吡格列酮组较糖尿病+钙化组钙含量、碱性磷酸酶活性分别下调13.70%、18.04%(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻血管钙化程度并上调骨保护素mRNA含量及蛋白表达,骨保护素可能是抑制血管钙化主要因素之一。
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- 关键词：血管钙化糖尿病吡格列酮骨保护素
- 大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响被引量：7
- 2012年
- 目的构建针对Rno-miR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用。方法人工合成含有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况;实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组);采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22αmRNA表达水平的影响。结果成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL。倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72 h时感染率最高。实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低;miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加。结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC。感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化。
- 王泽慧边云飞卫娜车星星肖传实
- 关键词：慢病毒表达载体血管平滑肌细胞表型转化
