王革飞
- 作品数：3 被引量：23H指数：3
- 供职机构：华中农业大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 伪狂犬病病毒Ea株gM和gN基因的克隆与结构分析被引量：3
- 2002年
- gM和gN是最近经经典免疫沉淀法确定的伪狂犬病病毒 (PRV)第三对异源糖蛋白二聚体。根据PRV国外Ka株的核苷酸序列 ,设计两对分别包含gM和gN完整编码区的特异性引物 ,以PRV国内地方分离株 (Ea株 )的细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.2kb和 0 .3kb的特异性片段。将扩增产物克隆到杆状病毒转座载体pFastBacl中 ,酶切鉴定证实后进行序列测定。结果表明 :Ea株gM、gN基因分别编码 394和 98个氨基酸 ,与Ka株的同源性分别为 98.4 %和 97.6 %。DNATool和DNASIS软件对gM、gN进行二级结构预测 ,发现gM存在 8个潜在跨膜区和一个N_糖基化位点 ,是典型的能反复多次跨膜的Ⅲ型糖蛋白 ;gN具有N_端信号肽序列、C_端跨膜区和潜在 0_糖基化位点 ,属Ⅰ型糖蛋白。上述结果为下一步深入研究gM、gN的相互作用位点及二聚体的功能奠定了基础。
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- 关键词：伪狂犬病毒基因克隆
- 伪狂犬病病毒Ea株EP0基因的克隆序列分析及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2001年
- 以伪狂犬病病毒Ea株 (PRV Ea)细胞感染物为模板 ,PCR扩增出 1.2 3kb的EP0基因完整编码区片段 ,将该基因片段克隆到 pBluescriptⅡsk +中并构建三个测序质粒 ,双脱氧末端终止法序列测定并同国外InFh株进行同源比较 ,发现PRV EaEP0基因存在多处点突变和一处缺失突变 ,但无插入突变和移码。进一步将该片段插入到原核表达载体 pET 2 8a的His Tag下游 ,构建的原核表达质粒pETEP0在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了高效表达 ,SDS PAGE结果显示 ,表达的蛋白分子量为 6 2kD ,并形成包涵体。Western印迹分析表明 ,该蛋白带能与Ea株野毒高免血清发生特异性反应 ,证实PRV EaEP0基因在BL2 1(DE3)中获得了正确表达 ,并且具有免疫学活性。为今后深入研究该基因的功能奠定了基础。
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- 关键词：伪狂犬病病毒
- 表达绿色荧光蛋白伪狂犬病病毒转移载体的构建及转移特性被引量：16
- 2001年
- 对含伪狂犬病病毒 ( PRV)鄂 A株 g G全基因 ,PK、g D基因部分编码序列的质粒 p USK进行改造 ,消除其中的 Eco R 位点 ,将通过 PCR扩增的增强绿色荧光蛋白基因 ( EGFP)融合到 g G启动子下游 ,构建了由 g G启动子控制 EGFP表达的 PRV转移载体 pg G- /EGFP+。该转移载体单独转染或同 PRV基因组 DNA共转染 IBRS-2细胞 ,结果单独转染时 EGFP不能表达 ;共转染时 ,6 h就可在荧光显微镜下观察到明显的荧光。
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- 关键词：绿色荧光蛋白伪狂犬病病毒
