胡芳
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：东华大学生物科学与技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 不依赖天然外显子的蛋白质内含子定向进化筛选系统被引量：1
- 2013年
- 蛋白质剪接技术为在蛋白质水平上直接对蛋白质进行修饰和加工提供了一种全新的解决方案,因而在蛋白质工程及相关领域具有非常广阔的应用前景。现阶段,大部分天然的蛋白质内含子在异源蛋白质中剪接活性非常低,极大限制了蛋白质内含子的开发和应用。为了开发一个可以同时对蛋白质内含子通用性和剪接活性进行筛选的系统,利用Bsa I限制性内切酶识别位点和切割不重合的特性,将Ter ThyX内含子(不含外显子序列)插入到卡那霉素抗性蛋白基因的多个位点。并且摒弃了以往需要结合天然外显子以实现剪接的方法,可以同时对蛋白质内含子的剪接活性和通用性进行筛选。Western blot结果和卡那霉素平板生长结果表明,通过卡那霉素筛选系统可以精确的将蛋白质内含子剪接反应与卡那霉素抗性结合起来,仅从卡那霉素平板上的菌落生长情况即可完成蛋白质内含子剪接活性阳性突变的筛选,是一个快速,稳定的定向进化筛选系统。
- 邱沛然胡芳林瑛孟清
- 蛋白质反式剪接体系（protein trans-splicing system）的建立
- 蛋白质内含子（Intein）是镶嵌在宿主蛋白质序列中的插入序列,在宿主蛋白质翻译成熟过程中自我剪切去掉的蛋白质序列。蛋白质这一成熟过程称之为蛋白质的剪接（Protein Splicing）。在蛋白质剪接过程中,蛋白质内含...
- 胡芳徐玲玲齐兴酶刘相钦孟清
- 文献传递
- PRP8蛋白质反式剪接系统的建立被引量：5
- 2009年
- 真菌病原体Cryptococcus neoformans AD血清型剪接体蛋白PRP8蛋白质内含子是目前发现的第2个存在于真核生物体核基因组中的蛋白质内含子.它的宿主基因prp8编码的PRP8蛋白作为剪接体的1个组分,是1个高度保守的mRNA剪接蛋白.将组氨酸标签插入克隆自真菌病原体Cryptococcus neoformans AD血清型的PRP8蛋白质内含子中,并将该蛋白质内含子进行人工断裂,获得断裂蛋白质内含子,在大肠杆菌中鉴定其剪接活性.研究结果表明:所获得的改造型蛋白质内含子均表现出高效的剪接活性.利用此Cryptococcus neoformans AD血清型PRP8断裂蛋白质内含子,成功构建了蛋白质反式剪接系统.这一反式剪接系统可用于其他蛋白质的连接与合成,有望成为蛋白质工程中的一种有用工具.
- 胡芳孟清
- 关键词：蛋白质内含子
- 异源宿主中蛋白质内含子剪接活性的定向进化
- 蛋白质内含子/(intein/)是存在于宿主蛋白质前体中的一段多肽序列。它能够催化自身从蛋白质前体中剪切下来,同时将两侧多肽序列以肽键相连。这种翻译后的加工过程称为蛋白质剪接/(protein splicing/)。蛋白...
- 胡芳
- 关键词：蛋白质内含子蛋白质剪接定向进化易错PCR卡那霉素抗性
- 文献传递
