针对诺如病毒Ⅱ型的保守区域设计引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测诺如病毒Ⅱ型的反应体系。此方法的病毒检测下限达到10^2拷贝,标准曲线的线形范围为10^2-10^6拷贝,相关系数为0.9952,斜率为-2.982,截距为35.84。对诺如病毒Ⅱ型检测特异,与轮状病毒、腺病毒、甲肝病毒、星状病毒无交叉反应。针对质粒标准品检测的批内试验变异系数（CV）为0.95%-1.69%（n=5）,批间试验CV为0.87%-1.24%（n=3）。运用此方法随机检测30份贝类水产品,检测出2份阳性样品。结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测诺如病毒Ⅱ型的方法灵敏、特异、重复性好,可应用于贝类水产品的快速检测。
目的建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术测定HIV-1前病毒载量方法,并以其观察相关病毒进入抑制剂对HIV-1前病毒的作用。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR测定HIV-1前病毒载量的体系,并以其观察6μg/ml^6 ng/ml的重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)、逆转录酶抑制剂(AZT)、膜融合抑制剂(T-20)、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20对HIV-1前病毒载量的影响。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101Copies,其标准曲线的相关系数为0.998 9,斜率为-4.925,截距为35.70;除6ng/ml的rvMIP、AZT、T-20外,三种药物处理后HIV-1前病毒载量均显著减小(P<0.05),并呈质量浓度依赖性;联合用药者前病毒载量显著低于单用rvMIP者(P<0.05),HIV-1前病毒载量rvMIP+T-20(rvMIP+AZT(rvMIP(T-20(AZT。结论本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有灵敏、快速、准确及成本低廉等优点;与T-20或AZT联用可增强rvMIP对HIV-1前病毒的抑制作用。
