连敏
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
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- 博来霉素和内毒素对鼠肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响
- 2019年
- 目的探讨博来霉素(BLM)和内毒素(LPS)对肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响及可能机制。方法分离、鉴定新生SD大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、BLM组和LPS组。实验组加入不同浓度梯度的BLM(0.0001、0.001、0.01、0.1、1 mg/L)和LPS(0.01、0.1、1、10、100 mg/L)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白含量。根据MTT结果进一步将BLM/LPS组分为低浓度组(分别为0.001、0.1 mg/L)和高浓度组(分别为1、10 mg/L),并且采用蛋白质印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,透射电镜观察细胞超微结构,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。结果HE染色显示原代培养的细胞呈成纤维细胞典型的纺锤形,免疫组织化学法鉴定示波形蛋白表达阳性。与对照组相比,在一定浓度范围内,BLM组和LPS组细胞增殖增高(P<0.05),且前者更显著;在较低浓度时,BLM组TGF-β1含量明显增高(P<0.05),随着浓度的增加,TGF-β1含量减少(P<0.05);而LPS各组TGF-β1含量比较差异无统计学意义。BLM/LPS低浓度组α-SMA蛋白表达增多(P<0.05);高浓度组α-SMA蛋白表达均明显减少(P<0.05),BLM组更显著。透射电镜显示,BLM低浓度组可见细胞核呈分叶状;BLM高浓度组细胞器明显水肿;LPS低浓度组和高浓度组均可见水肿的细胞器及分叶状细胞核。单细胞凝胶电泳结果显示,BLM与LPS低浓度组均可见明显彗星尾,二者彗星尾长差异无统计学意义;高浓度组彗星尾长进一步增加,且BLM组更明显。结论在一定浓度范围内,BLM和LPS均可促进肺成纤维细胞增殖及表型转化,且前者作用明显强于后者;BLM和LPS均可致不同程度的肺成纤维细胞DNA损伤,这可能与肺成纤维细胞不同程度增殖及表型转化有关。
- 连敏彭刚强叶燕青
- 关键词：博来霉素内毒素类
- 蛋白酶体抑制剂MG-132对肺癌A549细胞转分化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对肺癌A549细胞转分化的影响.方法 将肺癌A549细胞分为对照组（加入磷酸盐缓冲液）、T组[加入5 μg/L转化生长因子（TGF）-31]、M组（加入2.5μmol/LMG-132）、T＋M组（加入2.5 μmol/L MG-132孵育30 min后再加入5μg/L TGF-31）.倒置显微镜下观察各组培养24h后细胞形态的变化;采用免疫组织化学法检测各组细胞钙黏附蛋白E、波形蛋白、磷酸化Smad2/3蛋白及SnoN蛋白表达.结果 对照组细胞为上皮细胞所特有的铺路石样,T组细胞形态转变为梭形、纺锤形,T＋M组与M组细胞形态同对照组比较无明显差异.T组钙黏附蛋白E表达明显低于对照组、M组及T＋M组（0.144 ±0.046比0.347±0.019、0.352±0.020、0.332±0.017）;波形蛋白及磷酸化Smad2/3蛋白表达明显高于对照组、M组及T＋M组（0.483±0.063比0.130±0.034、0.134±0.015、0.166±0.011;0.367 1±0.016 9比0.073 3 ±0.000 6、0.071 3±0.000 8、0.108 5±0.002 2）;SnoN蛋白表达高于对照组和M组（0.343 7±0.013 2比0.1530±0.0027、0.161 0±0.005 7）.结论 MG-132可抑制TGF-β1诱导的A549细胞转分化,可能机制是MG-132下调磷酸化Smad2/3蛋白的表达以及上调SnoN蛋白的表达.
- 韩晓叶燕青汪甜连敏潘庭静
- 关键词：蛋白酶体抑制剂A549细胞
- 新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定被引量：7
- 2014年
- 探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定.用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺成纤维细胞,并纯化细胞,对肺成纤维细胞进行形态学观察,用HE染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线.倒置相差显微镜下观察选用改良法获得的细胞,3d后可见组织块周边有少许细胞,5d后组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,10d接近融合.经改良后的方法纯化细胞,细胞活性状态较好的为3～5代,5代以后的细胞增殖能力下降.对第3代肺成纤维细胞进行HE染色,镜下可见形态典型的成纤维细胞,免疫组化结果显示波形蛋白(Vi-mentin)阳性表达,细胞角蛋白(cytokeratin)阴性表达.MTT法检测第3代细胞于3～5 d处于对数生长期.胰酶消化组织块结合法是一种可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化的培养方法,使用这种方法可得到具有典型形态特征且活性较好的肺成纤维细胞,初学者容易掌握.
- 连敏叶燕青汪甜刘冰
- 关键词：肺成纤维细胞原代培养细胞鉴定
