郭兆奎
- 作品数：29 被引量：207H指数：9
- 供职机构：中国烟草总公司更多>>
- 发文基金：国家烟草专卖局基金国家烟草专卖局科技攻关项目中国烟草总公司科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 转基因烟草荧光定量检测方法研究被引量：17
- 2005年
- 依据实时定量PCR原理,参照35S启动子、NOS终止子、GUS基因和NPTII基因序列设计TaqMan引物和荧光标记探针。采用美国MJ公司OpticonTM2荧光定量PCR检测系统对烤后烟叶进行转基因定量检测技术研究,从中筛选出扩增效率高,灵敏度好的PCR引物和探针序列,同时通过对扩增体系,扩增条件的梯度实验,优化出荧光定量检测的最佳反应体系和反应条件,从而建立了转基因烟草定量检测方法。该方法经验证其检测灵敏度达到0.05％。在2003年6月参加CORESTA(国际烟草科研与合作中心)组织的国际烟草转基因定量检测合作试验中,该优化转基因烟草定量检测技术获得了较好成绩,对盲检样品检测结果评价(Z-score)列国际12家实验室之首,证明此法灵敏度高、稳定性好。
- 郭兆奎颜培强万秀清李丽杰杨谦
- 关键词：转基因烟草引物探针PCR
- 拟南芥K^+转运蛋白AtKup1基因的DNA改组被引量：4
- 2006年
- 采用同源重组法制备钾离子转运蛋白基因TRKI和TRK2缺失的酿酒酵母钾营养缺陷型。通过RNA反转录PCR方法从拟南芥幼根扩增获得片段长度为2 139bp的AtKup1基因,以此片段为膜板,采用DNA重排技术,经DNase I降解,Primerless PCR和Primer PCR建立AtKup1基因突变库。将突变库和未经DNA重排处理的AtKup1基因分别构建酵母穿梭载体,并导入K+转运蛋白基因TRK1和TRK2缺失的酿酒酵母中,分别在低钾(5．0mmoL／L KC1)不合色氨酸的培养基上筛选转化子,从突变基因库酵母转化子中获得2株长势明显优于AtKup1基因转化子的突变基因转化菌株,菌株质粒上的突变AtKup1基因核苷酸测序结果表明突变基因AtKup1发生了2个碱基的置换,造成了2个氨基酸的改变。转化烟草烟叶化学成分分析证实突变基因的吸钾活性显著提高。
- 郭兆奎杨谦姚泉洪万秀清颜培强
- 关键词：DNA改组
- 拟南芥AVP2基因转化烟草中吸钾相关基因的转录分析被引量：4
- 2008年
- 【目的】了解无机焦磷酸酶对植物钾吸收和相关基因表达的作用。【方法】反转录克隆拟南芥无机焦磷酸酶基因(H+-PPase)AVP2,构建植物表达载体,采用根癌农杆菌介导法将其导入烟草品种K326,经分子鉴定,提取转化烟苗幼根RNA,反转录后,应用荧光定量PCR分析外源基因AVP2和烟草钾通道基因NKT1、钾离子转运体基因NtHAK1、细胞质膜H+-ATPase基因NHA1、液泡膜H+-ATPase基因VAG1和液泡膜H+-PPase基因NVP1的mRNA转录水平,并测定转化烟草叶片的内在化学成分。【结果】获得了GUS染色和AVP2序列PCR扩增呈阳性的卡那霉素抗性转化烟草11株。经Southern杂交鉴定,证实AVP2基因已成功导入烟草,在转化烟草幼根中可以检测到外源基因AVP2的mRNA,证实该基因已整合到烟草基因组并成功表达;与未转化烟草相比,烟草钾离子转运体基因NtHAK1的转录水平显著增加,钾通道基因NKT1的转录稍有增加,而烟草液泡膜H+-ATPase基因VAG1和液泡膜H+-PPase基因NVP1的转录有所降低,烟草细胞质膜H+-ATPase基因NHA1无显著变化;转化烟草材料烟叶K+含量较对照显著增加,而烟碱、还原糖等其他内在化学成分无显著变化。【结论】无机焦磷酸酶基因参与植物的K+吸收。
- 郭兆奎杨谦颜培强万秀清
- 关键词：转基因烟草转录
- HAL1基因转化烟草提高烟叶含钾量研究被引量：13
- 2006年
- 提取酿酒酵母总RNA进行RT-PCR反转录,根据HAL1基因(GeneID:856113)序列设计阅读框引物,对反转录产物进行PCR扩增,并进行全序列测定,构建筛选标记为带内含子的Km抗性基因的植物双元表达载体,经根癌农杆菌介导法将HAL1基因导入烟草品种龙江911和K326中,进行卡那霉素抗性筛选、GUS染色、目的基因扩增和HAL1基因mRNA荧光定量PCR检测,并对T1代各转化烟草材料烟叶含钾量进行化验分析。测序结果证实PCR扩增得到的DNA与酿酒酵母HAL1基因序列相同,获得抗卡那霉素、GUS阳性的转化植株12株。经PCR扩增检测证实HAL1基因已整合入转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析结果表明HAL1基因已在烟苗根系表达,烟叶含钾量化验结果证明HAL1基因可使烟叶含钾量提高30%。
- 郭兆奎杨谦姚泉洪万秀清颜培强
- 关键词：酿酒酵母烟草
- 根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化方法被引量：14
- 2004年
- 利用根癌农杆菌介导转化系统，成功实现了丝状真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的遗传转化，转化率约为60～190个转化子／10^6个孢子。PCR检测和Southern杂交分析表明，T-DNA已整合进木霉菌基因组中，而且大多都是以单拷贝的形式整合，转化子都能够稳定遗传。农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点，因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。
- 高兴喜杨谦宋金柱郭兆奎
- 关键词：根癌农杆菌木霉菌潮霉素抗性生物防治分子生物学
- TMV复制酶基因靶向的RNA干涉载体构建被引量：4
- 2008年
- 以TMV复制酶基因作为RNAi的靶向序列,应用RT-PCR法获得目的DNA序列。依据RNAi机制,以酶切后连接的方法将目的DNA序列正向、反向锚定连接到pUCCRNAi载体质粒,构建含目的序列反向重复结构的RNA干涉中间载体;反向重复结构酶切后插入含超强启动子的pC2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒经冻融法转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成双元载体系统的构建。每步的重组子经特异引物PCR验证和酶切验证有相应的特异条带存在,且测序鉴定序列正确。确认成功构建了TMV复制酶基因靶向的RNAi双元载体,为RNAi技术在植物病毒病害防治中的应用奠定基础。
- 律凤霞郭兆奎颜培强万秀清潘永明
- 关键词：RNA干涉
- 芽孢杆菌在农业生产中的应用被引量：37
- 2019年
- 芽孢杆菌是一类好氧或兼性厌氧,能产生抗逆性芽孢的革兰氏阳性细菌。具有种类多,遗传稳定性强,耐高温和抗逆性强等特性。芽孢杆菌是一类重要的资源微生物,包含许多具有特殊功能的菌株,可用于防治植物病虫害,溶解土壤中难溶的含磷化合物等,在工业、农业及医学等科学领域有着十分广泛的应用价值。本文介绍了芽孢杆菌的主要种类、作用机制和不同芽孢杆菌的功能,分析了目前芽孢杆菌应用在农业生产中所存在的问题及今后研究发展的趋势。
- 崔晓徐艳霞徐艳霞刘俊杰郭兆奎
- 关键词：促生解磷
- 黄花烟草K^＋通道基因NKC1克隆与序列分析被引量：11
- 2008年
- 通过已知生物钾通道蛋白保守序列分析,设计兼并引物对钾饥饿处理的烟草幼根总RNA的反转录产物进行PCR扩增,分离到K+通道基因NKC1,该基因的cDNA阅读框由2481个核苷酸组成,编码的蛋白含有826个氨基酸(分子量为94.6KD),等电点为6.60;将核苷酸序列输入NCBI进行BlastX其同源序列大部分为高亲和K+转运体,与该基因同源性最高的是Solanum tuberosum钾通道基因SKT1,其氨基酸同源性为79%,预测该蛋白具有6个跨膜区域,采用同源模建方法预测了NKC蛋白活性区域的3维结构。同时,特异性转录分析发现NKC1基因在烟草幼根、叶片和花各器官均有表达,而以幼根组织中转录量最多;缺钾处理可显著诱导根系中NKC基因的转录,而高浓度NH4+处理对该基因的转录具有抑制作用,证实NKC基因在黄花烟草的钾吸收过程中起着重要作用。
- 郭兆奎杨谦颜培强万秀清
- 关键词：黄花烟草钾通道转录
- 转录因子CBF基因转化烟草抗寒性指标的检测被引量：4
- 2009年
- 为了解棉花转录因子CBF基因转化烟草的抗寒性,将苗龄21 d的转基因及其野生型T2代烟苗进行0、-1、-2、-3、-4℃低温处理4 h,分别进行各处理材料的电解质渗透率、丙二醛含量和可溶性糖含量的检测。结果表明转基因烟草的电导率和丙二醛含量均低于非转基因烟草,而转基因烟草的可溶性糖含量高于非转基因烟草。证实转CBF基因可以提高烟株的抗寒性。
- 沙丽娜郭兆奎万秀清程红梅
- 关键词：转基因烟草CBF基因抗寒性
- CBF4基因植物表达双元载体的构建被引量：3
- 2009年
- 目的:对拟南芥CBF4基因序列进行克隆。方法:用限制性内切酶将CBF4基因从pMD18-T CBF4载体上切下,定向连接到含超强启动子的pC2301-35S-OCS表达载体上,成功构建了CBF4基因植物表达载体pC2301-35S-OCS-CBF4。利用冻融法将此表达载体导入只含辅助质粒的根癌农杆菌中,提取转化质粒,经PCR扩增和酶切验证鉴定表明。结果:CBF4基因植物表达双元载体构建成功。结论:转CBF4基因烟草的抗寒性比野生型烟草要高。
- 沙丽娜郭兆奎万秀清颜培强刘丹刘磊
- 关键词：植物表达载体抗寒性
