陈灰
- 作品数：15 被引量：61H指数：6
- 供职机构：吉林大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 几种方法纯化小鼠腹水IgG2b类单抗的比较被引量：2
- 2011年
- 分别采用硫酸铵-蛋白A亲和层析法、改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法、辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化小鼠腹水IgG2b类抗体。经SDS-PAGE和间接ELISA分析纯化产物的纯度及其活性。结果表明:3种方法纯化后的单抗的免疫活性均未降低;纯化后单抗的亚类为IgG2b;经改进后的硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类抗体纯度可达到87.1%;经辛酸-硫酸铵-蛋白A亲和层析法纯化制备的IgG2b类单克隆抗体纯度可达到100%,是一种制备高纯度小鼠腹水IgG2b类单克隆抗体简便而有效的方法。
- 杨威李小兵刘国文王哲孔涛张燚刘磊唐佳佳李东娜陈灰
- 关键词：单克隆抗体
- SREBP-1c基因重组腺病毒的构建及其在犊牛原代肝细胞中的表达
- 2013年
- 将携带有化学合成的SREBP-1c基因的质粒先用XbaⅠ酶切,Klenow补平突出末端,纯化回收后再用HindⅢ酶切,切胶回收目的基因片段;并将其克隆至用EcoRⅤ/HindⅢ酶切回收的pShuttle-EGFP-CMV(-)TEMP穿梭载体上。经酶切鉴定后,重组穿梭质粒和腺病毒pAdxsi质粒分别用I-CeuⅠ+I-SceⅠ双酶切处理,T4DNA连接酶连接,获得重组质粒pAdxsi-GFP-SREBP1c,酶切鉴定后经Pac I酶切线性化转染HEK293细胞,经包装扩增后用TCID50测定病毒滴度。以重组腺病毒感染犊牛原代肝细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达量。结果显示,重组腺病毒酶切鉴定正确,滴度可达1.2×1010,腺病毒感染犊牛原代肝细胞中SREBP-1cmRNA和蛋白的表达显著升高。结果表明,本试验成功构建了SREBP-1c基因过表达重组腺病毒,且SREBP-1c在犊牛原代肝细胞中高度表达。
- 杨文涛丁红研付世新邓清华宋玉祥史晓霞张璐莹张仁和郭立辉刘芳宁刘兆喜李心慰陈灰张良赵晨旭李小兵王哲
- 关键词：SREBP-1C重组腺病毒
- 黄曲霉毒素B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立
- 2014年
- 本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法。以辣根过氧化物酶催化鲁米诺一过氧化氢一对碘苯酚作为发光体系，通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线。
- 张良陈灰韩盈盈
- 关键词：黄曲霉毒素B1
- 围产期奶牛瘤胃微生物区系的变化及其对瘤胃挥发性脂酸含量的影响
- (目的)本研究主要分析围产期奶牛、酮病奶牛和非围产期健康奶牛瘤胃微生物区系的变化及其对瘤胃挥发性脂肪酸含量的影响。(方法)选取围产期奶牛、酮病奶牛和健康非围产期奶牛(各7头)，应用末端限制性片段长度多态性分析和荧光定量P...
- 王晓旭赵晨旭陈灰刘兆喜杨文涛李心慰王建国刘国文王哲
- 关键词：瘤胃微生物能量负平衡挥发性脂肪酸
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- 黄曲霉毒素B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立被引量：8
- 2013年
- 本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法。以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚作为发光体系,通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线。所建方法的线性范围为0.31～20μg/L,相关系数R2=0.992 7,灵敏度为0.09μg/L,处理内和处理间变异系数分别小于9.79%和13.08%,样品加标回收率为70.3%～100.85%。采用所建立的方法对10份玉米样品进行检测,检测结果与进口ELISA试剂盒的相关系数为0.831。结果表明本研究所建的方法可用于实际样品的检测。
- 张良陈灰韩盈盈丁红研杨威刘磊唐佳佳刘国文王哲李小兵
- 关键词：黄曲霉毒素B1玉米
- 肉牛亚急性瘤胃酸中毒血液学及生化指标变化分析被引量：6
- 2013年
- 为了解肉牛发生亚急性瘤胃酸中毒时血液学和相应生化指标的变化,对瘤胃液pH在5.2～5.5、5.6～5.8和5.9～6.8之间的24头肉牛进行了血液学及相应生化指标的分析。结果表明:随着pH值的降低,血液中红细胞(RBC)数量、血红蛋白(Hb)浓度、红细胞压积(PCV)均显著增加;白细胞(WBC)总数上升,白细胞分类(WBC-DC)也有相应的变化,嗜酸性粒细胞和淋巴细胞呈下降趋势,中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞呈上升趋势,单核细胞略微升高;血气指标pO2显著增加,pCO2、HCO3-浓度显著减少;生化指标Ca2+、Cl-显著减少,Na+和尿素氮显著增加,K+差异不显著。肉牛发生轻度和中度亚急性瘤胃酸中毒时,pCO2以及HCO3-含量显著降低,表明机体碱储备不足,缓冲能力下降,存在代偿性酸中毒;同时根据水合状态和血象指标,表明亚急性瘤胃酸中毒病牛存在轻度脱水和炎性反应。
- 赵晨旭王晓旭孙国权张良陈灰杨文涛刘兆喜王哲刘国文
- 关键词：肉牛亚急性瘤胃酸中毒血液学指标生化指标
- 奶牛酮病的研究进展被引量：20
- 2012年
- 奶牛酮病是围产期奶牛常见的由碳水化合物和脂肪代谢紊乱引起的一种群发性代谢病,该病主要以酮血症、酮尿症、酮乳症为特征,常表现为低血糖症、血浆中游离脂肪酸升高、脂肪肝、糖原水平下降等。酮病多发于高产奶牛,可对奶牛业造成巨大损失,及时有效地预防和治疗奶牛酮病对提高奶牛养殖业水平具有重要意义。
- 刘兆喜朱晓岩王建国王晓旭李心慰陈灰杨文涛刘国文
- 关键词：奶牛酮病能量负平衡
- 奶牛载脂蛋白B100基因克隆及原核表达
- 2012年
- 本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛选的阳性克隆经IPTG诱导。SDS-PAGE初步分析表明,成功获得分子质量为35ku的蛋白质;Western blotting结果呈阳性,表明通过本试验成功获得了目的蛋白。
- 张加力王力杨文涛丁红研张良陈灰刘兆喜赵晨旭王哲李小兵
- 关键词：APOB100基因克隆原核表达
- 脂联素对犊牛肝细胞脂氧化关键酶表达的影响被引量：11
- 2012年
- 体外原代培养犊牛肝细胞,添加0、16、64和128μg/L脂联素(adiponectin,ADPN),分别培养4、8h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法,检测脂氧化关键酶脂酰辅酶A氧化酶(ACO)、肝脏脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肉碱脂酰转移酶-Ⅰ(CPTⅠ)、肉碱脂酰转移酶-Ⅱ(CPTⅡ)mRNA表达变化。结果显示,在ADPN作用4h后,ACO、L-FABP、CPTⅠ、CPTⅡ基因mRNA水平均随ADPN浓度的增加而增加,且均显著高于对照组,呈剂量依赖关系;作用8h时,ACO表达也增加,但差异不显著,L-FABP在中高剂量组显著高于对照组,CPTⅠ和CPTⅡ在各ADPN处理组均显著高于对照组。结果表明,ADPN可显著促进脂氧化关键酶的表达,增强肝脏脂氧化作用,减少肝脂储存。
- 陈灰张良李心慰白鸽刘兆喜杨文涛赵晨旭邓清华王晓旭王建国刘国文王哲
- 关键词：脂联素肝细胞
- 脂联素激活AMPK信号通路调控奶牛肝细胞脂代谢的相关机制
- 脂联素（Adiponectin，ADPN）是一种脂肪组织分泌的血浆高浓度细胞因子，在提高胰岛素敏感性和对代谢紊乱的良性调控方面发挥重要的作用，尤其是对肝脏脂代谢的调节。然而，ADPN调节奶牛肝细胞脂代谢的机制还不清楚。因...
- 陈灰
- 关键词：脂联素脂代谢
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