韩稳琦
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体的构建及表达
- 2015年
- 目的构建先天性长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体p EGFP-C2-HERG,并检测其于活体细胞中表达及定位。方法采用限制性内切酶双酶切法和基因重组技术将HERG基因片段构建到真核表达载体p EGFP-C2中,通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证;构建成功的p EGFP-C2-HERG真核表达载体用脂质体转染法转染HEK293细胞后通过蛋白免疫印迹法再次鉴定重组蛋白的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察其荧光蛋白表达及定位。结果琼脂糖凝胶电泳证实新构建的真核表达载体p EGFP-C2-HERG碱基大小正确,DNA测序提示HERG基因碱基序列与模板一致,新构建表达载体成功转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达。结论成功构建p EGFP-C2-HERG真核表达载体,转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达通道蛋白;此方法构建的表达绿色荧光的真核表达载体为药物筛查、突变型基因的研究奠定了基础。
- 韩稳琦李国良程功吕颖武金娥蒋永荣孙超峰
- 关键词：遗传性长QT综合征HERG基因基因重组蛋白表达
- HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用
- 2016年
- 目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测IHERG电流密度。结果野生组HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型HERG蛋白多于突变体,野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型HERG135ku及155ku 2个条带,突变体仅60ku 1个条带。全细胞膜片钳检测WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体L539fs/47对野生型HERG电流的不完全负显性抑制作用。
- 吕颖张军波张爱峰刘仲伟王军奎韩稳琦潘军强李国良孙超峰
- 关键词：HERG无义突变HEK293细胞
- 先天性长QT综合征2型hERG基因G604S突变真核表达载体的构建和表达
- 2015年
- 目的:构建长QT综合征(LQTS)2型h ERG基因G604S突变的真核表达载体G604S-h ERG-pc DNA3、G604S-h ERG-p EGFP。方法:采用重叠延伸PCR法在p EGM-h ERG基础上构建G604S突变体PGEM-h ERG-G604S,通过限制性内切酶法和基因重组技术将突变体插入到真核表达载体pc DNA3和p EGFP-C2中并测序验证,用脂质体转染法将G604S-h ERG-p EGFP转染至HEK293细胞并观察其荧光表达。结果:构建的含有突变位点的真核表达载体经DNA测序均成功验证h ERG基因1 810位点碱基G突变为A,构建的G604S-h ERG-p EGFP在HEK293细胞中成功表达绿色荧光。结论:成功构建h ERG基因G604S-h ERG-pc DNA3和G604S-h ERG-p EGFP表达载体。
- 韩稳琦霍建华李国良蒋永荣武金娥孙超峰
- 关键词：先天性长QT综合征HERG基因突变真核表达载体
- 细胞外钾对HERG基因无义突变L539fs/47表达的调控被引量：1
- 2016年
- 目的:研究持续细胞外钾对野生型HERG与其突变体L539fs/47蛋白表达的影响。方法:用脂质体转染法将野生型HERG(WT)及其突变体HERG-L539fs/47(MT)分别转染HEK293细胞36 h后,0.8、4.3及10mmol/L的钾干预6 h,流式细胞术检测HERG蛋白表达量;干预12 h用激光共聚焦成像和免疫印迹法进行HERG蛋白定位及表达量检测。结果:用激光共聚焦成像检测发现野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体L539fs/47蛋白大部分滞留胞浆;并且HERG蛋白的表达均随细胞外钾浓度升高而增多。流式细胞术结果显示细胞外高钾组荧光增多(P<0.01),WT组荧光阳性细胞百分比和荧光强度均高于MT组(P<0.05)。免疫印迹显示,不同于野生型HERG 135 kD及155 kD 2个条带,突变体仅60 kD 1个条带,3个条带均受细胞外钾影响(P<0.05)。结论:细胞外高钾增强细胞膜上野生型和突变型HERG通道蛋白的稳定性,持续低钾干预时间依赖性地减少HERG通道蛋白的表达。
- 吕颖张军波刘仲伟张爱峰潘军强王军奎潘硕韩稳琦孙超峰
- 关键词：HERG基因无义突变HEK293细胞
- 血清ACE2/Ang(1～7)与风湿性心脏瓣膜病患者心房颤动发生的相关性分析被引量：4
- 2016年
- 目的分析风湿性心脏瓣膜病患者血清ACE2/Ang（1~7）的浓度与心房颤动发生之间的相关性,探讨ACE2/Ang（1~7）在风湿性心脏瓣膜病房颤发生中的作用,探寻房颤的预防及治疗的新靶点。方法收取风湿性心脏瓣膜病患者[46例,其中心房颤动（AF）组24例,窦性心律（SR）组22例]基本临床资料及外周静脉血,用ELISA法检测血清中ACE2、Ang（1~7）、AngⅡ的浓度,分析两组间的差异及相关性。结果 AF组可见以下改变：1左心房直径明显大于SR组[（60.70±3.08 vs.48.15±2.16）mm,P〈0.05];2血清AngⅡ浓度[（45.88±2.87 vs.35.78±1.08）pg/mL,P〈0.05]明显高于SR组,同时AngⅡ与左心房直径呈正相关（Pearson检验,P〈0.05）;3血清ACE2浓度[（7.87±0.74 vs.11.65±0.57）U/L,P〈0.05]及Ang（1~7）浓度[（146.05±17.61 vs.321.71±36.50）pg/mL,P〈0.05]显著低于SR组,与左心房直径呈负相关（Pearson检验,P〈0.05）;4血清Ang（1~7）与AngⅡ浓度呈负相关（Pearson检验,P〈0.05）。结论在风湿性心脏瓣膜病患者中,ACE2/Ang（1~7）可能通过拮抗AngⅡ抑制心房的重构,对于房颤的发生具有保护作用。
- 蒋永荣刘如如周鑫潘军强韩稳琦武金娥孟恬宇孙超峰
- 关键词：风湿性心脏瓣膜病ACE2心房颤动
- 循环MPs对pH大鼠肺动脉舒张功能的影响
- 2015年
- 目的:探讨肺动脉高压大鼠体内循环微颗粒(MPs)对肺动脉血管舒张功能的影响,以进一步阐述肺动脉高压的发病机制。方法:雄性SD大鼠12只随机分为两组,正常对照组(C组,n=6)、MCT模型组(M组,n=6),M组大鼠按照50mg/kg剂量一次性腹腔注射野百合碱诱导肺动脉高压模型,C组大鼠一次性腹腔注射与M组等量乙醇生理盐水混合液;常规喂养20d后行右室插管测定大鼠右室收缩压(RVSP),而后采用腹主动脉采血法取血并提取MPs,将提取的MPs刺激大鼠肺动脉,观察MPs对大鼠肺动脉血管舒张功能的影响。结果:C组来源的MPs对肺动脉血管舒张功能无影响,M组来源的MPs部分抑制肺动脉的舒张功能。结论:肺动脉高压大鼠体内的循环MPs通过抑制肺动脉舒张进而加重肺动脉高压的病情进展。
- 韩稳琦陈春燕韩新源潘军强程功孙超峰
- 关键词：肺动脉血管舒张
- 盐酸吡咯列酮对动脉粥样硬化兔主动脉基质金属蛋白酶-9表达的影响
- 2013年
- 目的探讨盐酸吡格列酮对兔动脉粥样硬化斑块内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法新西兰兔36只,随机分为正常对照组、高胆固醇饮食组、高胆固醇饮食加吡咯列酮组。喂养8周后处死每组动物取出从近主动脉弓部到髂动脉分叉处全部主动脉行HE染色、Masson染色及免疫组化染色,观察兔主动脉粥样硬化程度及基质金属蛋白酶-9在各组动脉粥样硬化斑块中的表达。结果高胆固醇饮食加吡咯列酮组动脉硬化程度高于正常对照组,低于高胆固醇饮食组;高胆固醇饮食加吡咯列酮组基质金属蛋白酶-9阳性面积比明显低于高胆固醇饮食组[(39.17±3.52)%vs(49.17±9.12)%,P<0.05],高于正常对照组(P<0.01)。结论吡格列酮具有抗动脉粥样硬化的作用,可使主动脉粥样斑块内基质金属蛋白酶-9表达阳性面积水平下调。
- 姚晓伟潘军强周鑫韩稳琦李国良
- 关键词：吡格列酮动脉粥样硬化基质金属蛋白酶
- 盐酸吡咯列酮对动脉粥样硬化兔主动脉脂联素表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨盐酸吡格列酮对兔动脉粥样硬化斑块内脂联素表达的影响及其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法新西兰兔36只,随机分为对照组、高胆固醇饮食组、高胆固醇饮食加吡咯列酮组,喂养8周后处死每组动物,取出从近主动脉弓部到髂动脉分叉处全部主动脉,测量主动脉粥样硬化斑块面积、内膜厚度及内膜/中膜厚度比值;行Masson染色及免疫组化染色,观察兔主动脉粥样硬化程度及脂联素在各组动脉粥样硬化斑块中的表达。结果高胆固醇饮食加吡咯列酮组动脉粥样硬化斑块面积与动脉内膜面积比值高于正常对照组,低于高胆固醇饮食组,差异有统计学意义(P<0.05);高胆固醇饮食加吡咯列酮组内膜厚度、内膜/中膜厚度比均高于正常对照组,低于高胆固醇饮食组,差异有统计学意义(P<0.05);高胆固醇饮食加吡咯列酮组血管壁脂联素蛋白表达低于正常对照组,高于高胆固醇饮食组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吡格列酮具有抗动脉粥样硬化的作用,可使主动脉粥样硬化斑块内脂联素蛋白表达水平上调。
- 潘军强姚晓伟周鑫韩稳琦李国良孙超峰
- 关键词：吡格列酮动脉粥样硬化脂联素
- 高盐负荷上调SHR胸主动脉、肠系膜上动脉壁AT1和AT2受体表达实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的:以自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,探讨动脉血管壁胶原成分、血管紧张素Ⅱ受体(ATR)AT1和AT2亚型蛋白表达的增龄性改变及高盐负荷对它们的影响。方法:雄性SHR60只,随机分为低盐组(0.4%NaCl,n=30)和高盐饮食组(4%NaCl,n=30)干预3周,测量血压后;胸主动脉及肠系膜上动脉石蜡切片Mallory染色法观察壁纤维化程度,免疫组化SABC法测定ATR蛋白表达。结果:高盐负荷后SHR大鼠的血压呈现明显升高(P<0.05);胸主动脉和肠系膜上动脉壁Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维沉积亦随增龄增多,高盐负荷会加重这一趋势(P<0.05);高盐负荷均能显著增加动脉壁AT1和AT2表达(P<0.01),而以肠系膜上动脉壁改变较为显著,但是对AT1/AT2比值无影响(P>0.05)。结论:高盐负荷可导致SHR大鼠血管壁重塑,血管壁局部ATR的改变可能是SHR大鼠血管壁重塑的机制之一,减少盐的摄入对预防高血压动脉病变的发生和发展有着重要的意义。
- 吕颖孙超峰殷艳蓉张军波潘军强韩稳琦周鑫杨琳
- 关键词：盐类
