韩苗苗
- 作品数：5 被引量：36H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统的抗肿瘤活性被引量：3
- 2013年
- 本研究提取大肠杆菌JM109菌株的全基因组,克隆获得CD基因,将CD基因和IRES-EGFP基因构建到pEE12.4表达载体上,形成pEE12.4IE-CD真核表达载体。用该表达载体转染人肝癌细胞后,以不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)处理细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定CD/5-FC系统对人肝癌细胞HepG2的杀伤效果。当前导药物5-FC的浓度分别为10、20和30 mmol.L 1时,CD/5-FC系统对HepG2细胞的杀伤效率分别为18.07%、42.98%和62.20%,与对照组相比较差异具有统计学意义。急性毒性实验结果表明,小鼠尾静脉注射不同剂量5-FC,组间剂量比为1∶0.5,采用改良寇氏法测定5-FC对小鼠的LD50为507 mg.kg 1,95%可信限为374～695 mg.kg 1。再以LD50实验中最大LD0剂量为基准,组间剂量差值为10 mg.kg 1,测得最大安全剂量为200 mg.kg 1,并对体重、体征指标进行跟踪观察。这些检测结果可为动物实验奠定基础。将CD基因连于新城疫病毒(NDV)rClone30载体中并建立肿瘤动物模型,抑制肿瘤实验结果表明,重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统具有较高的体内抗肿瘤活性。综上所述,克隆获得的CD基因具有生物学活性,重组rClone30-CD/5-FC系统是一种潜在的治疗肿瘤的方法。
- 吕政张天援韩苗苗白福良吴伟田贵游任桂萍李德山
- 关键词：5-氟胞嘧啶新城疫病毒抗肿瘤活性半数致死量
- 快速筛选高水平稳定表达成纤维细胞生长因子-21真核细胞株新方法的建立被引量：1
- 2012年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是成纤维细胞生长因子家族的一名新成员,其研究已成为世界糖尿病研究的新热点,并有望成为治疗2型糖尿病的新型药物.然而,应用真核表达系统,更加快速、高效生产更接近天然状态的FGF-21蛋白并对其生物学功能进行的研究,至今尚未报道,因此建立高效稳定的FGF-21真核表达系统至关重要.本研究以FGF-21为目的基因,利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,分别构建了单基因表达载体Pee12.4-FGF-21-Pee6.4-EGFP(Peedual)、Pee12.4-FGF-21-IRES-EGFP(PeeIRES)和双基因的真核表达载体Pee12.4-FGF-21-IRES-EGFP-Pee6.4-FGF-21(Peedual-IRES),分别转染CHO-K1SV细胞后,通过GS加压和流式细胞术(在488 nm波长的激发光下能检测到EGFP绿色荧光)双筛选系统快速有效获得了稳定高效表达目的蛋白的细胞系.应用SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测细胞系目的蛋白的表达及差异,并通过HepG-2细胞糖吸收模型进行蛋白活性检测.研究结果表明:两个筛选系统结合使用,更好更快地筛选到了稳定转染并高效表达目的蛋白的细胞系,而且与单基因的载体相比,双基因载体Peedual-IRES在操作条件一致的情况下,目的蛋白表达量显著提高且均具有生物活性.本研究建立了省时、高效的真核表达平台,为FGF-21在真核水平上的高表达提供了一个新的方法.
- 张雅坤王文飞何昆叶贤龙刘淼韩苗苗刘铭瑶李德山
- 关键词：真核表达流式细胞术FGF-21
- FGF-21对H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用被引量：11
- 2014年
- 成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor-21,FGF-21)是机体内重要的代谢调节因子,但尚不清楚FGF-21对心血管系统的直接影响。本研究利用H2O2诱导的心肌细胞H9c2氧化应激模型,分别用MTT、流式细胞术、real-time PCR等方法评价FGF-21是否具有对抗氧化损伤引起的心肌细胞凋亡的能力及其相关作用机制。结果显示,FGF-21能提高H2O2处理后的H9c2细胞存活率,降低心肌细胞凋亡,并减少H2O2引起的ROS累积;而且FGF-21通过上调SOD活性以及调控Bcl-2/Bax的表达量,发挥抑制细胞凋亡的作用。研究结果证实,FGF-21能够保护心肌细胞免受氧化应激带来的损伤。
- 韩苗苗王文飞刘铭瑶李德山周兵于引航任桂萍
- 关键词：FGF-21心肌细胞过氧化氢氧化应激损伤
- 成纤维细胞生长因子21对胰岛素抵抗所致高血压的治疗作用被引量：9
- 2013年
- 本文研究考察成纤维细胞生长因子21(FGF21)对果糖诱导的胰岛素抵抗高血压模型的治疗作用及其机制。10%果糖诱导SD大鼠4周建立胰岛素抵抗高血压模型,成模后随机分为4组:模型对照组及FGF210.25、0.1和0.05μmol·kg-1·d-1剂量组,5只相同周龄的正常SD大鼠作为正常对照组。每天注射1次,治疗4周,给药期间每周监测大鼠体重,采用尾套法检测收缩压变化;口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素稳态评价模型检测胰岛素抵抗情况;给药结束时留取血清样本分别测定血清胰岛素、血脂、血糖水平。结果显示,治疗4周后,不同剂量FGF21治疗组大鼠收缩压均下降至正常水平[(122.2±3.5)mmHg,P<0.01],而注射生理盐水的模型对照组大鼠的收缩压在治疗期间一直维持在较高水平[(142.5±4.5)mmHg]。24 h观察各组大鼠血压发现,FGF21治疗组大鼠24 h血压基本维持在(130±4.5)mmHg,各时间段血压均显著低于模型对照组[(130±4.5)vs(143±5.5)mmHg,P<0.01]。FGF21治疗组大鼠血脂改善明显,总胆固醇与甘油三酯含量均显著下降至正常水平。FGF21各治疗组大鼠血清NO含量均显著高于模型对照组[(7.32±0.11),(7.24±0.13),(6.94±0.08)vs(6.56±0.19)μmol·L-1,P<0.01],且其改善程度呈现明显的剂量依赖性,表明FGF21可明显升高果糖诱导高血压模型大鼠血清NO含量,改善内皮释放NO功能。OGTT及HOMA-IR结果显示,经FGF21治疗4周后胰岛素抵抗亦明显得到改善,且呈现剂量依赖性。因此本研究揭示了FGF21通过改善胰岛素抵抗,显著降低SD大鼠由于胰岛素抵抗所引起的高血压。这一发现为临床应用FGF21治疗原发性高血压奠定了理论基础。
- 朱升龙任桂萍张振宇王文飞叶贤龙韩苗苗赵景壮徐彤宇刘铭瑶李德山
- 关键词：成纤维细胞生长因子21胰岛素抵抗高血压果糖
- FGF21对MSG胰岛素抵抗小鼠的非酒精性脂肪肝的治疗作用及其机制研究被引量：12
- 2013年
- 研究成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对谷氨酸钠(MSG)肥胖小鼠非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的治疗作用及其作用机制。实验分为正常对照组、模型对照组、高剂量FGF21治疗组和低剂量FGF21治疗组。给药5周,给药期间每周监测小鼠体重,给药结束时测定血脂和血清胰岛素及转氨酶含量。Real-time PCR方法检测肝脏和脂肪组织内能量代谢调节关键基因表达。结果显示,治疗5周后,不同剂量FGF21均明显降低MSG模型体重(P<0.01),纠正其血脂紊乱(P<0.01),减轻模型小鼠的肝内脂肪变性,恢复其肝脏细胞正常形态结构,并且可显著改善MSG模型鼠胰岛素抵抗状态。因此,FGF21能显著减轻MSG肥胖小鼠体重、改善胰岛素抵抗、逆转模型小鼠的肝内脂肪变性,这一发现为临床应用FGF21治疗非酒精性脂肪肝奠定了理论基础。
- 朱升龙张振宇任桂萍叶贤龙马蕾于丹韩苗苗赵景壮张天援李德山
- 关键词：成纤维细胞生长因子21胰岛素抵抗非酒精性脂肪肝谷氨酸钠
