高玉敏
- 作品数：6 被引量：33H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 半套式PCR检测蜱中查菲埃立克体的评价被引量：1
- 2000年
- 戴庆华曹务春张习坦高玉敏张泮河
- 关键词：查菲埃立克体
- 我国部分地区蜱传斑点热分子流行病学调查研究被引量：2
- 2001年
- 目的为进一步了解我国斑点热群立克次体存在的多样性,发现可能存在的斑点热群立克次体新成员、潜在媒介和动物宿主。方法建立了扩增斑点热群立克次体190kDa rOmpA基因片段的PCR检测、鉴定方法,并用此方法检测了采自福建省和内蒙古自治区的蜱、动物和人血液标本。对扩增于越原血蜱、森林革蜱和FNH97未鉴定菌株的PCR产物采用PHYLIP软件包进行了序列分析。同时,为了寻找特异的斑点热群立克次体分类检测方法,建立了针对四种斑点热群立克次体的半巢式PCR方法,并对斑点热立克次体阳性标本进行了分类检测。结果采用 190kDa rOmpA.701/70p引物可以从7株斑点热群立克次体中的6株扩增出外膜蛋白A基因片段(小蛛立克次体除外)。并从采自福建省和内蒙古自治区的多种蜱及野生动物、人血液标本中扩增出了斑点热立克次体DNA片段,其中越原血蜱、卵形硬蜱、中华硬蜱、豪猪血蜱、森林革蜱、野鼠血块和人群血块的阳性率分别为15.69％、56.94％、8.70％、7.70％、43.56％、82.51％和0.98％。对来自越原血蜱和森林革蜱以及FNH97菌株的斑点热立克次体190kDa外膜蛋白A630bp左右核苷酸片段序列分析和推测的氨基酸序列分析结果表明:福建越原血蜱立克次体(福建立克次体)核苷酸序列与日本立克次体的该序列同源性最高(94％)。推测氨基酸序列同源性也与该立克次体最高(89％);内蒙古森林革蜱立克次体(森林革蜱立克次体)核苷酸序列与扇头蜱立克次的该序列同源性最高(97％),推测氨基酸序列的同源性也最高(95％)。遗传发育分析,这两种立克次体分别与日本立克次体和扇头蜱立克次体均为同一个分支。序列中限制性核酸内切酶的位点也显示了对应的相似性。但是它们的核苷酸和推测的氨基酸序列与康氏立克次体和西伯利亚立克次体以及内蒙古立克次体(HA-91)差别较大。�
- 张泮河张习坦曹务春许荣满陈山虎方立群陈振光李建民高玉敏高东旗杨红
- 关键词：蜱传斑点热分子流行病学斑点热群立克次体外膜蛋白A
- 福建西北林区人单核细胞埃立克体病分子流行病学调查研究被引量：5
- 2001年
- 目的了解福建西北林区人单核细胞埃立克体病的存在情况。方法评价以查菲埃立克体16S rRNA基因序列高变区构建引物进行的半套式PCR的敏感性和特异性,并用此种半套式PCR技术检测从福建武夷山市和宁化县采集的蜱类、野生动物内脏和血液及人群血液标本中的查菲埃立克体DNA,对有代表性的阳性标本的扩增产物进行克隆和序列测定,并与GenBank中注册的核苷酸序列进行同源性比较。应用以 16S rRNA基因构建的特异和通用引物进行PCR,从越原血蜱及黄毛鼠标本中分段扩增查菲埃立克体DNA,进行克隆和序列测定,分别将其连成完整序列,与已知所有埃立克体及近缘菌的16S rRNA基因序列进行最大同源性比较,用Clustal X(1.8)软件对同源位碱基作聚类分析,应用“Tree View”程序得出遗传发育树图。结果这种半套式PCR检测方法具有很高的特异性,仅能扩增查菲埃立克体DNA,而对其它蜱媒病病原体,如斑点热立克次体、莱姆病螺旋体的DNA及人粒细胞埃立克体病病原体的16S rRNA基因都不能扩增,同时,用有限稀释法以含EC 16S rRNA基因的质粒为模板评价其敏感度,结果显示:最低能检测到4个拷贝的查菲埃立克体DNA。用此半套式PCR法从该地区的越原血蜱、粒形硬蜱,鼠类(褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、社鼠、小家鼠)和野兔的脾脏和/或血块中均扩增出了查菲埃立克体的特异DNA片段。检测越原血蜱成蜱283组(659只),25组阳性,最小阳性率为3.8％。粒形硬蜱4只,1只阳性。野鼠脾脏、血块及野兔血块的阳性率分别为 56.4％(22/39)、38.7％(12/31)和18.2％(2/11)。同时检测的其它蜱种、狐狸血块、野猪血块及人血块中均未发现查菲埃立克体DNA。越原血蜱和野鼠代表性标本的390bp的PCR产物经克隆、测序后,发现其DNA序列与美国查菲埃立克体分离株对应位置分别一致和相差一个核苷酸。从越原血蜱和黄毛鼠扩增
- 高玉敏张习坦曹务春戴庆华张泮河陈振光戴晓红方立群杨红
- 关键词：查菲埃立克体野生动物分子流行病学
- 用半套式PCR检测蜱和啮齿动物中查菲埃立克体被引量：15
- 2000年
- 目的 了解福建西北部林区查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis)的存在情况。方法 用 16SrRNA基因特异引物进行半套式PCR ,检测从福建武夷山和宁化采集的蜱类及野生动物中的查菲埃立克体DNA ,然后对有代表性的标本的扩增产物进行克隆和序列测定 ,并与GenBank中注册的核苷酸序列进行同源性比较。结果 从该地区的越原血蜱 ,野鼠(褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、社鼠、小家鼠 )和野兔的脾脏和 /或血块中均扩增出了查菲埃立克体的特异片段。越原血蜱成蜱 2 40组 (6 16只 ) ,31组阳性 ,最小阳性率 5 0 %。野鼠脾脏标本 39份 ,2 2份阳性。野鼠和野兔血块标本共 35份 ,14份阳性。 390bp的PCR产物经克隆、测序后分析发现其DNA序列与美国查菲埃立克体分离株对应位置一致。结论 福建西北部林区可能存在人单核细胞埃立克体病的自然疫源地。
- 高玉敏张习坦曹务春戴庆华张泮河陈振光戴晓红方立群杨红
- 关键词：查菲埃立克体啮齿动物RRNA
- 福建西北林区人单核细胞埃立克体病人分子流行病学调查研究
- 该研究利用分子生物学技术与流行病学调查相结合,建立一套进行埃立克体感染流行 病学调查有效、可靠的方法,从传播媒介、宿主动物和易感人群三个流行环节寻找病原学依据,并测定中国蜱及啮齿动物中查菲埃立克体的16S rRNA全基因...
- 高玉敏
- 关键词：查菲埃立克体16SRRNA基因野生动物分子流行病学
- 文献传递
- 黑龙江全沟硬蜱中检测出类似人粒细胞埃利希体的病原体DNA被引量：15
- 2001年
- 目的 寻找我国蜱中人粒细胞埃利希体感染存在的病原学证据。方法 应用从人粒细胞埃利希体 16SrRNA基因构建的特异引物进行半套式PCR ,检测蜱标本中埃利希体DNA。然后对PCR扩增产物进行克隆和序列测定 ,与已知序列进行同源性比较。结果 从黑龙江采集的全沟硬蜱 (Ixodespersulcatus)中扩增出特异DNA片段 ,计算最小阳性率为 0 8%。对 919bp的扩增产物进行序列分析 ,证实为埃利希体DNA ,与美国人粒细胞埃利希体分离株对应序列比较 ,相差 4个核苷酸。结论 这是首次证明我国有类似人粒细胞埃利希体的病原体存在。
- 赵秋敏曹务春张习坦高东旗张泮河罗松发王景春于长龙高玉敏杨红
- 关键词：聚合酶链反应DNA病原体
