高锦 作品数:10 被引量:5 H指数:1 供职机构: 徐州医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 教育部科学技术研究重点项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
Pitx3基因shRNA敲除慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立 目的 构建、筛选并包装大鼠Pitx3 基因shRNA 敲除的慢病毒,建立稳定敲除Pitx3基因的黑质多巴胺能神经元MES23.5 细胞系. 亢小玉 高锦关键词:帕金森疾病 Six2基因shRNA敲减慢病毒表达载体及其稳定细胞株的构建 2014年 目的筛选并包装Six2基因shRNA敲减的慢病毒,建立稳定表达敲减Six2基因的黑质多巴胺能神经元MES23.5细胞系。方法合成三种(分别命名为p LV-sh Six2-1、p LV-sh Six2-2、p LV-sh Six2-3)含敲减Six2基因干扰序列的双链DNA oligo,并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的p LV-H1-EF1a载体质粒,均采用慢病毒包装四质粒系统(pRRE/p VSVG/pREV/p LV)包装并转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系(293T细胞)以获取慢病毒p LVsh Six2。收集敲减Six2基因的p LV-sh Six2-1、p LV-sh Six2-2、p LV-sh Six2-3慢病毒质粒及对照质粒上清,感染黑质多巴胺能神经元细胞(MES23.5细胞),分别设为p LV-sh Six2-1组、p LV-sh Six2-2组、p LV-sh Six2-3组及对照组,Western blot法检测各组细胞Six2蛋白表达,鉴定各组Six2干扰序列的敲减效果。嘌呤霉素法筛选稳定敲减Six2的MES23.5细胞株。结果酶切结果表明在262 bp及约9 000 bp处分别有明显条带,测序结果显示所测序列与敲减的Six2干扰序列完全一致。Western blot结果显示干扰序列sh Six2-2对应的细胞中Six2蛋白表达显著降低,sh Six2-1和sh Six2-3蛋白表达降低效果不明显。用嘌呤霉素筛选病毒感染的p LV-sh Six2-2组细胞系成功。结论成功构建并筛选了Six2基因shRNA敲减慢病毒表达载体,建立了稳定敲减Six2基因的MES23.5细胞株。 高锦 亢小玉关键词:胶质细胞系源性神经营养因子 慢病毒 基于案例的医学院校细胞生物学教学改革初探 被引量:3 2014年 传统的细胞生物学教学往往以讲授为主,把知识全面地"灌输"给学生,不利于学生学习能力的培养。案例教学则以培养学生自己动手、动脑,发现、分析、解决问题的能力为主,逐步实现学生的自主学习。文章从围绕教学大纲,合理编写案例;从教学目标出发,体现以学生为主体的学习等具体案例初步探讨在高等医学院校细胞生物学课程中合理开展案例教学,提高教学质量。 曲学彬 张强 高锦 陈彦 姚瑞芹关键词:细胞生物学 教学改革 案例教学 脑缺血及Aβ神经毒性条件下PSD-95Y523磷酸化的研究 PSD-95(postsynaptic density-95)是膜结合鸟苷酸激酶家族亚家族中的一员,是一个锚定蛋白,又称为脚手架蛋白,通过串集谷氨酸受体及其相关信号分子,形成信号复合物,在突触后对兴奋性信号转导进行整合。... 杜彩萍 吴桂梅 谭然 彭艳 刘永 王伟 高锦 侯筱宇关键词:脑缺血 Β-淀粉样肽 兴奋性毒性 PSD-95 酪氨酸磷酸化 Calbindin-D-28k对MPTP致小鼠黑质凋亡相关蛋白Bax表达的影响 2009年 目的探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠黑质多巴胺(DA)能细胞发生凋亡时,calb ind in-D-28k(CB)抗细胞凋亡的作用机制。方法MPTP连续5天腹腔注射构建中脑黑质DA能细胞损伤的小鼠模型,模型鼠脑黑质致密部立体定位注射携带CB基因的高滴度慢病毒颗粒(CB-H IV-Ⅰ),W estern b lotting方法检测CB的在体过表达以及鼠脑黑质部位凋亡相关蛋白Bax的表达变化。结果与空白对照组(control)和黑质定位注射空病毒颗粒组(H IV-Ⅰ)相比,注射CB-H IV-Ⅰ的实验组的黑质中CB的表达量显著升高(P<0.05),而Bax的表达量明显降低(P<0.05)。结论病毒颗粒CB-H IV-Ⅰ携带的CB基因在黑质细胞中获得了高效的表达;凋亡相关蛋白Bax可能参与了CB对黑质DA能神经细胞的保护作用。 高锦 朱园园 刘美英 高殿帅关键词:细胞凋亡 BAX 对神经生物学实验教学的几点体会(摘要) 被引量:1 2009年 高锦 王婷 袁红花 姚瑞芹 高殿帅关键词:神经生物学 实验教学 立足本学科特色加强神经生物学基础知识与临床的联系(摘要) 2009年 姚瑞芹 高锦 袁红花 高殿帅关键词:神经生物学 DA能神经元慢性损伤与细胞膜GDNF受体系统表达变化的关系 高殿帅 刘美英 刘亚萍 袁红花 高锦 姚瑞芹PSD-95酪氨酸突变体真核表达载体的构建及其表达 2007年 目的构建突变型PSD-95的重组表达质粒(Y432F、Y439F、Y523F和Y533F,酪氨酸突变为苯丙氨酸),并在COS-7细胞中表达。方法以野生型PSD-95-pcDNA3.1为模板,采用重叠延伸PCR法获得突变型PSD-95的局部或全长cDNA片段,并克隆至PSD-95-pcDNA3.1或pcDNA3.1载体;以脂质体法将构建好的重组质粒转染COS-7细胞;通过免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的突变型PSD-95基因完全正确。免疫印迹显示,转染的突变型重组质粒在相对分子质量9.5×104处均有相应条带出现。结论成功构建了4个PSD-95酪氨酸残基突变体的真核表达质粒,重组质粒在COS-7细胞中高效表达。 侯筱宇 高锦关键词:PSD-95 重叠延伸PCR COS-7细胞 真核表达 研究生神经生物学实验课教学的体会(摘要) 被引量:1 2009年 袁红花 姚瑞芹 高锦 高殿帅关键词:神经生物学 实验教学