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家蝇幼虫防御素基因Mdd Ⅰ在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性鉴定: 2015年; 根据家蝇幼虫防御素基因(MddⅠ)序列,设计合成含有KpnⅠ和XbaⅠ酶切位点的特异性引物,PCR扩增出MddⅠ基因全长序列。克隆并测定序列后,构建真核表达质粒pGAPZαAMddⅠ,将其在毕赤酵母(P.pastoris)GS115中分泌表达,并对表达产物进行抑菌活性分析。结果表明,Mdd 1基因在P.pastoris如中成功表达,分子量约为10.3 kDa,抑菌结果显示MddⅠ基因的真核表达产物对猪源链球菌有抑制作用。该试验成功构建了表达MddⅠ基因的P.pastoris菌株,为进一步研究MddⅠ真核表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。; 傅小蒙万玲唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞; 关键词：家蝇防御素 P.PASTORIS

家蝇抗菌蛋白的制备及体外抑菌活性研究: 抗生素在治疗人类细菌感染及防治畜禽疾病等方面发挥了重要作用。但随着抗生素的大量及不合理应用，耐药菌株种类不断增多、数量不断上升，严重威胁了动物和人类的生命健康，研制和筛选新型抗菌制剂，一定程度上代替传统抗生素，是目前亟待...; 万玲; 关键词：家蝇抗菌肽原核表达抑菌活性; 文献传递

家蝇幼虫防御素基因MddⅠ的克隆与原核表达被引量：3: 2013年; 以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对MddⅠ基因进行扩增,对扩增产物测序和分析。构建重组表达质粒pET-32a-MddⅠ,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG对其诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果,MddⅠ基因全长475bp,其开放阅读框(ORF)276bp,编码91个氨基酸,编码蛋白的理论分子质量9.7ku,理论等电点(pI值)8.89,存在信号肽的剪切位点,亲水性较强且无明显跨膜区,α螺旋和不规则盘绕为其主要结构元件,β折叠散布在整个蛋白质中。具有Defensin-2家族保守区域,与GenBank中登录号为AY260152同源性最高,达78%。构建的重组表达质粒pET-32a-MddⅠ在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子质量约为25ku的蛋白质,与预期大小一致。结果表明,MddⅠ基因具有完整的开放阅读框,为新的家蝇防御素基因;MddⅠ基因在原核表达系统中的表达为进一步研究表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。; 万玲傅小蒙唐艳孙小宁裴志花刘树明马红霞; 关键词：家蝇防御素原核表达

家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究: 2015年; 以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。将MdL-II ORF序列插入到pET-32a(+)表达载体中成功构建重组质粒,其表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果显示约在34 ku处出现表达条带且与目的蛋白大小相符。当诱导温度为37℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时可获得大量可溶性Trx-MdL-II融合蛋白,纯化融合蛋白并进一步检测该蛋白的抑菌活性,结果表明融合蛋白对大肠杆菌和链球菌均有抑菌作用,且对大肠杆菌的抑菌作用相对较强。; 邵清唐艳万玲孔令聪裴志花马红霞; 关键词：家蝇幼虫克隆表达蛋白纯化

抗牛支原体蛋白Md‑UF1: 本发明公开了抗牛支原体蛋白Md‑UF1，它是用肺炎支原体诱导家蝇幼虫，构建了抑制性消减文库，在抑制性消减文库中筛选，得到了抗牛支原体蛋白基因<I>Md</I>‑UF1，表达了抗牛支原体蛋白Md‑UF1，经实验证明，对抗牛...; 马红霞万玲孔令聪刘树明高铎; 文献传递

家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：3: 2014年; 采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Genbank中登录号为AY344589.1基因同源性为96%。构建重组表达质粒pET-32a-MdL-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,表达产物大小约为34 kD,与预期蛋白大小一致。结果表明,利用RACE技术克隆得到MdL-1全长基因并在大肠杆菌中获得了表达,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。; 王梅梅万玲孔令聪裴志花刘树明马红霞; 关键词：家蝇克隆原核表达

抗牛支原体蛋白Md-UF1: 本发明公开了抗牛支原体蛋白Md-UF1，它是用肺炎支原体诱导家蝇幼虫，构建了抑制性消减文库，在抑制性消减文库中筛选，得到了抗牛支原体蛋白基因Md-UF1，表达了抗牛支原体蛋白Md-UF1，经实验证明，对抗牛支原体蛋白Md...; 马红霞万玲孔令聪刘树明高铎

猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库中无同源基因的原核表达与活性分析: [目的]从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中克隆到一个无同源差异基因(Musca dom-estica no homologous gene,Md-N),并在大肠杆菌中表达,以期从家蝇体内寻找具有抗猪肺炎...; 万玲唐艳孙小宁傅小蒙马红霞; 关键词：家蝇活性

家蝇基因工程抗菌肽的研究进展被引量：5: 2013年; 利用基因工程技术获取家蝇抗菌肽能克服传统方法产量低、耗时长、无法实现大规模生产等缺点,是目前获取家蝇抗菌肽最为有效的方法。对家蝇基因工程抗菌肽的分类、编码基因的获得和表达以及生物活性方面进行了综述,以期为兽医临床早日研制出高效、低毒且不易产生耐药性的新兽药提供参考。; 万玲王梅梅孔令聪裴志花刘树明马红霞; 关键词：家蝇抗菌肽基因工程生物活性

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万玲