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猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救: 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建...; 李俊于周徐绍建程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆; 文献传递

猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析被引量：2: 2009年; 对PCV2 SD2株(DQ478947)进行了序列分析发现,其含有11个开放阅读框,与以往分离株开放阅读框有较大差异。根据GenBank发表的PCV2序列设计特异性引物,扩增ORF3基因,预计扩增片段大小为209 bp。分别在接毒后12、24、364、8 h,用Trizol法自病毒细胞裂解液提取总RNA,然后用DNase I处理,除去残留的病毒DNA,利用醋酸纤维素分离mR-NA,用上述引物进行RT-PCR扩增。在接毒24 h后扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与PCV2 SD2(DQ478947)ORF3基因序列相符。由此证实,PCV2山东分离株ORF3基因可在接毒24 h后于转录水平表达,为ORF3基因的深入研究打下了基础。; 丁鹏李俊于周程凯慧吴家强王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF3基因转录分析

含CpG基序系列猪圆环病毒核酸疫苗的构建被引量：4: 2008年; 人工合成了系列含有1～24个长度不等、序列不同的CpG-ODN基序,经MluⅠ单酶切、连接后插入到已构建好的真核表达载体pVAX1-ORF2的骨架结构中。酶切及测序结果证实,所构建的系列载体正确,表明已经成功构建了系列含有CpG-ODN的表达ORF2编码蛋白的重组质粒pVAX1-ORF2-CpG,为进一步优化和筛选最佳猪圆环病毒核酸疫苗奠定了基础。; 程凯慧李俊于周周顺王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型核酸疫苗

猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救被引量：8: 2009年; 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。; 李俊时建立于周徐绍建丁鹏程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆

猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定被引量：9: 2009年; 于周李俊程凯慧时建立吴家强温建新王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型多系统衰竭综合征猪皮炎肾病综合征毒株繁殖障碍 PMWS

抗新城疫病毒HN蛋白单抗可变区基因的克隆与序列分析被引量：3: 2008年; 提取抗新城疫HN蛋白单克隆抗体C3-B7杂交瘤细胞总RNA,进行RT-PCR,扩增出轻重链可变区基因。凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,筛选出阳性重组子,菌液PCR鉴定后进行测序。结果显示,VH基因全长357 bp,编码119个氨基酸;VL基因全长332 bp,编码110个氨基酸。这为单链抗体的构建及表达奠定了基础。; 路希山黄艳艳胡北侠李士娟于周李相钊王金宝张秀美; 关键词：新城疫病毒 HN蛋白可变区基因克隆

猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救: 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建...; 李俊于周徐绍建程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型; 文献传递

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于周