于湘辉
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备
- 2008年
- 目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSETB中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting鉴定。结果:用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约43000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2～5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度(1∶1000、1∶3000、1∶5000)的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论:成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。
- 张煜于湘辉查晓王安荣孔维
- 关键词：单纯疱疹病毒属胸苷激酶基因表达多克隆抗体
- 重组腺病毒Ad-CMV-TK的构建及其对Lewis细胞的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,并检测Ad-CMV-TK/GCV系统对小鼠Lewis肺癌细胞的抑制作用。方法PCR扩增HSV-TK基因,以复制缺陷型腺病毒为载体构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,在HEK293细胞中包装,CsCl2梯度离心法纯化后,感染Lewis肺癌细胞,Western blot检测HSV-TK蛋白的表达;MTT法检测Ad-CMV-TK/GCV系统对Lewis细胞的体外抑制作用;同时检测Ad-CMV-TK/GCV系统对C57荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果重组腺病毒Ad-CMV-TK感染的Lewis细胞可特异地表达HSV-TK蛋白,Ad-CMV-TK/GCV系统在体外能明显抑制Lewis细胞的生长,当GCV浓度为100μmol/L时,Lewis细胞的存活率仅为16%;在体内能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,与Ad-Blank/GCV对照组和PBS对照组相比,差异具有统计学意义。结论已成功构建了重组腺病毒Ad-CMV-TK,Ad-CMV-TK/GCV系统在体内及体外对小鼠Lewis肺癌细胞均有明显的抑制作用,为进一步研究其抗肿瘤机制及应用奠定了基础。
- 张煜于湘辉查晓孔维
- 关键词：胸苷激酶重组腺病毒更昔洛韦
