何永林
- 作品数：81 被引量：161H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 留学生医学微生物学教学的实践与探索被引量：4
- 2013年
- 通过分析医学留学生的特点,针对性地从选择合适教学内容、综合应用多媒体、灵活选择教学方法、充分利用实验的互补性等方面,经多年探索与实践,提出了积极、有效改进留学生教学的教学方法及手段,提高了留学生医学微生物学教学质量,并为完善留学生医学教育提供参考。
- 涂增何永林徐蕾郭亚楠蒋仁举田一玲杨致邦杨春
- 关键词：医学微生物留学生教学教学质量
- 佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用
- 2014年
- 目的探讨佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素(granulysin,GLS)表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA(130、160、180 nmol/L)诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。
- 杨静杨春何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：佛波酯THP-1细胞颗粒溶素
- 青年教师如何上好留学生微生物学实验课的探索被引量：11
- 2008年
- 经济全球化和综合国力的提高，使我国同其它国家间的文化交流日益普遍，大量的国外学生进入我国高校。作为高校教学主力军的青年教师，如何上好留学生教学课，是教师面临的一个崭新的研究课题。本文就青年教师在医学微生物学实验教学过程中，如何针对留学生的特点、选择合适教材、作好教学准备、保证教学实施和课后辅导与反馈进行思考，并就青年教师如何上好实验课进行初步探索。
- 何永林蒋仁举徐蕾
- 关键词：青年教师留学生医学微生物学实验教学
- hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨
- 2014年
- 目的:探讨hsa-microRNA-218(hsa-mir-218)对颗粒溶素(Granulysin,GLS)表达的影响。方法:抽提佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)激活的THP-1细胞的总RNA,逆转录后PCR扩增GLS基因,将其克隆至pDsRed-Express-C1,构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218(pGenesil-mir-control)共转染293T细胞,36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况,48 h后提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果:酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功,且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比,Western blot结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50%,而GLS mRNA表达无明显变化。结论:hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达,为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
- 樊宇杨春张璐渝杨静何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：颗粒溶素T细胞RNA干扰激光共聚焦
- 结核分枝杆菌ClpC2蛋白的纯化、抗血清的制备及抗原性分析
- 2014年
- 目的:分别探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ClpC2蛋白和兔抗ClpC2多克隆抗体作为肺结核检测抗原或抗体的可行性。方法:诱导表达重组蛋白ClpC2(rClpC2);SDS-PAGE与Western blot鉴定rClpC2后利用亲和层析法进行纯化;纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot检测兔抗血清的特异性;双向免疫扩散法与酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔抗血清效价;rClpC2通过间接ELISA进行抗原性的初步检测,兔抗ClpC2多克隆抗体通过间接ELISA检测肺结核病人血清中ClpC2抗原。结果:rClpC2经SDS-PAGE分析,在相对分子质量46 kD处可见特异性条带;Western blot分析rClpC2可与MTB H37Rv株感染的小鼠血清发生抗原抗体反应;经Bandscan分析rClpC2约占菌体总蛋白的58.7%,纯化后rClpC2的纯度为88.5%;Western blot验证兔抗血清可与卡介苗(Bacillus calmette-guerin,BCG)的ClpC2蛋白发生抗原抗体反应;双向免疫扩散法测定兔抗血清效价为1∶32,ELISA法测定兔抗血清效价为1∶320 000;rClpC2在检测肺结核病人中的检出率为46%,检测敏感性为46%,特异性为90%;兔抗ClpC2多克隆抗体在检测肺结核病人中的检出率为40%,检测的敏感性为40%,特异性为90%。结论:成功纯化结核分枝杆菌ClpC2蛋白,制备特异性兔抗ClpC2多克隆抗体,为进一步研究ClpC2蛋白的生物功能、ClpC2作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性及兔抗ClpC2多克隆抗体生物学功能提供实验基础。
- 穆柳青李岱容张春燕樊宇何永林杨春
- 关键词：结核分枝杆菌
- 锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡被引量：2
- 2015年
- 目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。
- 李鹏何永林张继明方陈城
- 关键词：卡介苗真核表达RAW264.7细胞
- 小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带小鼠白细胞介素-12基因的重组卡介苗(Bacille calmette-guerin,BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法:以分子生物学方法构建携带小鼠IL-12基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM12,以电转化的方式将pBM12质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果:电转化方式可将pBM12导入BCG,抽提质粒鉴定出与mIL-12基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法也扩增出1632bp左右的基因条带。结论:成功构建含pBM12的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。
- 张黎王瑜伟何永林李娜王爽帖儒修
- 关键词：白细胞介素12重组卡介苗真核表达
- 人颗粒溶素活性肽重组卡介苗的构建与表达
- 2010年
- 目的构建携带人颗粒溶素(GLS)活性肽的重组卡介苗(BCG),并鉴定该重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。方法以分子生物学方法 构建携带GLS活性肽基因和分支杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBMS,以电转化方式将pBMS质粒转入BCG构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定重组菌;将重组菌感染巨噬细胞,通过RT-PCR了解重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果采用电转化方式可将pBMS导入BCG,抽提质粒鉴定出与GLS基因相符的目的条带。以该重组BCG感染小鼠巨噬细胞,96h后用RT-PCR法可扩增出相应的基因条带。结论成功构建含pBMS的重组BCG。该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带基因。
- 张黎杨春何永林李娜徐蕾帖儒修
- 关键词：颗粒溶素重组卡介苗真核表达
- 结核分枝杆菌复活促进因子B的原核表达、鉴定和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:构建结核分枝杆菌复活促进因子B(RpfB)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfB基因(1089bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了RpfB蛋白;利用Western-blot法对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现61KDa处有特异性蛋白条带。结论:成功克隆并构建了RpfB基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfBv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。
- 徐蕾何永林张黎辛渝朱道银
- 关键词：结核分枝杆菌纯化
- 肺炎支原体P30黏附素基因的原核表达及初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的构建肺炎支原体P30黏附素基因原核表达质粒并进行表达;以纯化的rP30蛋白为抗原,建立间接斑点-ELISA(dolt-ELISA)法,用于评价rP30蛋白在肺炎支原体(MP)感染诊断中的价值。方法以MP基因组DNA为模板,PCR扩增P30基因,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)/P30,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;Western blot检测表达产物的反应原性;以纯化复性后的rP30蛋白为抗原,建立间接dolt-ELISA法,对40份临床疑似肺炎支原体感染患儿血清进行检测。结果表达的rP30蛋白相对分子质量约为52 000,表达量约占菌体总蛋白的13%,主要以包涵体形式存在,经Ni2+-NTA树脂纯化后,纯度约为93%。Western blot证实,rP30蛋白可与阳性肺炎支原体感染患儿血清发生特异性反应。用rP30蛋白建立的间接dolt-ELISA法,其敏感性和特异性分别为95.45%和72.22%,准确性为85%。结论已成功地在大肠杆菌中表达了rP30蛋白,为MP感染的快速诊断提供了一种新的方法,也为进一步探讨P30蛋白的功能及其在MP感染发病机制中的作用奠定了基础。
- 杨春周莉何永林
- 关键词：肺炎支原体原核表达免疫学诊断
