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牛分枝杆菌重组蛋白TB27.4的表达、纯化及活性鉴定: 2014年; 为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白的纯化条件进行优化。SDS-PAGE结果显示重组蛋白为可溶性表达,且大小与理论值相符,用牛分枝杆菌阳性血清进行Western blotting检测有特异性条带,且可特异性地刺激牛分枝杆菌感染牛外周血淋巴细胞释放大量IFN-γ。结果表明,重组蛋白TB27.4具有良好的B细胞活性和T细胞刺激活性,为进一步研究其在牛结核病诊断中的作用奠定了基础。; 高新桃李平俊鑫婷贾红郭晓宇张改梅李明刘淑清朱鸿飞许雷; 关键词：牛分枝杆菌纯化活性鉴定

牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4依赖TLR2途径诱导RAW264.7细胞因子表达: 本研究旨在检测牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4刺激RAW264.7细胞诱导产生的细胞因子,及其信号传递途径,为阐明牛分枝杆菌的先天性免疫机制提供支持。为了分析牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4对RAW264.7细胞生长影响的最...; 贾红刘淑清鑫婷郭晓宇侯绍华袁维峰朱鸿飞; 关键词：牛分枝杆菌细胞因子 RAW264.7细胞

牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达和分布的影响被引量：1: 2015年; 为探讨牛分枝杆菌TB10.4蛋白与RAW264.7细胞的相互作用关系,表达纯化了rTB10.4,并采用IFN-γ释放试验和Western blot检测其细胞活性。使用不同剂量rTB10.4与RAW264.7细胞共孵育后,采用实时无标记动态细胞分析技术检测rTB10.4对RAW264.7细胞生长影响的最佳时间点和最佳剂量。在此基础上,采用量化流式细胞仪分析重组蛋白rTB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达的影响。结果表明,获得的rTB10.4具有较强的T细胞和B细胞活性,rTB10.4对RAW264.7细胞的作用呈剂量依赖性,作用起效时间为12~24h,诱导作用在16~18h达到最大效应值。量化流式分析仪分析结果表明,rTB10.4刺激可显著增强RAW264.7细胞的细胞膜上TLR2的表达。; 刘淑清李平俊鑫婷侯绍华朱鸿飞贾红; 关键词：牛分枝杆菌 RAW264.7细胞

牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4依赖TLR2途径诱导RAW264.7细胞因子表达: 本研究旨在检测牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4刺激RAW264.7细胞诱导产生的细胞因子,及其信号传递途径,为阐明牛分枝杆菌的先天性免疫机制提供支持.为了分析牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4对RAW264.7细胞生长影响的最...; 贾红刘淑清鑫婷郭晓宇侯绍华袁维峰朱鸿飞; 关键词：牛分枝杆菌细胞因子 RAW264.7细胞

检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用被引量：3: 2014年; 本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法,为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术。分别以获得的牛IFN-γ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体,以Bo-mAb2H作为检测抗体,建立了基于双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)的牛IFN-γ体外释放法。该方法的最低检出限为3.12ng·mL-1,可特异性检测出重组牛IFN-γ(Bac-BoIFN-γ)及天然BoIFN-γ,而与猪、犬、鸡的天然IFN-γ无交叉反应。批内、批间变异系数小于5.11%。临床检测结果显示,与结核菌素皮内变态试验(TST)、进口BovigamTM试剂盒检测的符合率分别为88.7%和95.3%。结果表明,DAS-ELISA法具有良好的敏感性、特异性及精确度,可用于临床样品的检测,为监测牛结核病特别是其早期感染提供了强有力的检测技术手段。; 张改梅贾红侯绍华鑫婷郭晓宇袁维峰刘淑清吴竞高新桃李明董瑞凯朱鸿飞; 关键词：牛结核病 IFN-Γ 双抗体夹心ELISA

牛分枝杆菌TB9.8蛋白的表达及其诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子的分泌: 2014年; 为研究牛分枝杆菌TB9.8蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长及分泌细胞因子的影响,本研究将编码牛分枝杆菌TB9.8蛋白的基因克隆于pET-30a质粒中并在E.coli中进行表达。经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白(rTB9.8)约9.8 ku,具有良好抗原性。以不同剂量的纯化rTB9.8刺激巨噬细胞RAW264.7,采用动态实时细胞检测技术分析rTB9.8对RAW264.7生长影响的最佳时间点和最佳剂量,结果表明rTB9.8可以在8 h^24 h对RAW264.7细胞的增殖产生明显的抑制作用。此外,rTB9.8能够显著诱导RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-6和IL-12。本实验为进一步研究牛分枝杆菌rTB9.8与宿主细胞相互作用提供了实验依据。; 刘淑清贾红侯绍华鑫婷袁维峰郭晓宇张改梅高新桃李明吴竞董瑞凯朱鸿飞; 关键词：牛分枝杆菌细胞因子

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刘淑清