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Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞差异蛋白质点2-DE分析被引量：4: 2011年; 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维电泳图谱差异性分析。结果显示感染组有1 457个可见蛋白质点,而对照组可见的蛋白质点为1 427个。感染组蛋白点的表达量与对照组相比,二者具有统计学差异(P<0.05)的蛋白质点472个,其中表达上调251个点,表达下调221个点,新合成蛋白点30个。结果表明FMDV感染BHK-21细胞后引起了细胞蛋白质组表达模式的改变,这种变化是病毒与细胞相互作用的结果。本研究首次利用蛋白质组学技术研究Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞后蛋白质组学差异,有助于深入研究Asia 1型FMDV和BHK-21细胞相互作用的分子机制。; 刘永杰张克山尚佑军郭建宏郑海学田宏卢国栋刘湘涛; 关键词：BHK-21细胞差异蛋白质组

蛋白质组学在动物医学中的应用研究进展被引量：2: 2011年; 利用蛋白质组学技术研究动物疾病,能发现与疾病发生,发展和转归过程密切相关的蛋白质及其变化特征,为相关疫苗和新型药物的开发提供新的途径。论文从蛋白质组在动物病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病及其他营养代谢病方面的研究进展进行综述。; 刘永杰张克山卢国栋尚佑军刘湘涛; 关键词：蛋白质组学动物医学

Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))亚细胞定位: 2011年; 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。; 刘永杰张克山尚佑军杨顺利卢国栋刘湘涛吴润; 关键词：ASIA1型口蹄疫病毒亚细胞定位

山羊痘病毒的鉴定及序列分析: 2011年; 以华中地区某山羊场疑似山羊痘病料为对象,进行了本动物病例复制、透射电镜观察、病理切片HE染色、特异性目的基因扩增和序列测定及遗传进化关系分析。结果,复制了山羊痘本动物模型,观察到山羊痘病毒(GTPV)样粒子,切片HE染色可见有炎性细胞浸润,病料中扩增到P32基因;序列测定及遗传分析表明,该病毒为山羊痘病毒(ZL/HB/HN),与2008年分离于印度的山羊痘毒株(FJ748488)的遗传关系最近,与中国山羊痘疫苗株(AY881707)及1978年分离于印度的山羊毒株(AY382869)同属一个进化分支。; 张克山郑海学靳野何继军刘永杰尚佑军郭建宏卢国栋田宏刘湘涛; 关键词：山羊痘病毒鉴定

BHK-21细胞蛋白样品双向凝胶电泳条件的优化: 2011年; 分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方法;用考马斯亮蓝染色时,7cm胶条上样量为100μg时图谱的蛋白点较多且分离清晰;浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶所得的蛋白点较多;通过2种染色方法的比较,硝酸银染色方法优于考马斯亮蓝染色方法。优化后的双向凝胶电泳技术得到的图谱,蛋白点多且清晰,重复性好,拖尾现象减少,符合软件分析的要求,可用于口蹄疫病毒感染BHK-21细胞蛋白质组学研究。; 卢国栋张克山刘永杰尚佑军郭建宏郑海学田宏刘湘涛; 关键词：BHK-21细胞口蹄疫病毒双向凝胶电泳

兽用疫苗管理与控制的国际标准被引量：2: 2011年; 兽用疫苗是兽医医学产品,需接受像医学产品相同或相似的管理和控制标准,这意味着动物疫苗必须满足复杂的要求,保障产品在预期使用条件下的质量、安全性和免疫效力。在动物医药领域中,欧盟和美国的动物疫苗管理和控制体系发展早,制度完整,为其他国家和地区建立良好的动物疫苗管理与控制标准提供了有价值的参考信息。另外,统一各个国家和地区的兽用疫苗管理与控制标准是加速实现全球兽用疫苗自由、快速国际贸易的重要途径。; 卢国栋张克山刘永杰尚佑军郭建宏郑海学田宏刘湘涛; 关键词：兽用疫苗

口蹄疫病毒基因组结构及功能最新研究进展被引量：4: 2011年; 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth dis-ease virus,FMDV）引起的一种急性、热性、高度接触性人兽共患传染病。口蹄疫的暴发和流行带来严重的经济损失和不良的政治影响,同时对人们身体健康带来严重威胁,被世界动物卫生组织列为必须上报的动物传染病之首。FMDV基因组RNA全长约为8.5kb,由5′非翻译区（5′UTR）,开放阅读框架（ORF）和3′非翻译区（3′UTR）组成,; 张克山刘永杰卢国栋刘湘涛; 关键词：口蹄疫病毒世界动物卫生组织人兽共患传染病开放阅读框架非翻译区动物传染病

蛋白质组学样品处理方法研究进展被引量：4: 2011年; 蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点,是生命科学研究领域又一个新的突破口。以双向凝胶电泳为主的蛋白质分离技术以及基于生物质谱的蛋白质鉴定技术是目前该领域主要研究技术手段。在双向凝胶电泳蛋白分离和蛋白质谱鉴定中,样品处理影响甚至决定着蛋白分离效果和鉴定结果。因此有效的样品处理技术是获得真实、可靠实验数据的关键,在比较蛋白质组学研究中样品处理尤为重要。本文针对双向电泳前的蛋白质样品处理及质谱鉴定前的样品处理技术的研究进展作以综述。; 卢国栋张克山刘永杰尚佑军郭建宏郑海学田宏刘湘涛; 关键词：蛋白质组学

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卢国栋