吕岩
- 作品数：12 被引量：28H指数：4
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- 相关领域：农业科学文化科学生物学更多>>
- 鸡SUMO1的HIS/GST双融合纯化标签载体的构建及表达分析被引量：2
- 2015年
- SUMO(small ubiquitin-related modifier,小泛素样相关修饰物)是一种重要的蛋白翻译后修饰物,对调节蛋白质的活性、功能和细胞定位都起着至关重要的作用。虽然SUMO和泛素的空间结构很相似,但是发挥的功能却有很大的不同,SUMO不像泛素那样介导蛋白质的降解,反而可以增强蛋白质的稳定性。近年来,研究发现人的SUMO作为一种融合标签和分子伴侣来可以显著增加一些难溶解蛋白的可溶性表达。本研究以原核表达载体pET-28a为基础构建了鸡SUMO1重组质粒HIS-SUMO1-GST-pET28a,并在SUMO1和GST之间插入IL2得到重组质粒HIS-SUMO1-IL2-GST-pET28a,经IPTG诱导表达,并分别使用Ni-NTA及Glutathione-sepharose 2次亲和层析纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。活性分析发现去SUMO化酶人的SENP1可完全切开纯化融合的蛋白经。结果表明,此SUMO融合的HIS/GST双标签表达载体不但可以用于提高难溶蛋白的溶解度,而且表达产物也作为去SUMO化酶研究的底物。
- 于佩峰郑海南邓晨张鑫吴山力王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：原核表达蛋白纯化融合蛋白
- Intein融合表达鸡IL-2蛋白的多克隆抗体制备被引量：4
- 2015年
- 鸡白介素-2(chIL-2)是一种对T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞复制与分化起重要作用的细胞因子,并在机体天然免疫和获得性免疫的发生与维持中发挥重要作用。本研究中,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366bp)克隆连接到pTYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362bp的Intein基因融合在同一开放阅读框内,编码相对分子质量约为71 000的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-intein融合蛋白,应用chitin-sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western blot分析抗体特异性。结果,应用纯化的chIL-2-intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
- 邓晨郑海南于佩峰张鑫吴山力王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：INTEINCHICKENIL-2多克隆抗体
- 鸡chUSP1 His594Ala突变使其去泛素化酶活性丧失
- 2015年
- 泛素特异性蛋白酶1(ubiquitin-specific proteases 1,USP1)是一种去泛素化酶,它在DNA损伤修复应答过程中发挥重要功能。已证明USP1与UAF1(USP1-associated factor 1)形成复合物后,其酶活性会得到极大的提升。chUSP1为在鸡细胞中发现的一种去泛素化酶,生物信息学分析发现它与人USP1同源性高达72%。本研究以本室扩增的chUSP1基因和chUAF1基因,使用bac-to-bac系统表达了chUSP1GG680,681AA单体及chUSP1GG680,681AA/chUAF1复合体。并根据人USP1预测将chUSP1一个可能的活性中心位点第594位组氨酸突变为丙氨酸,并纯化了此突变型的单体和复合体。应用底物Di-Ub/Ub2 WT Chains(K63-linked)及Di-Ub/Ub2 WT Chains(K48-linked)对chUSP1GG680,681AA和突变型chUSP1HGG594,680,681AA进行酶活性分析。试验结果表明chUSP1具有切割Ub链底物的酶活性,且第594位组氨酸残基突变影响chUSP1的去泛素化酶活性。而chUAF1可以与chUSP1相互作用形成复合体,并且明显提高chUSP1酶活性。
- 郑海南赵程程邓晨于佩峰王梦云吴山力吕岩艾永兴
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞酶活性分析
- 引发仔猪水样腹泻的多重耐药、高致病性大肠埃希菌的分离与鉴定被引量：7
- 2013年
- 近来,长春地区多个养猪场发生高致病性、高死亡率的仔猪水样腹泻,腹泻仔猪经多种药物反复治疗,均无疗效。试验从发病仔猪肠壁内膜分离到2株大肠埃希菌(Escherichia coli),经鉴定,分离菌株为多耐药、高致病性菌株。将分离株进行生化试验及其16S rRNA序列的克隆、测序,并与GenBank中的序列进行对比,结果显示,分离菌株16S rRNA与GenBank登录的大肠埃希菌序列同源性达99%。动物回归试验结果显示,该大肠埃希菌能引起仔猪水样腹泻。药敏试验结果显示,常用治疗大肠杆菌病的药物如庆大霉素、氧氟沙星、环丙沙星等均对其无效。
- 薛雨佳于大勇崔敏吕岩闫广谋
- 关键词：RRNA药敏试验水样腹泻
- 兽医临床诊断学教学改革初探被引量：4
- 2014年
- 兽医临床诊断学是从临床实践出发,研究疾病诊断方法和理论的一门科学。本文创新了兽医临床诊断教学体系,从医教研结合、网络教学、多媒体教学和娱乐式教学几方面入手进行论述,构建完善和科学的教学体系,从根本上提高教学效果,为兽医临床诊断学及其他相关课程教学提供有益参考。
- 肖冲李小兵刘国文胡静涛成军丁雪梅吕岩谢光洪孙强高超
- 关键词：兽医临床诊断学教学体系网络教学多媒体教学
- 应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体被引量：3
- 2015年
- 研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。
- 邓晨于佩峰张鑫王梦云吕岩艾永兴
- 关键词：内肽酶多克隆抗体
- 神经生长因子对猪卵丘细胞扩散及卵母细胞体外成熟的影响被引量：2
- 2013年
- 利用光学显微镜观察及地衣红染色方法,探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加神经生长因子(NGF)对猪卵丘细胞扩散和卵母细胞成熟的影响。结果表明:在猪卵母细胞体外成熟过程中添加NGF对猪卵丘细胞扩散无明显影响;单纯添加NGF并不能显著改变第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的比率,但却可以显著提高生发泡期(GV期)卵母细胞比率。当NGF与促性腺激素(eCG和hCG)联合作用时,MⅡ期卵母细胞比率相对于单纯地促性腺激素作用有显著提高。
- 陆晨李万宏陈树雄吕岩周虚
- 关键词：神经生长因子卵母细胞体外成熟
- 兽医外科手术学的教学改革与探索被引量：2
- 2017年
- 兽医外科手术学是高等农业院校兽医专业本科学生必修的一门学科,笔者创新了兽医外科手术学的教学体系,从教学方法、改革实验动物、建立兽医外科手术学实验教学平台等方面进行讨论,构建完善与科学的教学体系,从根本上提高教学效果。
- 肖冲高超吕岩李小兵孙强成军丁雪梅谢光洪于子阳
- 关键词：教学改革开放性
- 马立克氏病毒UL36蛋白的表达及其去泛素化酶活性分析被引量：1
- 2017年
- 选取马立克氏病毒(MDV)去泛素化酶UL36蛋白N端具有蛋白酶活性的一段氨基酸序列,表达纯化并分析UL36的去泛素化酶活性特点。利用p Cold TF为表达载体,并在UL36-323的C端连接Strep tagⅡ作为纯化标签,构建重组质粒p Cold TF-UL36-Strep。应用大肠杆菌表达体系,低温诱导表达,并对该段蛋白进行纯化,得到可溶且纯度较高的蛋白后,通过Western blot确定所纯化的蛋白即是UL36蛋白。应用Di-Ub(K48)和SUMO1-GST作为底物鉴定其去泛素化酶活性。最终得到了可溶且纯度较高的UL36-323-Strep蛋白,并且通过酶切反应确定了其去泛素化酶活性,为进一步探究UL36在MDV感染及复制中的作用奠定前期基础,也为探究MDV的致病机理提供了必要的前提条件。
- 王梦云周宏达韦美甜吕岩吴山力艾永兴
- 关键词：MDV蛋白纯化
- 一例马胃状膨大部便秘的病例报告
- 2015年
- 2014年6月，公主岭市大岭镇李某饲养的一匹马突然卧地打滚、出汗、哆嗦。到当地兽医站治疗2d，灌药打针治疗，而后从鼻孔向外流出水样物，不见好转，遂前来就诊。
- 肖冲吕岩孙强成军丁雪梅高超谢光洪
- 关键词：病例报告兽医站打针鼻孔
