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腺病毒介导HGF基因逆转肝纤维化的实验研究: 2013年; 目的评价腺病毒介导肝细胞生长因子(HGF)对肝纤维化的治疗作用。方法 30只雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)8周,诱导肝纤维化产生。大鼠随机均分为5组,分别注射不同剂量的Ad-HGF或病毒。A组注入PBS,B组注入5×109PFU病毒;C组注入1×109PFU Ad-HGF,D组注入2.5×109PFU Ad-HGF;E组注入5×109PFU AdHGF。定时采大鼠血清样品,以动态监测大鼠肝功能。8周后处死大鼠,并采血和检测肝组织。采用ELISA法测定在体外和体内的HGF表达;并测定血清中腔脯氨酸(Hyp)含量;病理分析肝脏组织变化及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和胶原蛋白沉积。结果在细胞培养液中HGF分泌增加约44倍,达到8.8 ng/ml。在注射Ad-HGF大鼠组内,血浆HGF的浓度增加约5倍,超过50 ng/ml,并持续至少10 d。在基因治疗后谷丙转氨酶(GOT)、谷草转氨酶(GPT)、血清中总蛋白,白蛋白,总胆红素明显恢复(P<0.05)。离体肝组织显示,D及E组肝脏形态有明显恢复。在注射CCl48周后,肝组织Hyp含量明显增加,D及E组Hyp含量低于B组及C组。病理研究提示Ad-HGF同样也减弱了转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达和胶原蛋白的沉积。结论静脉注射AdHGF可促进肝功能的恢复和提高胶原溶解能力,有利于缓解肝脏纤维化。; 郑斐群李玮吴彬许尹方佳; 关键词：肝纤维化基因治疗肝细胞生长因子腺病毒

质粒超螺旋比例对其细胞转染效率及表达的影响被引量：13: 2005年; 检测质粒开环、闭环比例不同时对其细胞转染效率及表达的影响。构建携带人肝细胞生长因子基因的质粒(pcDNA3-HGF)及携带LacZ报告基因的质粒(pcDNA3-LacZ),用核酸纯化试剂盒提取开环、闭环比例不同的质粒,然后用LipofectAMINE介导它们分别转染NIH3T3细胞,采用X-Gal染色和ELISA法分别观察转染效率和表达活性。结果表明,用超螺旋比例分别为85.45%和48.44%的质粒pcDNA3-LacZ转染生长旺盛的NIH3T3细胞,48h检测转染效率分别为23.4%±3.8%和9.3%±2.5%,前者约是后者的2.5倍。用超螺旋比例分别为93.28%和40.53%的质粒pcDNA3-HGF转染1×106NIH3T3细胞,ELISA法检测48h细胞培养上清中HGF的表达量分别为46.5±6.3ng和25.6±4.2ng,前者是后者的1.8倍。初步认为质粒开环、闭环比例不同对其细胞转染效率及表达有一定影响,超螺旋比例高时其转染效率及表达量较高。; 哈小琴吴祖泽张庆林吴彬吕同德; 关键词：质粒超螺旋转染效率

野生型p53,GM-CSF和B7-1基因转移对卵巢癌细胞系SKOV-3增生的影响被引量：1: 2005年; 目的研究人野生型p53、GM-CSF和协同刺激因子B7-1基因共转染对卵巢癌细胞增生的影响。方法以携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体转染卵巢癌细胞系SKOV-3,荧光显微镜观察,流式细胞计数计算转染效率;以携带野生型p53、GM-CSF和B7-1基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,RT-PCR检测目的基因表达,观察转染前后细胞形态的变化,绘制细胞生长曲线。结果当腺病毒的感染强度达到400 pfu/细胞时,转染率可达到81%;以携带目的基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,能检测到相应基因表达;转染后SKOV-3细胞形态发生改变,增生减缓。结论腺病毒载体能介导目的基因转入卵巢癌细胞,并有效表达;人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因共转染能减缓卵巢癌细胞的增生。; 林宇庚张震宇王立生吴彬; 关键词：卵巢癌

重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因治疗改善四氯化碳所致实验性肝纤维化: 目的评价携带肝细胞生长因子(HGF)的重组腺病毒对大鼠肝纤维化的治疗作用,探讨 Ad-HGF 抗肝纤维化的可能机制。方法将 Wistar 大鼠随机分为正常对照组,模型组,Ad-HGF 低 (1×10pfu)、中(2．5×...; 方佳吴彬杨雁袁丽珍吴祖泽; 关键词：肝细胞生长因子腺病毒肝纤维化转化生长因子Β1; 文献传递

明胶法富集外周血单核细胞并刺激其成熟为树突状细胞被引量：1: 2012年; 背景:如何简易高效分离纯化人外周血单核细胞并刺激成熟为树突状细胞,未见标准化操作流程。目的:观察明胶法分离外周血单核细胞的效率以及将分离出的单核细胞刺激成熟为树突状细胞的表型特征,并与普通塑料黏附法对比。方法:使用人淋巴细胞分离液分离人外周血得到单个核细胞,根据培养瓶是否进行明胶包被分为明胶包被组和普通塑料组。均分单个核细胞,按组别分离获得单核细胞并诱导刺激成熟为树突状细胞。计数各组所得单核细胞数,使用流式细胞仪检测2组单核细胞的CD14阳性率、T、B淋巴细胞污染率、树突状细胞非成熟期和成熟期CD1a,CD83的表达情况,锥虫蓝拒染法计算细胞活率,观察对比2组血小板污染情况。结果与结论:明胶包被组单核细胞数及CD14阳性率显著高于普通塑料组(P<0.05),普通塑料组淋巴细胞污染率显著高于明胶包被组(P<0.05)。2组细胞活率及树突状细胞表型差异无显著性意义(P>0.05)。明胶包被组血小板污染率低于普通塑料组。提示明胶法可以简单高效分离出单核细胞并成功刺激成熟为树突状细胞。; 马明瑛靳志平王伟郭智吴彬谭晓华; 关键词：明胶单核细胞树突状细胞人外周血单个核细胞

腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因对Lewis肺癌的治疗作用被引量：2: 2006年; 目的:体内观察腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因的抗肿瘤及协同化疗或放疗的作用。方法:建立C57小鼠的Lew is肺癌模型,瘤内注射不同剂量的上述三个基因重组的腺病毒,确定重组腺病毒治疗小鼠Lew is肺癌的有效剂量;与此同时观察有效剂量的重组腺病毒和放疗或化疗协同作用。结果:腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因治疗小鼠Lew is肺癌的有效剂量为5×108pfu,该重组腺病毒与放疗或化疗联合应用可以显著提高小鼠Lew is肺癌对放疗或化疗的敏感性。结论:腺病毒介导的p53、GM-CSF和B7-1基因对小鼠Lew is肺癌具有良好的治疗作用;该重组腺病毒联合放疗或化疗可以显著提高小鼠Lew is肺癌对放疗或化疗的敏感性。; 邵晓婷吴彬毕建进老妙芬王澜吴祖泽; 关键词：腺病毒基因肺肿瘤

腺病毒载体介导人血管内皮细胞生长因子受体－2诱导抗小鼠肝癌免疫被引量：2: 2008年; 目的探讨复制缺损型腺病毒载体（Ad）介导人血管内皮细胞生长因子受体-2（hKDR）诱导抗小鼠肝癌血管免疫、打破免疫耐受的效果。方法用RT-PCR方法从人脐静脉内皮细胞和小鼠胚胎细胞中分别克隆hKDR和小鼠KDR（mKDR），构建Ad hKDR和Ad mKDR。用Ad hKDR和Ad mKDR分别皮内免疫C57BL／6小鼠，7d后取脾细胞作为效应细胞，Hepa 1-6／mKDR作为靶细胞，行乳酸脱氢酶释放试验，检测特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤率；免疫小鼠接种Hepa 1-6肝癌细胞，观察荷瘤小鼠成活情况。结果 Ad hKDR和Ad mKDR分别免疫小鼠1周后，在效应细胞：靶细胞为100：1、50：1和25：1时，Ad hKDR诱导的6h CTL杀伤率分别为84．3％±6．7％、71．5％±5．2％和44．6％±4．7％；Ad mKDR诱导的6h CTL杀伤率分别为65．2％±6．1％、46．7％±5．0％和22．6％±3．7％。Ad hKDR免疫小鼠后1周接种5×10^6个Hepal-6肝癌细胞，2个月后仍然有60％的小鼠无瘤生长；而接种2×106个Hepal-6细胞至Ad mKDR免疫小鼠，2个月后小鼠成活率为40％。上述CTL效应和肿瘤保护作用在清除CD8^＋和CD4^＋T淋巴细胞后消失。结论 Ad介导异种KDR能有效地打破肿瘤的免疫耐受，诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应，这种特异性细胞免疫反应是CD8^＋和CD4^＋T淋巴细胞依赖性的。; 谭晓华吴彬刘兵刘秀丽王友臣; 关键词：T淋巴细胞细胞毒性腺病毒载体

腺病毒载体介导人KDR胞外段诱导抗小鼠肝癌的免疫效应被引量：3: 2007年; 目的:探讨复制缺陷型腺病毒载体(Ad)介导人血管内皮细胞生长因子受体-2(hVEGFR-2或hKDR)胞外段诱导抗小鼠肝癌血管免疫及打破免疫耐受的效果。方法:构建Ad hKDRE,用Ad hKDRE皮内免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞作为效应细胞(E),Hepa1-6/mKDR作为靶细胞(T),行乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测特异性CTL杀伤活性;给免疫小鼠接种肝癌细胞Hepa1-6,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:Ad hKDRE免疫小鼠1周后,在E∶T为100∶1、50∶1和25∶1时,Ad hKDRE诱导的6hCTL杀伤率分别为(81.5±5.6)%、(68.4±5.5)%和(39.6±3.9)%。Ad hKDRE免疫小鼠1周后接种2×106 Hepa1-6肝癌细胞,观察2个月无小鼠成瘤;接种5×106 Hepa1-6细胞,小鼠无瘤成活率为60%。上述CTL效应和抗成瘤作用在清除CD8+和CD4+ T淋巴细胞后消失。结论:Ad介导异种(人)KDR胞外段能有效地打破小鼠肝癌的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,这种特异性细胞免疫反应是CD4+和CD8+ T细胞依赖性的。; 谭晓华吴彬王芳刘兵王友臣; 关键词：异种抗原

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响被引量：3: 2007年; 目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。; 李金凤段海峰吴彬毕建进孙同柱付小兵王立生吴祖泽; 关键词：肝细胞生长因子增生性瘢痕成纤维细胞腺病毒

悬浮培养293细胞生产腺病毒的工艺及BB102抗癌剂治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究: 第一部分在最近的十几年中,腺病毒已经成为了基因治疗的有效载体。到目前为止,世界各国已经批准的基因治疗临床方案达到1000多个,腺病毒载体约占26%。由于越来越多的腺病毒基因药物进入临床前和临床实验,急需建立一种有效的可...; 吴彬; 关键词：腺病毒基因治疗分离纯化肺癌

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吴彬

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