姜海英
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人呼吸道腺病毒通用特异检测试剂的研究及应用被引量：1
- 2008年
- 目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析，找m高度保守序列，设计5对腺病毒通用特异引物，同时确保PCR产物具有型别特异性。用NP-40裂解法制备模板，对引物的有效性、特异性及灵敏忡进行验证．并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的检测，阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型．将阳性标本接种HeLa细胞，光镜下观察细胞病变，电镜下观察病毒形态。结果BLAST结果表明，5对引物与其他病毒、细菌及人类基因组等无高度同源性，是腺病毒特异性引物。用5对引物扩增人3型腺病毒DNA，均出现阳性目的条带，但不能检测呼吸道合胞病毒和柯萨奇病毒，验证了引物的有效性和腺病毒特异性。模板稀释、病毒稀释均可检测到10。梯度，说明引物具有较高的灵敏性，同时验证了NP-40裂解法的稳定性。64例临床咽拭子标本巾检测出2例阳性标本，阳性率为3．13％（2／64）。阳性标本接种HeLa细胞，光镜下可见细胞变圆、聚集成葡萄串状、脱落等腺病毒所致细胞病变，电镜下可见细胞核内有典型的品格状排列的腺病毒颗粒。PCR产物测序结果表明，2株病毒均为B组腺病毒。结论成功设计了腺病毒通用的、特异的，同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物。用该引物建立的PCR方法检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点，适用于临床常规诊断腺病毒感染。
- 陈晶曲章义魏凤香张鸿彦王鹏王迎晨姜海英
- 关键词：聚合酶链反应
- 人腺病毒五邻体基因重组质粒的构建及鉴定被引量：8
- 2009年
- 目的构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒。方法通过PCR方法扩增获得腺病毒五邻体基因的完整序列,将此片段定向克隆到pQE30载体的多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用酶切鉴定方法与核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。结果用PCR法获得了人腺病毒的五邻体基因,将该基因正确地重组到表达质粒pQE30中,构建出腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。结论构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。
- 姜海英曲章义张鸿彦王鹏王迎晨
- 关键词：腺病毒重组质粒
- 人腺病毒表面结构蛋白抗原性分析及五邻体蛋白的克隆
- 目的:腺病毒(AdV)是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一,严重威胁着人类的健康。腺病毒感染主要是以3,5,7型为主,,主要引起小儿肺炎,所以建立有效的防治腺病毒感染措施意义重大。腺病毒有三个主要的结构抗原：六邻体...
- 姜海英
- 关键词：核酸序列抗原表位重组质粒
