姬凯元
- 作品数：26 被引量：17H指数：3
- 供职机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省科技攻关计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- lpa-miR-nov-66调控羊驼黑色素细胞CDK5磷酸化作用的研究
- 2016年
- 旨在研究lpa-miR-nov-66在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中对细胞周期依赖性激酶5(CDK5)磷酸化作用的影响。在体外培养的黑色素细胞中转染lpa-miR-nov-66后,采用实时定量PCR、免疫细胞化学、Western blotting、免疫共沉淀等方法检测功能性CDK5作用。结果显示:与阴性对照相比,黑色素细胞被转染lpa-miR-nov-66后,CDK5基因和蛋白表达量均下降,差异极显著(P<0.01);CDK5激活子是P35,CDK5磷酸化水平及其磷酸化底物——酪氨酸羟化酶(TH)的表达量均被上调,分别呈差异极显著(P<0.01)和差异显著(P<0.05)。结果表明:lpa-miR-nov-66过量表达可通过CDK5的激活子P35上调黑色素细胞CDK5发生磷酸化。该功能性CDK5激酶对底物TH发生磷酸化,是lpa-miR-nov-66调控黑色素生成分子机制的中间环节。
- 张俊珍姬凯元石占全刘彧胡帅鹏范瑞文
- 关键词：黑色素细胞
- miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成被引量：2
- 2017年
- microRNA-411a-3p(miR-411a-3p)在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子(Mitf)依赖的毛色基因酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相关蛋白-2(Tyrp2)及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。
- 李佳晟孙晓江胡帅鹏姬凯元刘博刘学贤杨姗姗张俊珍范瑞文
- 关键词：黑色素
- 一种Cdk5纳米抗体和筛选方法
- 本发明提供了一种Cdk5纳米抗体和筛选方法，涉及生物工程技术领域，所述Cdk5纳米抗体具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明提供的Cdk5纳米抗体检测活性为0.3125ug/ml，可作为Cdk5蛋白检测的科研...
- 范瑞文齐淑慧董常生姬凯元刘博
- 文献传递
- 小鼠角蛋白10(K10)基因启动子的克隆及活性分析
- 2016年
- 【目的】角蛋白10(K10)是黑色素细胞中黑素体向周围角化细胞迁移的分子标记之一,在研究基因在黑色素细胞与角化细胞相互作用的功能时,可以作为特异的启动子。本研究欲筛选K10较强的启动子片段,为研究K10以及相关基因的功能提供理论依据和奠定理论基础。【方法】从小鼠尾巴提取基因组DNA,经质量鉴定后,采用PCR法扩增K10的6个不同片段(F1—F6),并将其分别亚克隆到p MD18-T载体,经测序验证是否正确;将K10的6个亚克隆片段再克隆到p GL0载体中,产生p GL0-F1—F6构建,用脂质体法转染293T细胞,转染结束后将细胞裂解,并通过双荧光素酶报告基因检测6个片段转染细胞后引起的荧光素酶活性变化,以筛选启动效果最好的启动子片段;用筛选到的K10启动子片段作为特异启动子,替换p GL0载体上的CMV强启动子,并与周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)基因进行重组,形成p GL0-F-CDK5构建,用脂质体法转染小鼠皮肤角化细胞,待转染结束后,分别进行细胞爬片、细胞裂解和细胞总RNA的提取,之后用免疫荧光化学、双荧光素酶报告基因检测法和实时荧光定量PCR法检测CDK5的表达定位、表达水平及荧光素酶活性,以检测其在角化细胞中的启动效果;用生物信息法Promoter Scan分析所得到的活性最强的K10启动子片段,发现其可能的转录因子结合位点。【结果】PCR扩增、克隆得到K10启动子的6个片段(F1—F6),片段大小分别为1 201、908、664、787、790、656 bp;质粒p GL0-F1—F6分别转染293T细胞后,通过双荧光报告检测发现长度为787bp的F4启动子活性最强;但F1—F6启动子的活性均弱于p GL0-basic中CMV的启动活性;F4序列中含有基本启动子保守区域的共同序列即TATAAAA,经Promoter Scan分析发现F4序列中含有C/EBPβ、GATA、HSF、CAP等多个转录因子的结合位点,这些位点利于K10在角化细胞中表达;p GL0-F4-CDK5转染角化细胞后,通过荧光蛋�
- 张俊珍刘彧姬凯元杨姗姗胡帅鹏刘学贤范瑞文
- 关键词：角蛋白10启动子特异启动子CDK5小鼠
- 绵羊皮肤鸟苷酸环化酶完整CDS区结构域分析
- 2015年
- 用RT-PCR法获得了绵羊皮肤的鸟苷酸环化酶完整CDS区,其长度为1 860 bp,与其他哺乳动物相比,高度保守。通过对其结构域分析,发现绵羊鸟氨酸环化酶(GC)编码区存在环化酶同源性结构域(CHD)、血红素一氧化氮结合位点(HNOB)和相关血红素一氧化氮结合位点(HNOBA),这些结构域分别发挥其催化功能以及在细胞内转导下游信号的功能。
- 杨姗姗姬凯元石占全焦丁兴白俊明范瑞文董常生
- 关键词：鸟苷酸环化酶皮肤结构域绵羊
- lpa-miR-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成
- α-MSH和lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpa-miR-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量...
- 姬凯元石占全刘彧杨姗姗胡帅鹏张俊珍范瑞文
- 关键词：Α-MSH黑色素细胞
- 文献传递
- 一种Cdk5纳米抗体和筛选方法
- 本发明提供了一种Cdk5纳米抗体和筛选方法，涉及生物工程技术领域，所述Cdk5纳米抗体具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明提供的Cdk5纳米抗体检测活性为0.3125ug/ml，可作为Cdk5蛋白检测的科研...
- 范瑞文齐淑慧董常生姬凯元刘博
- 文献传递
- 干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA及其表达质粒和应用
- 本发明公开了一种干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA，具有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的正义链和反义链序列，以及构建了干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的pENTR/U6 shRNA表达质...
- 张俊珍董常生范瑞文杨珊珊姬凯元石占全刘彧胡帅鹏刘学贤
- 文献传递
- miR-380调控羊驼黑色素细胞MAPK/ERK信号通路被引量：1
- 2018年
- miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信号通路的成员MAP3K6是miR-380的靶基因之一。在293T细胞中共转染miR-380和MAP3K6后,与对照组相比双荧光报告酶活性下降(28.92±25.63)%(P<0.01),下降趋势明显,说明MAP3K6可能是miR-380的靶基因之一;在羊驼黑色素细胞中转染miR-380后,MAP3K6、MEK1、ERK1/2、CREB和MITF在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中CREB下降趋势尤为显著(64.20±54.30)%(P<0.01),Western印迹检测MAP3K6、p-MEK1、p-ERK1/2、CREB和MITF在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显且p-MEK1和CREB基因下降极为显著,分别为(29.09±10.68)%(P<0.001)和(47.12±6.70)%(P<0.001),抑制组则反之。通过Masson-Fontana黑色素颗粒染色法检测miR-380抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒,用紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(pheomelanin,PM),含量结果提示EM与PM含量分别下降为(38.63±2.00)%(P<0.01),(54.10±5.73)%(P<0.001)且PM含量下降极为显著。综上所述miR-380通过靶向抑制MAP3K6等基因的表达,从而对MAPK/ERK信号通路起调控作用,最终影响黑色素生成生物学功能,此研究对哺乳动物毛色形成机制和防止皮肤受紫外辐射有重要意义。
- 杜斌刘学贤姬凯元杨姗姗刘博张俊珍范瑞文
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶黑色素细胞
- lpa-miR-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成
- α-MSH和lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpa-miR-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量...
- 姬凯元石占全刘彧杨姗姗胡帅鹏张俊珍范瑞文
- 关键词：Α-MSH黑色素细胞
