宁黔冀 作品数:87 被引量:216 H指数:7 供职机构: 河南师范大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 河南省自然科学基金 河南省高校科技创新团队支持计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 化学工程 更多>>
甲壳动物表皮几丁质结合蛋白结构与功能研究进展 被引量:3 2017年 由于坚硬表皮的限制,甲壳动物必须经过蜕皮才能生长。蜕皮是一个周期性的动态过程,包括旧表皮降解和新表皮的形成。作为表皮组成成分的几丁质是和蛋白质以结合的形式存在,此蛋白即为几丁质结合蛋白(CBPs),是甲壳动物表皮中重要的结构性蛋白,该类蛋白一般含有特征性的结构域,由蜕皮激素的靶组织——表皮上皮细胞按照一定的周期和步骤表达合成。 郑征帆 吕艳杰 宁黔冀关键词:甲壳动物 均匀共沉淀-水热法制备纤维状羟基磷酸钙/壳聚糖复合粉体 被引量:5 2005年 以尿素沉淀剂,运用溶液均匀共沉淀法制得纤维状羟基磷灰石(HAP)和无定形颗粒状守壳聚糖(CS)的复合粉体,通过水势处理调整纤维状HAP晶粒尺寸的大小,对粉体进行了XRD、TEM、IR及化学组成(Ca/P)表征。均匀 水热共沉淀过程中,pH值对粉体Ca/P、XRD、TEM。 杨洪 宁黔冀 赵海涛关键词:壳聚糖 美洲大蠊初孵若虫在杀虫活性研究中的应用初探 被引量:1 1996年 本文运用并改进的瓶底药膜法,测定了灭多威、硫双灭多威和14个含硅氨基甲酸酯新化合物对美洲大蠊初孵若虫的触杀活性(LC_(50)),并且在确认了若虫之间的生化均一性的基础上,对胆碱酯酶以活体(in vivo)与离体(in vitro)方法测定活力的最佳反应体系及化合物的抑制作用从而提出初孵若虫作为筛选与毒理研究模型的可行性。 尚稚珍 徐建华 宁黔冀 苏胜忠 杨淑华 贺铮杰 李正名关键词:美洲大蠊 触杀活性 胆碱酯酶 凡纳滨对虾细胞色素P450家族新基因CYP4V18的克隆及KK-42对其转录的抑制 被引量:2 2012年 为探讨咪唑类物质KK-42促进凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)生长的分子机制,本研究克隆出与蜕皮和生长相关的CYP4V18基因的全序列,研究了该基因的时空表达,并结合测定血淋巴20-羟基蜕皮甾酮(20E)滴度。将体长3.5~5.0 cm凡纳滨对虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡处理1 min,之后在相同条件下常规饲养。CYP4V18 mRNA水平定量分析采用real-time PCR,血淋巴中20E滴度测定采用反相高效液相色谱法。结果显示,CYP4V18开放阅读框为1 545 bp,编码515个氨基酸,包含CYP450保守序列;系统进化显示,CYP4V18与CYP4家族基因的亲缘关系最近。CYP4V18 mRNA水平在肝胰腺最高,分别是脑、Y-器官和肌肉的4、26和32倍。KK-42处理可显著抑制CYP4V18表达,在第2、4和6天分别降低了72.3%(P<0.05)、82.6%(P<0.05)和187.7%(P<0.01)。与同期对照组相比,KK-42处理之后血淋巴20E滴度在第2、4和6天分别升高1.7%、6.5%和13.5%。结果表明,KK-42可显著抑制凡纳滨对虾肝胰腺CYP4V18转录,升高血淋巴20E滴度,这可能是KK-42促生长机制之一。 夏西超 王文锋 杨洪 宁黔冀关键词:凡纳滨对虾 表达下调 咪唑类物质KK-42对日本沼虾几丁质酶基因表达的影响 被引量:2 2014年 为探讨咪唑类物质KK-42提高感染嗜水气单孢菌的日本沼虾幼虾成活率的机制,首次克隆了日本沼虾几丁质酶基因-3部分序列,研究了其时空表达及酶活力的变化。将体长3.5~5.0cm的日本沼虾幼虾随机分为两组,分别用1.95×10-4 mol/L的咪唑类物质KK-42溶液(试验组1)或不含咪唑类物质KK-42的溶液(对照组1)浸泡处理1min,12h后,分别注射嗜水气单胞菌菌悬液(菌攻毒试验组和菌攻毒对照组)或生理盐溶液(试验组2和对照组2),不同时间测定幼虾的成活率,分析几丁质酶基因-3mRNA水平及其酶活力的变化。结果显示,12-48h时,菌攻毒试验组的成活率比菌攻毒对照组增加133%以上。克隆的日本沼虾几丁质酶基因-3部分mRNA序列与其他甲壳类具有90%以上同源性。几丁质酶基因-3表达水平在肝胰腺中最高,以蜕皮前期最为显著。与对照组1相比,在12h,试验组1几丁质酶基因-3mRNA水平和酶活力分别增高了150%和75%;菌攻毒试验组mRNA水平在12~48h明显高于菌攻毒对照组,尤其在24h,增幅高达304%,酶活力在24h比菌攻毒对照组增高48%。咪唑类物质KK-42预处理能显著上调感染嗜水气单胞菌的日本沼虾幼虾肝胰腺几丁质酶基因-3的转录、诱导酶活力增强,这可能是咪唑类物质KK-42提高幼虾成活率的机制之一。 王佩 吕艳杰 吕黎 杨洪 宁黔冀关键词:日本沼虾 嗜水气单胞菌 基因表达 日本沼虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶基因克隆及KK-42对其表达的影响 被引量:4 2018年 为进一步探究KK-42缩短蜕皮周期的分子机制,本研究以日本沼虾幼虾为材料,通过RACE技术克隆了几丁质降解途径中的限速酶基因NAGase c DNA全长序列,定量测定了KK-42处理不同时间对头胸甲表皮组织中NAGase m RNA相对表达量和对应酶活力的影响。序列分析结果显示,NAGase c DNA全长2 536 bp,编码617个氨基酸。同源性分析显示,NAGase基因保守性较低,与凡纳滨对虾的相似度最高,仅为68%。系统进化分析显示,日本沼虾、三疣梭子蟹、凡纳滨对虾、中国明对虾聚为一个大类,凡纳滨对虾和中国明对虾亲缘关系更为接近,日本沼虾单列一个分支。Real-time PCR分析表明,NAGase相对表达量在蜕皮前D_0期达到峰值;KK-42处理后3 h,D_4期的相对表达量是对照组的253%,处理后6 h,C期和D_0期较对照组分别提高了226%和187%。NAGase酶活力从C期到D_4期逐渐提高,KK-42处理能明显提高C和D_0期NAGase酶活力,尤其对C期的影响最为显著,在处理后3、6和12 h分别提高了11.26、5.99、7.15倍。结果提示,KK-42对日本沼虾表皮NAGase的诱导效应可能是其缩短蜕皮周期的分子机制之一。 吕艳杰 关建义 杜娟 宁黔冀关键词:日本沼虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 克隆 黄海海域三种棘皮动物皂甙的制备及性质鉴定比较 被引量:3 2000年 郭承华 曹建国 刘迅 宁黔冀 鞠宝 刘传琳关键词:棘皮动物 罗氏海盘车 咪唑类物质KK-42提高日本沼虾成活率机制的研究 被引量:1 2014年 目的:探讨KK-42提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾成活率的机制.方法:首先将虾分为两组,分别用1.95×10^-4mol/L的KK-42溶液(处理组)或不含KK-42的溶液(对照组)浸泡1 min后取出,放置养殖水槽中饲养12h后,进行嗜水气单胞菌感染实验,每组又分别分为两个亚组(Challenged和Unchallenged);于感染后的不同时刻,分别测定日本沼虾的成活率、细菌清除率及proPO基因(甲壳动物重要的免疫因子)表达水平和酶活力的变化.结果:KK-42预处理可以提高感染嗜水气单孢菌后的日本沼虾的成活率及细菌清除率;KK-42处理后3、12和24 h,proPO基因表达明显提高,PO活力也于6~48 h持续升高,在24 h达到最高值,是对照组的2.3倍.嗜水气单胞菌刺激也可诱导血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力的增加,但对照组分别在菌注射后3h和6 h,mRNA表达突然升高,而KK-42实验组则在整个时期处于缓慢升高趋势;PO活力变化趋势和基因表达相一致.结论:KK-42可以诱导proPO mRNA表达水平及PO活力的升高,并能提高沼虾细菌清除能力,可能是KK-42提高日本沼虾成活率的分子机制之一. 王文锋 关建义 郭爱莲 杨洪 宁黔冀关键词:嗜水气单胞菌 皮质酮对大鼠肝再生过程中鸟氨酸脱羧酶的抑制(英文) 2008年 目的研究大鼠体内主要的糖皮质激素--皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达及酶活性的影响。方法乙醚麻醉大鼠,于PH前3d行双侧肾上腺切除术及假手术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠。用RT-PCR、Western blotting及高效液相色谱法(HPLC)分别测定ODC mRNA、ODC蛋白及酶活性。结果与再生肝相比,完整肝中ODC mRNA、蛋白及其酶活性水平较低。PH后所有组(每组n=6)中ODCmRNA水平均显著升高,5h达到峰值,7h前mRNA含量由高到低依次为去肾上腺组、去肾上腺假手术组(即对照组)、10和40mg/kg体重皮质酮处理组。去肾上腺组(n=13,下同)的ODC蛋白量高于对照组,10mg/kg体重皮质酮处理,在PH后0~24h下降,40mg/kg皮质酮处理组最低。PH后,所有组(每组n=6)ODC活性迅速升高,6h达到峰值;皮质酮处理后活性在6h下降显著,40mg/kg体重皮质酮处理组活性最低。结论皮质酮处理后,大鼠完整肝及再生肝中ODC mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下降;ODC活性变化的部分原因是由于ODC mRNA及其蛋白量的改变。 马建敏 和俊涛 索世英 宁黔冀 徐存栓关键词:皮质酮 肝再生 鸟氨酸脱羧酶 BLOTTING 日本沼虾表皮Serpin基因克隆及免疫功能的初步研究 2024年 丝氨酸蛋白酶级联反应介导的黑化是甲壳动物重要的免疫反应,丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor,Serpin)是黑化反应的重要调节因子,而甲壳动物表皮Serpin的有关研究较少.为了探索表皮Serpin在日本沼虾(Macrobrachium nipponense)免疫反应中的功能,基于前期转录组数据,利用PCR、RACE和生物信息学从日本沼虾表皮克隆并鉴定了1个新的Serpin基因,命名为MnSerpin,利用RT-qPCR和RNAi等方法,研究了该基因时空表达模式、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后表皮MnSerpin的转录水平以及日本沼虾死亡率的变化.结果显示,MnSerpin cDNA全长2181 bp,编码419个氨基酸,具有Serpin结构域.MnSerpin在腹背部表皮、鳃、血细胞、胃、心、肝胰腺等多种组织均有表达;表皮MnSerpin的表达与蜕皮周期有关,与蜕皮间期(C期)相比,在蜕皮后早期(A期)最高,增加6.06倍(P<0.01).嗜水气单胞菌攻毒后,表皮MnSerpin的相对表达量在6 h达到了峰值,比对照组增加3.77倍(P<0.01).在腹背部第二节的关节膜内注射3μg dsRNA溶液,每12 h注射1次,共注射3次,最后一次注射后12 h,干扰效率最高,表皮MnSerpin的相对表达量同比下降58%(P<0.01).在干扰效率最高的时间点攻毒,120 h内,干扰组虾的累计死亡率比未干扰组增加16%(P<0.01).结果表明,日本沼虾表皮MnSerpin是重要的免疫因子,MnSerpin的表达存在组织以及蜕皮周期不同阶段的差异,该基因表达下调能显著增加嗜水气单胞菌感染虾的死亡率. 宁黔冀 彭彦新 岳凯迪 李亦君关键词:表皮 RNAI