张渭东
- 作品数：10 被引量：26H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家自然科学基金陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 腺病毒表达鸡GM-CSF及其对鸡骨髓细胞增殖活性的检测被引量：2
- 2012年
- 为了方便鸡粒细胞/巨噬细胞集落细胞刺激因子(GM-CSF)作为疫苗佐剂使用,用PCR方法扩增出鸡GM-CSF基因,将其连入人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,将重组穿梭载体与腺病毒骨架重组后,获得重组腺病毒骨架载体,线性化后转染293SD细胞,获得能够表达鸡GM-CSF的腺病毒。将获得的重组腺病毒转导鸡成纤维细胞系DF1,细胞培养上清中,可以检测到GM-CSF刺激鸡骨髓细胞活性,为鸡GM-CSF进一步应用奠定了基础。
- 王兴龙郝华芳杜恩岐唐文雅张鹏陈胜利张渭东张淑霞党如意杨增岐
- 关键词：重组腺病毒活性检测
- H9N2亚型禽流感病毒对鸡输卵管致病性的研究被引量：4
- 2013年
- 为了研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)对鸡输卵管的致病性,本研究首先采用凝集素亲和组化染色法检验了流感病毒受体SAα-2,3Gal在鸡输卵管上的分布;然后用H9N2AIV人工感染产蛋母鸡,制作输卵管的病理组织切片观察其病理变化;最后,采用胶原酶I灌注消化法培养鸡输卵管膨大部的原代上皮细胞,接毒H9N2AIV后观察细胞病变。试验结果表明,鸡输卵管除漏斗部没发现SAα-2,3Gal受体,其余部分均呈强阳性分布;攻毒后病理组织切片观察,输卵管膨大部上皮细胞绒毛脱落,部分细胞坏死、脱落,组织间隙变大,子宫内部组织内部充血出血,其他部分变化不明显;原代细胞接毒72h后,细胞病变不明显,但是上清中HA滴度可以达到3log2。从以上三方面可以看出,鸡输卵管上皮细胞膜上存在禽流感病毒受体,H9N2AIV可以引起侵害鸡输卵管,并引起部分输卵管病变,而且H9N2AIV可以感染鸡输卵管膨大部原代上皮细胞,H9N2AIV有可能通过输卵管感染母鸡。
- 王晶钰李成山陈婷王利勤董睿张渭东
- 关键词：病理观察
- 猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2012年
- 为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。
- 程敏郭抗抗张彦明何雷董玲娟李维维刘伟曹伟伟张渭东
- 关键词：猪瘟病毒实时定量PCRTAQ
- 稳定表达新城疫病毒V蛋白禽源细胞系的建立被引量：1
- 2012年
- 为获得可以稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系,以质粒载体为模板,用PCR方法扩增新城疫病毒V基因并引入酶切位点(EcoRⅠ和BamHⅠ),以同尾酶相连的方式与用EcoRⅠ和BglⅡ酶切的piggyBac转座子系统克隆质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP相连接,经酶切鉴定、测序分析正确后,用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP-V和辅助质粒mPB共转染DF-1细胞,通过绿色荧光观察、嘌呤霉素筛选及蛋白表达的Western-blot检测,结果表明,稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系已成功建立。证实piggyBac转座子系统能够用于稳定表达外源基因的禽源细胞系的构建,为piggy-Bac转座子系统在禽源细胞的应用和新城疫病毒V蛋白的研究提供了一定的参考资料。
- 唐文雅王兴龙张渭东杜恩岐陈胜利王丹阳党如意张淑霞杨增岐
- 关键词：PIGGYBAC转座子细胞系
- 秦岭野鸟源NDV的致病性研究及F、HN基因的遗传进化分析
- 新城疫（Newcastle disease, ND）是能感染多种禽类的一种急性、高度传染性疾病，给世界养禽业造成了巨大的经济损失。新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）属于副黏病毒科（Par...
- 张渭东
- 关键词：新城疫病毒F基因HN基因遗传进化分析
- 文献传递
- 秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析被引量：5
- 2013年
- 为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。
- 张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐
- 关键词：F基因HN基因遗传进化分析
- 秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒病原学监测及分离株毒力测定被引量：4
- 2013年
- 为评价秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒（NDV）流行及毒力情况，对374份源于该区域健康野鸟的咽喉、泄殖腔拭子进行病毒分离与鉴定，并对NDV分离株进行生物学特征和遗传进化分析。结果共分离到5株野鸟源NDV（包括2株候鸟源），其致病指数MDT、ICPI、IVPI差异较大，分别为37．2～64．8h，0．425～1．638，2．04～2．76。F基因（535bp）推导氨基酸序列和同源性分析显示，5株NDV分离毒均具有强毒的融合（F）蛋白裂解位点^112R—R—Q-R—R—F^117，5株分离毒间同源性高达99．8％～100．0％。F基因高变区（42～420nt，374bp）分析显示5株分离毒均属于我国特有的基因Ⅸ型NDV，与我国早期的基因Ⅸ型NDV流行株F48E9亲缘关系很近（核苷酸同源性为99．4％～99．6％），而与La Sota和V4等传统疫苗株及目前家禽中流行基因Ⅶ型NDV毒株亲缘关系较远。本研究表明，健康野鸟为基因Ⅸ NDV的携带者，尽管首次获得的5株野鸟源基因Ⅸ型NDV毒株生物学特征差异较大，但均具有强毒的分子生物学特征及致病性，提示对周边环境和家禽养殖业存在潜在威胁。
- 段旭基张鹏吴朋朋马静陈胜利郝华芳张定全韩青松付向晶张渭东杜恩岐杨增岐
- 关键词：野鸟毒力遗传进化分析
- 1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析被引量：6
- 2012年
- 为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
- 付向晶王丹阳王兴龙张渭东宋祥军刘阳坤唐文雅慕国辉刘海金贺生芳杜恩岐杨增岐
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
- 猪源副黏病毒HX01株分离鉴定、全基因测序与遗传变异分析
- 2012年
- 从陕西省户县某猪场患流感样症状病死仔猪肺脏分离得到1株副黏病毒,命名为猪源副黏病毒(PPMV)HX01株,对分离毒株鉴定后进行部分生物学特性研究和全基因测序分析。参考PPMV JL-1株基因组序列设计10对引物,对PPMV HX01株分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。该病毒MDT为91.2h,ICPI和IVPI为0,EID50为10-10.25/mL,表明该毒株属于新城疫弱毒株。序列分析结果表明,PPMV HX01株(全基因序列GenBank登录号:JF795531)与NDV参考毒株全基因核苷酸同源性83.3%～99.8%,该病毒与基因Ⅱ型我国传统弱毒疫苗株La Sota全基因水平和各个基因编码开放阅读框的同源性均在99.5%以上,而与基因Ⅸ型国家标准强毒株F48E9和目前流行的基因Ⅶ型毒株亲缘关系较远。
- 陈胜利刘辉唐文雅郝华芳张渭东王兴龙杜恩岐张淑霞党如意杨增岐
- 关键词：新城疫病毒全基因组
- 多重PCR技术对沙门菌毒力因子检测
- 2012年
- 为了检验多重PCR技术在沙门菌毒力鉴定中的临床应用效果,评价沙门菌在陕西关中地区的流行情况,从该地区多家养殖场分离获得19株细菌,分别利用生化试验与小鼠攻毒试验和多重PCR技术鉴定和检验了沙门菌及其毒力。结果表明,多重PCR技术对分离沙门菌的鉴定结果和生化试验鉴定结果一致,符合率达100%;毒力质粒携带情况与小鼠攻毒结果一致;同时鉴定出陕西省多家养殖场中存在携带毒力基因菌株,值得关注其对畜禽养殖的潜在威胁。多重PCR技术能够快速、简便、灵敏度高和特异性强的鉴定沙门菌,并可鉴定出其毒力,可以用于致病性沙门菌的流行病学检测,值得在兽医临床和畜产品沙门菌污染的检测中推广应用。
- 邱立郝华芳王兴龙张淑霞张耀相张渭东杨增岐
- 关键词：沙门菌毒力多重PCR
