张立媛
- 作品数：14 被引量：24H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院动物医学系更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 延边白鹅IFN-γ基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2015年
- 为制备抗延边白鹅IFN-γ蛋白的多克隆抗体,以已制备的pMD-IFN-γ质粒为模板,通过PCR扩增到延边白鹅IFN-γ基因,经TA克隆和BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将目的基因亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,将经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确的重组蛋白用GST标签纯化试剂盒纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行ELISA检测。结果显示,成功构建了原核表达载体p GEXIFN-γ,表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为43 ku,制备的小鼠抗IFN-γ多克隆抗体效价为1∶16 000。
- 张颖刘恩平陈海迪高旭张立媛于清洋鲁承梁晚枫
- 关键词：IFN-Γ基因原核表达多克隆抗体
- 犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析被引量：4
- 2014年
- [目的]为分离犬细小病毒（CPV）.[方法]采集疑似CPV感染病死犬的组织病料,用胎猫肾细胞（F81）进行病毒分离,并对分离的病毒进行回归动物试验、间接免疫荧光（IFA）及VP2基因PCR扩增鉴定.[结果]经盲传3代后FS1出现明显细胞病变（CPE）,分离病毒可导致2～3月龄犬出现典型犬细小病毒病（CP）的临床症状和特征性病理变化,通过IFA观察到特异性的绿色荧光,PCR扩增到VP2基因全长为1 755 bp,编码584个氨基酸.它与国内外具有代表性的18株CPVVP2基因的核苷酸同源性为98.0％ ～ 99.8％,氨基酸同源性为96.1％ ～99.8％.[结论]用F81细胞成功分离到1株强毒CPV,命名为YBYJ株.
- 张立媛高旭陈海迪于清洋方爽
- 关键词：犬细小病毒VP2基因
- 靶标酶在农药研发中的作用被引量：7
- 2008年
- 靶标酶在农药研发中具有极其重要的作用,大多数新开发的超高活性农药的靶标都是各种重要的代谢酶系统,了解靶标酶的作用机理,将有助于开发新型高效、低毒、专一性好的农药。综述了除草剂和杀虫剂作用于靶标酶的机理、针对专一靶标酶开发的除草剂和杀虫剂品种、昆虫和杂草产生抗药性的机制,并对新型除草剂和杀虫剂的开发前景进行了展望。
- 张立媛贲亚俐刘德立
- 关键词：靶标酶农药除草剂杀虫剂抗性
- 靶标酶在农药研发中的作用
- 农药在国民经济及现代农业发展中具有举足轻重的作用,它们用来防治危害农作物的病虫害、杂草及其他有害生物。进入21世纪后,开发高效、低毒、性质稳定、选择性好、环境相容性好、安全系数高、价格便宜的农药已经成为主要的追求目标,而...
- 张立媛刘德立
- 文献传递
- 鹅细小病毒YBLJ株NS1基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 为了克隆鹅细小病毒（GPV）NS1基因,并对其进行生物信息学分析,试验参照GenBank发表的GPV全基因组序列（U25749）设计扩增GPV-NS1基因的1对特异引物,经PCR扩增,将克隆的GPV-NS1基因进行TA克隆和转化,对鉴定正确的质粒进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析。结果表明：YBLJ株GPV-NS1基因全长1884bp,编码627个氨基酸,与其他11株GPV的NS1基因核苷酸同源性为93.6%～99.9%,氨基酸同源性为96.2%～99.8%;蛋白二级结构中α螺旋占31.42%,β折叠占19.30%,无规则卷曲占49.28%;蛋白三级结构中α螺旋和β折叠占GPV-NS1总蛋白的一半以上的比例。说明GPV-NS1基因和其编码的氨基酸均较保守,尤其氨基酸更为保守,提示NS1蛋白虽然是非结构蛋白,但其对于GPV应该是至关重要的功能蛋白。
- 宋爽高旭于清洋张立媛鲁承
- 关键词：鹅细小病毒NS1基因非结构基因生物信息学
- 昆明鼠乙酰胆碱酯酶基因克隆与表达被引量：1
- 2008年
- 乙酰胆碱酯酶(AChE)作为有机磷和氨基甲酸酯类农药的最适反应底物,在农药残留的快速检测中得到广泛应用,本实验根据家鼠AChE全基因序列设计并合成一对特异性引物,对昆明鼠脑组织AchE进行RT-PCR扩增,扩增产物经T-载体克隆、酶切鉴定和测序分析,结果表明:昆明鼠AChE编码序列长1 845 bp.经BLAST比对发现该序列与已报道序列(No.BC046327)的同源性为99.78%.构建原核重组表达质粒pET-AChE,并在E.coli中得到高效表达,表达蛋白的分子量约为68 000.运用改进的Ellman法成功检测到重组表达蛋白的活性.
- 张立媛李娜张建华杨俊忠张华杨雪婷袁永泽刘德立
- 关键词：乙酰胆碱酯酶RT-PCRCDNA克隆
- 昆明鼠乙酰胆碱酯酶克隆表达与活性测定
- 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AChE，EC3.1.1.7)是生物神经传导中的一种关键酶，主要存在于神经元和神经肌肉接头处，定位于细胞膜和突触前后膜，能快速水解神经递质乙酰胆碱(Acetylch...
- 张立媛
- 关键词：乙酰胆碱酯酶基因表达活性测定
- 文献传递
- 犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因克隆与多克隆抗体的制备
- 犬细小病毒病(CP)是由犬细小病毒(CPV)感染而引起犬科及其肉食性经济型动物患病的一种急性接触性传染病。CP临床患病犬主要有两种表现型，即出血性肠炎型和非化脓性心肌炎型，且发病率及致死率均较高，是危害我国犬科类动物健康...
- 张立媛
- 关键词：犬细小病毒原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2014年
- [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。
- 陈海迪高旭张颖许应天张立媛于清洋鲁承
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒真核表达
- 甲基对硫磷降解菌的分离和甲基对硫磷水解酶基因的克隆表达
- 从湖北沙隆达农药厂污泥处理池中采集活性污泥,通过富集筛选,分离到甲基对硫磷矿化菌 HS-D36。该菌能完全矿化 MP,将 MP 降解为对硝基苯酚(PNP)和二甲基硫代磷酸盐(DMTP),并将 PNP 进一步降解。生理生化...
- 王彬彬张志霞童文羽黄丽张立媛刘德立
- 关键词：甲基对硫磷反硝化
