律清宇
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272的表达、纯化及生物活性分析
- 2012年
- 目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行纯化。实时定量PCR方法检测纯化后的SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后其细胞因子的转录水平变化。结果制备的SSU05_0272蛋白具有较高的纯度,RT-PCR结果显示,SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后能上调IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β的表达,下调IL-12P40的表达。结论 SSU05_0272蛋白能够调控促炎症细胞因子和趋化因子转录水平变化,提示其在猪链球菌致炎症反应中起重要作用。
- 陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇任志强王涛姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌细胞因子
- 2型猪链球菌细胞壁蛋白SSU1664的表达、纯化及活性分析
- 2011年
- 目的:从猪链球菌05ZY中扩增SSU1664基因,在大肠杆菌中表达并评价其重组蛋白的活性。方法:根据05ZY基因组序列设计引物,PCR扩增SSU1664基因,构建表达载体,利用亲和层析对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA法鉴定其免疫原性。结果:SSU1664基因能够在大肠杆菌中可溶性表达,Western blot显示其能与猪链球菌菌体免疫后的大鼠血清反应,ELISA检测显示在人感染猪链球菌患者血清中针对SSU1664蛋白的IgM含量显著性升高。结论:SSU1664蛋白具有较高的免疫原性,可作为潜在的猪链球菌疫苗候选分子和猪链球菌早期感染诊断的标志物。
- 律清宇陈哲郑玉玲郝淮杰姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌细胞壁蛋白疫苗
- 基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法被引量：2
- 2017年
- 目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。
- 吴灿军律清宇郝淮杰赵成娜郑玉玲姜永强
- 关键词：降钙素原时间分辨荧光法磁珠
- 猪溶血素突变体的构建及活性评价被引量：1
- 2012年
- 目的:构建无溶血活性的猪溶血素突变体,并对制备蛋白进行功能评价。方法:根据猪溶素的晶体结构,采用定点突变分别将其353位脯氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸。重组表达的突变体蛋白采用镍柱亲和层析进行柱上复性后,评价纯化蛋白的溶血活性和免疫原性。结果:获得三种猪溶素突变体,SLY(P353A),SLY(P353L)和SLY(P353V)。溶血试证明SLY(P353V)无溶血活性,蛋白质免疫印迹和动物实验显示SLY(P353V)具有免疫原性。结论:猪溶素突变体SLY(P353V)无溶血活性,有免疫原性。
- 任志强郑玉玲甘淑珍律清宇郝淮杰姜永强宗浩
- 关键词：定点突变猪链球菌
- 猪链球菌2型溶血素的纯化及生物学活性研究被引量：4
- 2011年
- 目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一步亲和纯化。通过溶血实验,细胞毒性测定实验评价纯化蛋白的活性。结果:制备的天然和重组猪溶血素纯度均在90%以上,具有较高的溶血活性,较高浓度时能损伤靶细胞,胆固醇能够完全封闭其活性。结论:制备获得的重组猪溶素与天然蛋白具有相近的生物学活性,为进一步研究猪链球菌2型溶血素在猪链球菌致病机制方面的作用奠定了基础。
- 律清宇郝淮杰毕丽丽郑玉玲姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌2型溶血活性细胞毒性
- 猪链球菌胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控被引量：1
- 2012年
- 目的:研究猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。方法:采用免疫荧光、实时定量PCR、Western blot等方法从基因转录和表达水平研究SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。结果:实时定量PCR结果显示SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的表达;免疫荧光和免疫印迹结果也显示,SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的含量。结论:SSU05_0272调控人脑微血管内皮细胞β-catenin的表达。
- 陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌人脑微血管内皮细胞Β-CATENIN
