时婧
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市宝山区科技发展基金上海市高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生历史地理更多>>
- MicroRNA在肺癌中的研究进展被引量：3
- 2011年
- MicroRNA(miRNA)是一类非编码RNA,在转录水平负性调控基因表达,miRNAs几乎参与调节细胞的各个生物过程。在肿瘤组织中,miRNAs表达异常。MiRNAs既可起癌基因功能,又能作为抑癌因子,参与肿瘤的发生及发展。在肺癌组织中miRNAs有特定的表达谱,参与调节肿瘤血管生成等多个过程,并可作为生物标志物用以早期诊断,靶向治疗及临床预后。作为一类新的分子靶标,miRNA为肺癌的诊断和治疗提供了新的方向。
- 时婧姜斌
- 关键词：MICRORNA肺癌
- 表皮生长因子受体-细胞外信号调节激酶信号通路下调肺癌细胞中微小RNA145的表达被引量：6
- 2013年
- 目的探讨肺癌细胞中表皮生长因子受体（EGFR）的活化与微小RNAl45（miR-145）下调之间的关系及其分子机制。方法选择正常肺上皮细胞BEAS-2B、EGFR野生型和突变型肺癌细胞A549、H292、H1650和H1975，采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各细胞中miR-145的表达水平和EGFR的活化水平，并分析二者的相关性。分别以EGF、特异性EGFR酪氨酸激酶抑制剂AG1478或ERK1／2抑制剂U0126处理H1975、A549和BEAS^B细胞，观察各细胞中miR-145的表达。结果肺癌细胞中EGFR的活化与miR-145的表达呈显著负相关（r=-0．926，P=0．024）；EGF可下调miR-145的表达，以BEAS-2B和A549细胞内miR-145的表达下调最为明显，分别下调53．0％（t=30．993，P=0．001）和42．6％（t=14．326，P=0．005）；AG1478可恢复EGFR活化诱导miR．145的下调，经AG1478处理后，H1975细胞内miR-145的表达上调67．5％（t=8．269，P=0．014）。EGFR活化后可激活下游信号蛋白分子ERK1／2，U0126可逆转EGFR活化所诱导的miR-145的下调。结论在肺癌细胞中，EGFR通过ERK1／2信号分子下调miR-145的表达。
- 郭跃辉高丰厚时婧袁海花姜斌
- 关键词：肺肿瘤表皮生长因子受体细胞外信号调节激酶1/2信号传导
- Foxm1对非小细胞肺癌细胞迁移、浸润的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨Foxm1在非小细胞肺癌细胞EMT过程中的作用进而研究其对非小细胞肺癌细胞迁移和浸润能力的影响。方法:采用Western blot和RT-PCR技术检测不同非小细胞肺癌细胞系中Foxm1和EMT相关因子的表达水平。小RNA转染技术干扰H1299细胞中Foxm1的表达。Transwell试验观察Foxm1对非小细胞肺癌细胞迁移浸润能力的影响。结果:Foxm1在四种非小细胞肺癌细胞中均有表达,且H1299表达量相对较高,H1650表达量相对较低。分别以上述两种细胞为试验对象,结果显示Foxm1的表达与EMT相关分子E-cadherin、Vimentin的表达呈明显相关性。CCK-8结果显示:Foxm1抑制剂Thiostrepton处理72h后对H1299、H1650的IC50值分别为1.21μmol/L和3.08μmol/L。Thiostrepton处理和干扰后,Foxm1和Vimentin的表达量明显下降。Transwell小室迁移试验24h后,空白组、阴性对照组和干扰组穿膜细胞数分别为42.6±6.9,36.3±4.2,4.6±1.1;侵袭试验24h后,空白组、阴性对照组和干扰组穿膜细胞数分别为12.3±3.4,10.0±1.4,3.1±2.6。结论:Foxm1在非小细胞肺癌细胞中可能通过调节EMT进程来促进肿瘤细胞的迁移和浸润能力。
- 孔飞飞袁海花王炯轶赵美郭跃辉时婧公小迪王竞姜斌
- 关键词：FOXM1上皮间质转化波形蛋白
- 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478通过叉头转录因子O3a对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478对非小细胞肺癌细胞中又头转录因子M1（FOXM1）、叉头转录因子O3a（FOX03a）的表达调控，以及RNA干扰技术下调FOXM1、FOX03a的表达后对肺癌细胞增殖及其对AG1478药物敏感性的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot法检测肺腺癌细胞株A549中FOXM1和FOX03amRNA和蛋白的表达情况；瞬时转染FOXM1和FOX03a小干扰RNA（siRNA）后，RT—PCR和Westernblot法检测转染效率和相关蛋白的表达；采用CCK-8法、集落形成实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、集落形成能力及细胞周期分布的改变。结果AG1478呈时间依赖性抑制FOXM1mRNA和蛋白的表达（均P〈0．05）。转染FOXM1siRNA后，FOXM1mRNA和蛋白及其细胞周期蛋白B1（eyelinB1）、c-Myc、Bcl-2蛋白的表达明显下降，p21和剪切后多腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved—PARP）蛋白的表达则明显上调（均P〈0．05）。空白组、阴性对照组和FOXMIsiRNA转染组的集落数分别为（135．3±7．0）个、（125．3±7．5）个和（37．3±8．6）个，阴性对照组和FOXMlsiRNA转染组的集落形成抑制率分别为（7．40±0．94）％和（72．40±6．09）％（P〈0．05）。FOXMlsiRNA转染组的G2／M期细胞比例为（55．604-4．83）％，明显高于空白组[（24．30±1．95）％]和阴性对照组[（21．30±2．06）％，P〈0．05]。转染FOXM1siRNA后，可明显增加A549细胞对AG1478的药物敏感性（P〈0．05）。AG1478可诱导活化的FOX03a分子表达并促进其核定位；转染FOX03asiRNA后，FOXM1蛋白水平明显上调，并通过活化的AKT削弱AG1478对FOXM1表达的抑制。结论AG1478通过诱导活化的FOX03a表达及胞核重定位，下调FOXM1的表达，进而抑制肺癌细胞增殖，增加肺癌细胞对AG1478的敏感性。
- 公小迪袁海花王炯轶郭跃辉时婧姜斌
- 关键词：表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478药物敏感性
- EGFR-AKT信号通路下调肺癌细胞miR-145的表达被引量：4
- 2013年
- 目的:研究人肺癌细胞中EGFR的活化对miR-145表达的影响及其可能的分子机制。方法:选择人肺癌细胞株H1975,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞中miR-145的表达水平和EGFR的活化水平。分别以EGF、特异性EGFR酪氨酸激酶抑制剂AG1478、AKT小分子抑制剂LY294002和AKT siRNA处理H1975细胞,观察细胞miR-145的表达情况。结果:肺癌细胞中活化的EGFR下调miR-145的表达,EGF可下调肺癌细胞内miR-145表达,AG1478可逆转EGFR活化所诱导miR-145的下调。EGFR活化后激活下游信号蛋白分子AKT,LY294002抑制AKT活化而恢复EGFR活化所诱导的miR-145下调。AKT siRNA下调AKT蛋白表达,降低pAKT的表达,进而上调miR-145表达。结论:在肺癌细胞中,EGFR可通过AKT信号分子下调miR-145的表达。
- 郭跃辉姜斌时婧王炯轶袁海花
- 关键词：表皮生长因子受体蛋白激酶B
- 肺癌细胞抑癌蛋白PTEN下调机制的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的相关机制。方法:Western blot方法检测肺癌细胞和正常人肺上皮细胞BEAS-2BPTEN蛋白的表达;用放线菌酮(1μg/mL)处理人肺腺癌细胞A549和正常人肺上皮细胞BEAS-2B阻断细胞翻译后,Western blot方法检测不同时相PTEN蛋白的表达。RT-PCR检测肺癌细胞与正常肺上皮细胞PTEN mRNA水平;放线菌素D(1μg/mL)处理肺癌细胞与正常肺上皮细胞阻断新生RNA合成,RT-PCR检测不同时相PTEN mRNA的水平。结果:Western blot结果显示,肺癌细胞中PTEN蛋白表达与正常肺上皮细胞比较有不同程度的降低(0.38～1.32倍);使用放线菌酮处理A549和BEAS-2B后,24h内A549及BEAS-2B细胞PTEN蛋白表达无明显改变。RT-PCR结果显示肺癌细胞中PTEN mRNA与正常人肺上皮细胞相比明显降低(0.41～0.68倍);放线菌素D处理显示肺癌细胞PTEN mRNA降解速率比正常肺上皮细胞降解速率明显加快。结论:肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的主要原因是其mRNA降解加速,这为进一步研究PTEN蛋白低表达的详细分子机制提供了线索。
- 时婧高丰厚郭跃辉袁海花姜斌
- 关键词：肺肿瘤抑癌蛋白PTEN分子机制
- PI3K/AKT信号通路参与AG1478对肺癌细胞中FOXO3a分子的上调及核转位被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)AG1478对非小细胞肺癌细胞(NSCLC)中叉头转录因子O3a(FOXO3a)表达及其在细胞核质分布的调控及分子机制。方法:Western blot法检测AG1478及EGFR下游信号通路抑制剂LY294002、U0126、AG490作用后A549细胞中FOXO3a的表达及其在细胞核质分布情况。瞬时转染AKT、FOXO3a小干扰RNA(siRNA),RT-PCR及Western blot检测转染效率及相关蛋白的表达改变。结果:AG1478呈时间依赖性诱导FOXO3a表达上调并促进其核转位。与U0126、AG490相比,PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002呈时间依赖性抑制p-FOXO3a的表达,促进其核转位;沉默AKT后,p-AKT及p-FOXO3a分子的表达明显下调。结论:AG1478可能通过PI3K/AKT信号通路上调FOXO3a的表达并促进其核转位,进而下调FOXM1及下游增殖蛋白的表达,抑制肺癌细胞的增殖,提示FOXO3a为肺癌治疗及药物开发的重要靶点。
- 公小迪王美玲王炯轶袁海花郭跃辉时婧姜斌
- 关键词：PI3KAKT信号通路
- Thiostrepton介导FOXM1下调对非小细胞肺癌细胞生长及其AG1478药物敏感性的影响
- 2013年
- 目的:探讨硫链丝菌素(thiostrepton,TST)对肺癌细胞A549增殖及其对AG1478药物敏感性的影响。方法:CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测不同浓度TST对A549细胞中FOXM1的表达影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,RT-PCR及Westernblot检测转染效率;集落形成实验检测转染前后细胞集落形成能力的改变。结果:TST明显抑制A549细胞增殖并提高其对AG1478的药物敏感性。TST呈剂量依赖性抑制FOXM1、c-myc、CyclinB1及Bcl-2表达;与对照组相比,FOXM1 siRNA转染组的FOXM1 mRNA及蛋白表达均下降,其下游c-myc、Bcl-2的表达下降,Cleaved-PARP的表达明显上调;转染组集落数为(32.0±3.0)个,明显低于空白组及阴性对照组(NC)[集落数分别为(146.0±4.6)个、(128.7±5.7)个],P<0.05。转染组及NC组细胞集落形成抑制率分别为78.08%、11.87%,转染后细胞的集落形成能力明显降低(P<0.05);AG1478单药组的IC50值是TST与AG1478联用组的5.96倍,P<0.05。结论:TST可能通过下调FOXM1的表达抑制A549细胞的增殖、诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性。
- 公小迪袁海花王炯轶郭跃辉时婧王竞姜斌
- 关键词：FOXM1药物敏感性
- 抑制STAT3增强对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌药物敏感性的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中表皮生长因子受体T790M突变导致的吉非替尼耐药与信号转导及转录激活因子3(STAT3)的相关性。方法:不同浓度STAT3特异性抑制剂JSI-124处理NSCLC H1975细胞和PC9细胞后,CCK-8法检测细胞抑制率,Western blot法检测蛋白水平表达,RT-PCR法检测相关基因mRNA水平的表达。结果:NSCLC中EGFR T790M突变的H1975细胞中STAT3的表达明显高于PC9细胞(P<0.01);JSI-124可剂量和时间依赖性地抑制H1975突变细胞中STAT3的活性,并能增强其对吉非替尼的敏感性。且此现象未在对吉非替尼敏感的PC9细胞中观察到。结论:STAT3因子与表皮生长因子受体T790M突变导致的吉非替尼耐药机制相关,抑制STAT3活性可逆转吉非替尼耐药。
- 王竞姜斌郭跃辉时婧公小迪
- 关键词：吉非替尼信号转导及转录激活因子3
- JSI-124特异性阻断STAT3通路抑制非小细胞肺癌细胞H1975增殖的研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨JSI-124(Cucurbitacin-I,葫芦素)特异性阻断信号转录传导子与激活子3(STAT3)信号通路,抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的效应机制。方法以0、0.08、0.16、0.32、0.64、1.25、2.5、5、10μmol/L和0、0.5、1、3、10μmol/L的JSI-124处理人H1975细胞后,CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡的相关情况、Western blot法检测被处理细胞中STAT3及其相关蛋白的活化情况、RT-PCR法检测STAT3及相关基因mRNA水平的表达。结果 JSI-124可抑制H1975细胞的增殖,并具有时间及剂量依赖性;JSI-124处理细胞后,STAT3的活化水平显著降低(P<0.05);同时H1975细胞随JSI-124浓度的增加,细胞凋亡水平也逐渐上升。结论 STAT3特异性抑制剂JSI-124可显著抑制NSCLC细胞H1975的增殖并诱导其凋亡。
- 王竞姜斌郭跃辉时婧公小迪
- 关键词：STAT3转录因子
