公共文化服务平台

李凯: 作品数：70 被引量：209H指数：8; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生天文地球更多>>

合作作者

蛋鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定被引量：10: 2020年; 传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病蛋鸡群样品进行RT-PCR检测及相关分析,结果显示,引起该鸡群非典型IBD的病原是IBDV新型变异株。这是蛋鸡感染IBDV新型变异株的首次报道,对于更全面了解IBDV新型变异株的流行态势具有重要意义。; 王雨龙范林进姜楠高玉龙李凯李凯刘长军高立潘青刘长军崔红玉祁小乐; 关键词：传染性法氏囊病病毒蛋鸡

MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定被引量：5: 2013年; 提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5′端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.1×106 CFU,平均插入片段长度为1190bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.2×106 CFU,平均插入片段长度为1087bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。; 崔鹏鹏高宏雷李凯高立高玉龙祁小乐王笑梅; 关键词：CDNA文库鸡传染性贫血酵母双杂交

三株传染性法氏囊病病毒超强毒株全基因组的克隆与序列分析被引量：4: 2014年; 为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,3株毒株对SPF鸡的致死率均在60%以上,为IBDV超强毒株(vvIBDV)。遗传进化分析表明,3株分离毒株的A节段均位于超强毒分支。IBDV的B节段分为明显的3个亚群,其中HuB-1、SD10LY01的B节段属于第Ⅲ亚群,HeB10XS02的B节段则属于第Ⅱ亚群。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚群之间在VP1蛋白上存在17个保守氨基酸差异位点,其中第145~147位氨基酸形成独特的'三联体'基序,不同亚群具有不同的基序。本研究结果为更好地了解vvIBDV基因组特征以及致病性分子基础的研究提供了重要理论依据。; 高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅; 关键词：全基因组克隆

36株鸡传染性法氏囊病病毒中国分离株(2009~2012)VP2基因高变区的序列分析（英文）被引量：2: 2015年; [目的]鸡传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的一种高度接触性免疫抑制性传染病。IBDV易变异，给防控提出了挑战。持续监测IBDV的流行十分必要。[方法]对36株源于2009～2012年我国10个省的IBDV毒株的VP2部分基因（包含高变区）进行了扩增、测序。将其与本实验室早期分离的18株IBDV，以及源自我国和世界其它地区的24株参考毒株，进行序列比对分析。[结果]IBDV经典毒株、变异毒株、弱毒株和超强毒株（vvIBDV）在我国同时存在。vvIBDV仍然是我国的主要流行毒株，而且新的亚群正在形成。序列比对分析最示，这些毒株中存在可能与毒力和抗原变异相关的氨基酸突变。[结论]该研究有助于笔者进一步认识IBDV的遗传变异。; 祁小乐秦立廷高玉龙高宏雷李颖颖高立卢珍王念陈玉明张礼洲李凯王永强王笑梅; 关键词：VP2 传染性法氏囊病病毒

一株基因V型禽呼肠孤病毒的分离鉴定与致病性研究被引量：3: 2022年; 为了了解禽呼肠孤病毒(ARV)在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,通过细胞传代、RT-PCR检测及序列分析,从山东省送检的病鸡关节组织中成功分离到1株病毒,将其命名为ARV-SD20-3203,样品中未检测到其他常见外源禽类病毒的核酸。禽呼肠孤病毒主要保护性抗原σC基因的遗传进化分析结果表明,ARV-SD20-3203属于ARV基因V型,与基因Ⅴ型参考毒株918和1017-1的遗传距离较近,其氨基酸序列同源性分别为93.0%和92.4%,而与其他基因型毒株的遗传距离较远。ARV-SD20-3203毒株在LMH细胞上增殖良好;对鸡胚和雏鸡均具有明显的致病性,接种鸡胚可引起100%死亡,接种1日龄SPF雏鸡可引起75%死亡,其中SPF雏鸡接种病毒后第5天为死亡高峰期,第8天之后,不再出现SPF雏鸡死亡。该研究分离到1株基因V型ARV毒株,这为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要的材料。; 刘芮罗丹李凯刘长军祁小乐张艳萍崔红玉潘青高玉龙高立; 关键词：禽呼肠孤病毒变异株遗传进化

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2基因突变对细胞嗜性改变的研究被引量：8: 2010年; 为研究鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV)细胞嗜性改变的分子基础,本研究通过定点突变、重叠延伸PCR(SOE-PCR)等技术,以vvIBDV HLJ-0504株为骨架构建了两组感染性克隆,并借助已建立的反向遗传操作技术进行病毒拯救。IFA检测、电镜观察及RT-PCR鉴定均显示:Q253H/A284T双点突变的pCAGGHLJ0504A889/980HRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染DF1细胞成功拯救出重组病毒(rHLJ0504HT),而未进行双点突变的pCAGGHLJ0504AHRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染组未获得重组病毒。上述结果表明,双点突变Q253H/A284T能使vvIBDV HLJ-0504适应非允许细胞CEF,但未进行Q253H/A284T双点突变的vvIBDV HLJ-0504不能感染非允许细胞CEF,因此,该研究表明VP2的Q253H/A284T两个氨基酸突变是vvIBDV细胞嗜性改变的分子基础。; 高立祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷邓小芸李凯王笑梅; 关键词：病毒拯救细胞嗜性

抗炎免疫调节活性益生菌的体外筛选及其相关组分的初步鉴定被引量：1: 2022年; 为筛选出具有抗炎、抗感染免疫调节活性的益生菌并探究益生菌免疫调节活性的主要成分,本研究分别以10株益生菌Lac.1~Lac.10作为候选菌株,将益生菌的活菌体、灭活菌体、菌体裂解物分别作用于由脂多糖+尼日利亚菌素(LPS+Nigericin)诱导的急性炎症巨噬细胞模型及NF-κB和IRF信号通路报告细胞系J774-DualTM巨噬细胞,经荧光定量PCR检测细胞因子Il-1β和Il-10 mRNA的转录水平,通过检测报告基因SEAP和Lucia荧光素酶的活性分析NF-κB和干扰素调节因子(IRF)信号通路的激活情况。结果显示,在排除发酵液中MRS培养基干扰的情况下,益生菌株Lac.5活菌体能够极显著下调巨噬细胞炎症模型下Il-1β mRNA的转录水平(P<0.0001)、极显著上调Il-10 m RNA的转录水平(P<0.0001),并且能够极显著激活巨噬细胞的NF-κB和IRF信号通路(P<0.0001),进一步将益生菌Lac.5活菌体热灭活和超声破碎后显示,益生菌Lac.5灭活菌体和菌体裂解物的免疫调节活性均显著降低,仅益生菌Lac.5活菌体组分起到抗炎、抗感染的免疫调节活性。综上所述,本研究筛选出一株具有抗炎、抗感染的免疫调节活性的益生菌株Lac.5,并确认了其活菌体为免疫调节组分,对功能益生菌的筛选和新型益生菌治疗制剂的开发具有重要意义。; 米洁兰王志浩王婷婷刘长军祁小乐张艳萍李凯高立潘青王笑梅高玉龙崔红玉; 关键词：益生菌抗炎免疫调节 NF-ΚB信号通路

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP 2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析: 2023年; 鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒(HVT)活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。; 李晓涵杨伏春刘芮高立崔红玉张艳萍刘长军祁小乐王笑梅高玉龙李凯; 关键词：鸡传染性法氏囊病火鸡疱疹病毒 VP2基因

鸡马立克氏病病毒感染对鸡神经系统损伤的研究被引量：4: 2019年; 为研究不同毒力的鸡马立克氏病毒(MDV)在鸡神经系统中的感染规律及其对神经系统的损伤进程,本研究选用不同毒力的血清1型MDV (MDV-1)病毒株感染4日龄的SPF鸡,在接毒后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、17 d、21 d、25 d、28 d和35 d动态检测病毒载量的变化,并对感染后5 d和21 d的不同病毒株感染鸡的脑部和坐骨神经进行组织病理学观察。结果显示,MDV-1强毒株在SPF鸡脑部的复制能力显著高于弱毒株(p<0.05);特超强病毒株BS在脑组织中出现的时间最早,早期复制最快。但不同毒力的MDV-1株在坐骨神经处的复制能力与其毒力无直接的关系。组织病理学观察显示,在感染早期MDV-1强毒株对SPF鸡脑组织的损伤强于弱毒株;在感染后21 d,强毒株和弱毒株造成的脑部损伤存在明显的不同;而在坐骨神经处,强毒株造成的损伤明显强于弱毒株。本研究揭示了不同MDV病毒株在SPF鸡脑和坐骨神经的复制动力学特征和组织病理学特征,为MDV-1在宿主神经系统中的感染、增殖及造成的损伤提供了实验依据。; 周林宜张艳萍孙国荣张峰于正浩高玉龙祁小乐李凯王笑梅刘长军; 关键词：鸡马立克氏病神经系统病毒载量病理损伤

鸡传染性法氏囊病病毒B节段对病毒致病性的影响被引量：2: 2014年; 为研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)3个不同亚群B节段对病毒致病性的影响,本实验将IBDV HLJ0504超强毒株的A节段分别与3个亚群(Ⅰ亚群Gt株、Ⅱ亚群HLJ0504株及Ⅲ亚群HuB-1株)B节段进行组合,拯救了rH4AGtB、rH4AH4B和rH4AHuB3种重组病毒。动物实验结果表明,rH4AHuB引起雏鸡死亡率为80%、rH4AH4B次之为73.3%、rH4AGtB仅为33.3%。此外,rH4AHuB在体内复制的能力明显高于rH4AGtB(p<0.05),但与rH4AH4B无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,IBDV B节段影响病毒的致病性,不同亚群B节段对IBDV致病性的影响作用不同。其中,第II、III亚群的B节段能够提高病毒在体内的复制能力,从而使IBDV的致病性增强,而第I亚群的B节段则降低了病毒在体内的复制能力,使IBDV的致病性减弱。; 高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅; 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒

李凯

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李凯

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈