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乙型肝炎病毒调节Pasha启动子活性的初步研究: 2012年; 目的:研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)对microRNA形成相关因子Pasha表达的调控,并对其作用机制进行初步探讨。方法:用RT-PCR,Western blot的方法检测HepG2细胞及稳定表达HBV的HepG2-H7细胞中Pasha的表达差异。构建Pasha启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒,分别转染HepG2细胞及HepG2-H7细胞,检测HBV对Pasha启动子的影响。将Pasha启动子质粒与HBV 4种蛋白的真核表达质粒共转染HepG2细胞,寻找对启动子影响较大的HBV蛋白。结果:RT-PCR和Western blot的结果显示Pasha在HepG2-H7细胞中的表达较HepG2细胞明显下降。萤火虫荧光素酶活性分析显示HBV能抑制Pasha启动子的活性,且HBx和HBs蛋白对其影响较大。结论:HBV蛋白可以通过抑制Pasha启动子活性调节其在HepG2-H7细胞中的表达。; 任敏曲嘉琳秦栋栋李凯黄爱龙汤华; 关键词：乙型肝炎病毒启动子基因表达与调控

自组装肽纳米纤维水凝胶-磷酸钙骨水泥复合支架的生物活性及对药物体外释放的初步实验研究: 第一部分自组装肽水凝胶支架材料及自组装肽纳米纤维水凝胶-磷酸钙骨水泥复合支架的制备、表征及其理化性质的分析目的设计及制备由Arg等多种氨基酸构成的D型自组装肽(self-assembling peptide,SAP):D...; 李凯; 关键词：磷酸钙骨水泥骨修复

精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达调控的研究: 2011年; 目的研究精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达的影响,并对其作用机理进行初步的探讨.方法利用Real-time PCR检测正常小鼠和Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因的在mRNA水平上的差异表达情况;构建Atp8a1基因的启动子虫荧光素酶报告质粒;将启动子重组质粒转染NTH3T3细胞后,在细胞培养液中加入精胺,检测精胺对启动子活性的影响.结果 Atp8a1基因在Azin1基因敲除小鼠体内的表达量明显增加;精胺能够增强Atp8a1的启动子活性.结论精胺能够通过增强Atp8a1的启动子活性而增强其在Ain1基因敲除小鼠体内转录水平的表达.; 王李英田园园张磊秦栋栋李凯曲嘉琳汤华; 关键词：多胺启动子基因敲除

HBx-shRNA重组腺病毒的构建及功能鉴定: 2013年; 目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble sequence的表达启动子U6连同shRNA亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建pAdTrack-CMV-U6-HBxshRNA和对照pAdTrack-CMV-U6-Scramble sequence穿梭质粒;酶切及DNA测序鉴定后,经PmeⅠ线性化后转化入感受态AdEasier细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence,PacⅠ酶切后转染AD293细胞获得重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA和Ad-U6-Scramble sequence;扩增病毒,测定滴度;以RT-PCR和real-time PCR鉴定重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA对HBx的干扰效果。结果:酶切鉴定得到阳性pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence重组质粒;转染到AD293细胞并包装成功;RT-PCR以及real-time PCR表明,重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA携带的干扰片段能够明显干扰HBx表达(P=0.01)。结论:成功构建了HBx特异性shRNA重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA,它能抑制HepG2.2.15细胞中的HBx的表达,为研究HBx作为肝癌基因治疗作用的一个靶点以及机制奠定基础。; 刘正淑李凯邹程程王森盛艳蕊汤华; 关键词：重组腺病毒乙型肝炎病毒X蛋白 SHRNA 肝细胞肝癌

精胺对Nup98基因的调控研究: 2011年; 利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。; 张磊万涛田圆圆王李英李凯秦栋栋曲嘉琳汤华; 关键词：精胺

腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响: 2011年; 目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制。方法:用基因芯片和Real-timePCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor 1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变。结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达。; 万涛李朝幸田园园王李英秦栋栋李凯曲嘉琳汤华; 关键词：腐胺启动子基因表达

含有Hygromycine抗性的稳定表达HBV的肝癌细胞系的构建: 目的:构建具有Hygromycine抗性稳定表达HBV的细胞模型。方法:1.HindⅢ单酶切pcDNA3.1-HBV质粒和pSEH-Flag质粒,得到1.3倍体的HBV片段和线性化的pSEH-Flag质粒,T4DNA连接...; 王李英李凯曲佳琳秦栋栋汤华; 关键词：肝癌细胞系 HBV

HBx-shRNA重组腺病毒的构建及功能鉴定: 目的构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HBx特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble seque...; 曹漪伊李凯邹程程张靖南盛艳蕊王森张云栋汤华; 关键词：特异性 SHRNA 重组腺病毒

HBx及HBs调节RhoC启动子机制的研究: 2012年; 目的探讨HBx（hepatitis B virus X protein）及HBs（hepatitis B virus S protein）对RhoC启动子的作用机制，分析可能相互作用的启动子调控元件。方法构建RhoC启动子截短突变克隆，双荧光素酶报告分析系统（the dual-luciferase reporter assay system）检测RhoC启动子相对荧光素酶活性，通过分析启动子相对活性变化进而筛寻到起调控作用的启动子区段。过表达Ets-1转录因子，检测RhoC启动子相对荧光素酶活性。结果①成功构建了5个RhoC启动子截短变异克隆。②分别在HepG2细胞和HepG2.2．15细胞中验证了RhoC截短变异启动子活性，确定了起关键作用的启动子区段（-491bp～-320bp、-124bp～-58bp）。③HepG2细胞中分别过表达HBx及HBs，发现启动子区段-491bp～-320bp及-187bp～-124bp可以被HBx及HBs调控。④文献检索结合软件分析这些启动子区段序列，找到了高度相关的转录因子Ets-1、NF-κB、Sp1等。⑤荧光素酶检测和Real-time PCR初步验证了转录因子Ets-1对RhoC的调控作用。结论HBx及HBs可能通过Ets-1等转录因子调控RhoC启动子进而上调RhoC启动子活性。; 秦栋栋李凯曲嘉琳王森邹程程盛艳蕊汤华; 关键词：HBX HBS RHOC 启动子

联合检测血清肿瘤标志物对早期肺癌的临床诊断价值被引量：1: 2010年; 目的探讨联合检测血清肿瘤标志物CEA、CA125、CA19-9、CYFRA21-1、NSE对早期肺癌的诊断价值。方法用电化学发光法分别检测120例Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者和120例肺良性疾病患者及45例正常人的血清CEA、CA125、CA19-9、CYFRA21-1、NSE的含量并进行分析。结果肺癌组患者血清CEA、CA125、CA19-9、CYFRA21-1、NSE水平高于良性肺病患者和健康人,差异有统计学意义(均P<0.01)。其中CEA、CA125、CA19-9阳性率以腺癌最高(分别为69.8%、60.5%、41.9%);CYFRA21-1阳性率以鳞癌最高,NSE阳性率以小细胞肺癌最高,均与其它型肺癌存在显著差异(P<0.01)。联合检测以任一项阳性的敏感性和准确性最高,分别为95.8%和87.4%,优于5项全阳性和单项检测。结论联合检测血清肿瘤标志物CEA、CA125、CA19-9、CYFRA21-1、NSE可提高早期肺癌诊断的敏感性和准确性,对肺癌的早期诊断提供有价值的临床依据。; 陈锋曾雪峰包勇李群李凯李艳萍; 关键词：早期肺癌肺癌标志物

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李凯

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