李梓
- 作品数：49 被引量：702H指数：14
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 湖南省2004年流感病毒优势流行毒株甲3亚型基因特性分析被引量：8
- 2006年
- 目的：了解2004年湖南省流感病毒优势流行毒株甲3亚型的基因特性变异特征。方法：取病原学监测中分离到的13株甲3亚型流感病毒毒株，经鉴定后用鸡胚传代，收获尿囊液提取病毒RNA，进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序；测序结果使用Flu Sequence DatasetExplorer工具进行比较，通过与NCBI数据库中2000-2005年中国的流感病毒H3N2株同源比对后，绘制种系发生树。结果：所测13株甲3（H3N2）亚型毒株的HA1区的320个氨基酸，与甲3亚型国际疫苗株A／wuhan／359／1995相比，抗原决定簇E区、A区、D区、B区及受体结合位点（RBS）后壁和左壁均有多个位点发生氨基酸替换。与2002年流行的A／Fujian／411／2002甲3亚型代表株相比，抗原决定簇及受体结合位点亦有单个或多个位点氨基酸发生了替换。种系发生树显示，13株甲3亚型人流感病毒中有9株同源性较大，独立形成一簇，与A／Fujiart／52／2004较为接近。另外1株与我省2002年分离的毒株最为接近。最后3株则整合进2003～2004年其他省分离到的毒株所形成的簇中。结论：湖南省2004年流感优势流行毒株甲3亚型流感病毒的HA1基因特性发生了变异，可能是导致其流行的主要原因。在HA1基因进化上，时间比地理分布起着更重要的作用。
- 龙智钢刘运芝张烨张红温乐英李梓黄一伟
- 关键词：流感病毒HA1基因氨基酸序列
- 人禽流感酶联免疫诊断方法的建立及其初步应用
- 2007年
- 目的建立人禽流感H5抗体的酶联免疫检测方法（ELISA）。方法用ELISA法检测疑似高致病性禽流感患者及正常人群血清标本中H5IgG抗体。结果23例疑似高致病性禽流感患者血清样品中有4例H5IsG抗体阳性，阳性率为17．40％，与血凝抑制试验（HI）和微量中和试验（NI）相比较，三者符和率为100％。234例正常人群血清H5 IgG抗体检测均为阴性。结论建立的ELISA方法可用于高致病性人禽流感的血清样品初步筛查。
- 鲁健郭瑜李梓曹玉玺王琦王秀平黄晶晶王敏毕胜利舒跃龙
- 关键词：人禽流感免疫球蛋白G酶联免疫吸附测定
- 流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
- 2010年
- 目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1 549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础。
- 李梓张烨唐启慧陈禹宝于在江辛丽陈永坤陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母菌
- 从人分离出两株甲型流感H9N2亚型毒株内部基因特性的研究被引量：6
- 2003年
- 目的 了解 2株从人分离出的H9N2亚型毒株内部基因特性 ,并弄清其来源。方法 用RT PCR扩增目的基因 ,用PGEM T Vector (美国Promega公司 ) ,4℃过夜连接 ,重组质粒转入dH5α细菌 ,筛选阳性菌落 ,酶切鉴定 ,送六合通公司自动测序。然后进行进化树分析。结果 2株测定毒株内部基因均为G9基因系 ,它们相互间除PA基因有差异外 ,其余 5个基因均相同。结论 2株测定毒株的基因组均为G9基因系 ,它们是由携带不同基因特性H9N2毒株的禽群分别直接感染人 。
- 郭元吉温乐英王敏郭俊峰张烨李梓
- 关键词：流感病毒A型H9N2亚型RT-PCR禽流感病毒
- 流感病毒对聚合酶抑制剂类药物敏感性的检测方法研究
- 2019年
- 流感病毒(Influenza virus,Ⅳ)是引起季节性流感流行和流感大流行的主要病原体。抗流感药物是控制流感病毒感染的重要方法,其中,流感病毒的聚合酶抑制剂是最有前途的药物之一。为了对聚合酶抑制剂类药物抗流感病毒药物敏感性的检测方法进行优化,本研究确定不同型别/亚型的季节性流感病毒在不同培养板进行空斑实验的培养时间和药物稀释梯度等条件,并比较免疫染色和结晶紫染色2种方法,在此基础上,利用空斑减少实验检测季节性流感病毒对T-705的敏感性。结果显示:在12孔板中,甲型流感病毒A/Beijing/2/2018(pdmH1N1)和A/Switzerland/8060/2018(H3N2)培养2d为最佳时间,乙型流感病毒B/Beijing/1/2018(B Yamagata)培养2.5d为最佳时间;在96孔板中,A/Beijing/2/2018(pdmH1N1)和A/Switzerland/8060/2018(H3N2)培养20h、B/Beijing/1/2018(B Yamagata)培养24h为最佳时间;0.5 log10为合适的药物稀释度。12孔板和96孔板均可用于季节性流感病毒对T-705的敏感性试验。在12孔板中,2种染色方法无显著性差异;96孔板只能使用免疫染色法。本研究提示,在进行流感病毒对聚合酶抑制剂类药物的敏感性检测中,需严格控制病毒的培养时间和药物的稀释度,12孔板或96孔板均可定量流感病毒以及测定病毒的药物敏感性,微孔板较传统大孔板具有通量高、可自动读取等优势。本研究为其他实验室开展类似检测提供了参考。
- 房琼琼李梓成艳辉黄维娟赵翔梦遥李多谭敏菊隗合江王大燕
- 关键词：药物敏感性
- 2015年甘肃省外环境禽流感病毒监测预警分析被引量：2
- 2017年
- 目的 了解甘肃省外环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况,科学指导全省禽流感防控工作.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法（Real-time fluorescence quantitativePolymerase Chain Reaction,real-time PCR）对2015年全省14个市州采集的标本2 015份进行禽流感病毒核酸检测.结果 FluA、H5、H7、H9的检出率依次为：19.90％、0.05％、0和19.65％.FluA检出率最高的环境标本为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本（31.09％）,最低的为粪便标本（13.85％）.FluA检出率在12月份最高（28.18％）,6、7月份最低（8.59％和8.66％）.定西市和陇南市禽流感病毒核酸FluA和H9的检出率显著高于其他市州（χ^2=4.523 - 88.059,P=0.000-0.043〈0.05）.结论 2015年甘肃省涉禽外环境中存在的禽流感病毒污染主要为H9亚型,未检出H7N9,应加强监测,做好禽流感预警.
- 李保娣李红育张慧刘丽琦李梓于德山何健
- 关键词：禽流感病毒聚合酶链反应
- 中国人感染H5N1亚型高致病性禽流感病例病毒分离培养探讨
- 2009年
- 目的分析中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本采集和病毒分离培养之间的关系。方法对2005年10月至2009年3月中国大陆人感染H5N1高致病性禽流感病例标本进行病毒分离培养。结果标本采集时间主要集中在发病后的0-14d，其中0-7d采样的标本阳性率分布相对集中，病毒分离的效果要更加显著；标本采集类型主要为呼吸道标本，其中下呼吸道标本的病毒分离阳性率分布较集中，病毒分离效果也更明显。结论人禽流感病例标本采集时间及标本的采集类型对病毒分离有一定的影响，应在发病的急性期侧重于采集下呼吸道标本，这样利于提高病毒分离的阳性率。
- 邹淑梅张烨李梓董婕赵新生董丽波温乐英徐翠玲王敏郭俊峰隗合江高荣宝王秀平舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型病毒培养
- 流感H10亚型重配病毒在不同细胞生长能力的比较
- 2016年
- 目的评估两株流感H10亚型重配病毒在不同细胞内的生长特性，筛选可用于疫苗生产的细胞。方法基于A／Jiangxi-donghu／346／2013（H10N8）病毒的表面基因，利用反向遗传技术构建以高产PR8病毒为骨架的RG—H10N8（6＋2）和RG—H10N1（7＋1）两种重配病毒，在SPF鸡胚增殖病毒后．经序列测定确认，以质粒拯救RG-PR8病毒为对照，比较病毒在MDCK和Vero细胞上的生长敏感性；以相同MOI感染MDCK细胞后，比较病毒的生长特性。结果两种流感H10重配病毒和RG—PR8病毒在MDCK细胞上均能检测到病毒滴度，但是在Vero细胞上，RG—H10N8检测不到病毒滴度，RG-H10N1和RG—PR8可以检测到病毒滴度；用相同的MOI感染MDCK细胞后，RG—PR8生长能力强于两种重配病毒，两种重配病毒间差异不大。结论两种流感H10重配病毒在MDCK细胞上生长能力较好，MDCK较Vero细胞对H10重配病毒更敏感，来源不同的NA会影响病毒在Vero细胞上的生长敏感性。
- 刘丽琦周剑芳鲁健李梓曾晓旭赵翔王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒
- 两株京科猪H1 N1亚型流感病毒内部基因来源的研究被引量：2
- 2005年
- 目的通过内部基因研究了解两株猪(H1N1)亚型流感病毒内部基因是否含有禽流感病毒基因节段及是否与猪群中H9N2亚型毒株发生了基因重配。方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增。PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着进行核苷酸序列测定,然后用MegAlign(Version1.03)和Editseq(Version3.69)软件进行基因进化树分析。结果两株京科猪H1N1病毒内部基因除PB2基因节段有所不同外,其余5个基因节段均相同,但与猪H1N1流感病毒内部基因相近,然而,与古典型猪H1N1毒株有差异。结论两株京科猪H1N1病毒不是基因重配株,它们的内部基因均属猪H1N1流感病毒基因系。
- 郭元吉温乐英张烨王敏郭俊峰李梓舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型基因
- 云南省2004年流感流行情况分析被引量：3
- 2005年
- 目的了解2004年云南省流感流行情况及病毒的变异情况。方法定期采集流感样病人标本以及从暴发疫情中采集标本,利用MDCK细胞从标本中分离病毒,对分离病毒利用血清学方法进行抗原性分析;对病毒的HA1基因进行序列测定,用DNAstat软件进行基因种系发生树分析病毒的遗传变异情况。结果2004年云南省共分离到甲3亚型流感病毒50株,乙型流感病毒56株,没有分离到甲1亚型流感病毒。62%的甲3亚型流感病毒与A/福建/411/2002(H3N2)的血凝效价有4倍或以上差别;2004年4月份以后分离的甲3亚型流感病毒HA1区氨基酸序列上与A/福建/411/2002(H3N2)相比第145位K>N,159位Y>F,189位S>N,226位V>I发生氨基酸替换。5.8%的Yamagata系毒株与B/上海/361/2002血凝效价有4倍或以上的差别,HA1区氨基酸序列与B/上海/361/2002比较,第36、40、129、131、179、232、255位发生了氨基酸替换。10.8%的Victoria系毒株与B/浙江/2/2002有4倍或以上的差别。与B/浙江/2/2001比较第121,126,197位发生了替换。结论2004年云南省流行甲3亚型流感毒株和乙型流感毒株,并且它们的抗原性和基因特性发生了变异。
- 张烨徐闻赵群温乐英王敏白优昌宁得明蒋立秦明芳罗春蕊郭俊峰李梓郭元吉舒跃龙
- 关键词：流感病毒抗原性变异基因
