李潇
- 作品数：5 被引量：15H指数：4
- 供职机构：中国科学院南海海洋研究所更多>>
- 发文基金：广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用被引量：4
- 2008年
- 目的:建立能稳定分泌抗诺如病毒(Norovirus)N蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株,制备抗诺如病毒核衣壳蛋白的mAb,为诺如病毒的早期快速检测及致病机制的研究提供实验材料。方法:用E.coli表达的GⅡ组广州株NVgz01(DQ369797)Norovirus-N蛋白免疫BALB/c小鼠,通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,使用HAT选择性培养基培养融合细胞,用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性,并将各mAb之间进行配对。结果:通过细胞融合和克隆化,共筛选出4株分泌抗Norovir-us-N蛋白抗体的杂交瘤细胞株N2C3、N7C2、N4B1、N8A9。间接ELISA和Western blot检测结果表明,这4株mAb都可以与E.coli表达的GⅡ组广州株Norovirus-N蛋白产生特异性反应,并且能与天然粪便标本中的GⅡ组Norovirus产生特异性反应。配对结果显示N2C3和N7C2之间配对,对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度。结论:获得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb,为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础。
- 李潇周荣盛慧英王长兵田新贵王友绍
- 关键词：NOROVIRUS核衣壳蛋白单克隆抗体
- 诺如病毒GII/4型核衣壳蛋白的表位鉴定及其单克隆抗体的初步应用研究
- 诺如病毒(Norovirus，NoV)原名诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus，NLV)，属杯状病毒科(Calici virus，HuCV)，诺如病毒属。诺如病毒是全球范围内引起人类急性胃肠炎的最重要的病原...
- 李潇
- 关键词：诺如病毒核衣壳蛋白单克隆抗体抗体制备
- 诺如病毒广州株全基因组序列测定及分析被引量：8
- 2007年
- 目的 探讨广州地区儿童感染的诺如病毒基因组分子结构特点和基因组类型。方法 参考GenBank上的诺如病毒MD145-12基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增诺如病毒基因组，克隆于T载体上，测定序列，用Clustal W／X、DNAStar、RAT（recombination analysis tool）等软件分析基因组序列。结果 诺如病毒NVgz01全基因组为7558bp，提交到C,enBank上的序列号为DQ369797，3’端非编码区末端长45bp，病毒基因组有3个开放阅读框（ORF），ORF1长5100bp（5～5104nt），ORF2基因长1623bp，位于基因组中5085～6707nt之间，ORF3基因长807bp（6707～7513nt），其中ORF1、ORF2两基因有19个核苷酸的重叠区；NVgz01全基因组核苷酸序列与GenBank上诺如GI组Norwalk68、Southampto、BS5、Chiba、WUG1的同源相似性在43％～44％之间，与GⅡ组MD145、Farmington Hills、B4S5、Hawaii、Lordsdale、SaitamaU1、Mc37同源相似性在76％～90％之间。NVgz01的ORF1与Mc37核苷酸序列同源性为94％，但ORF2与Mc37的同源性只有65％；NVgz01的ORF2与Fannillgton Hills（AY502023）同源性为最高（94％），ORF1的同源性为88％。结论广州地区儿童腹泻感染的诺如病毒NVgz01株全基因组序列为7558bp，GenBank序列号为DQ369797，NVgz01与诺如病毒的GⅡ组同源性较高，确认NVgz01株属于诺如病毒GⅡ组；根据ORF1、ORF2的同源性差异和RAT程序分析初步认为NVgz01可能是重组病毒。
- 曾其毅钟家禹李潇苏嫌莉朱冰陈翊林涛肖密丝盛慧英周荣龚四堂
- 关键词：诺如病毒基因组同源重组
- 诺瓦克病毒广州株N蛋白基因的克隆、表达及抗原性鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的克隆、表达和鉴定诺瓦克病毒广州株NVgz01全长N蛋白。方法在成功构建诺瓦克病毒广州株全基因组克隆并测序的基础上,将全长N蛋白基因克隆到表达载体pET28a(+)上,经IPTG诱导表达后,利用Ni2+亲和层析柱对重组N蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组诺瓦克病毒N蛋白基因在大肠杆菌中可以高效表达,其相对分子质量为62×103,可在Ni2+亲和层析柱上高度纯化;经抗原检测试剂盒检测和免疫学方法分析,均表明重组N蛋白具有良好的抗原性。结论本研究克隆和表达了诺瓦克病毒广州株的全长N蛋白,为诺瓦克病毒诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。
- 李潇周荣胡龙波田新贵钟家禹盛慧英王长兵王友绍
- 关键词：抗原克隆表达
- 广州检出星状病毒4型的全基因组序列测定及分析被引量：4
- 2006年
- 目的探讨广州地区儿童感染的星状病毒基因组分子结构特点和基因型。方法参考GenBank上的星状病毒基因组设计分段扩增引物,进行RT-PCR分段扩增星状病毒基因组,克隆于T载体上,序列测定,用Clustal W和DNAStar软件分析基因组序列。结果星状病毒HASTVgz01全基因组为6721bp,提交到GenBank上的序列号为DQ344027,其中5′端非编码区(5′UTR)长82bp,3′端非编码区末端长81bp,病毒基因组编码区全长6558个核苷酸,分别编码ORF1a、ORF1b、ORF2,ORF1a基因长2763bp(83～2845nt),ORF1b基因长1557bp(2785～4332nt),其中ORF1a、ORF1b两基因有71个核苷酸的重叠区；ORF2全长2316nt,位于基因组中4325～6640nt。ASTVgz01与GenBank中8种基因型星状病毒的ORF2基因氨基酸序列同源性比较发现,HASTVgz01与4型的同源性为93％,其他的同源性在61％～70％之间。结论广州地区儿童腹泻感染的星状病毒HASTVgz01全基因组为6721 bp,GenBank序列号为DQ344027,HASTVgz01与4型星状病毒的ORb2基因氨基酸序列比较同源性为最高,确认HASTVgz01是4型星状病毒。
- 朱冰钟家禹李潇陈翊林涛吴灶和周荣龚四堂
- 关键词：星状病毒基因组
