李瑞伟 作品数:7 被引量:64 H指数:4 供职机构: 上海海洋大学水产与生命学院 更多>> 发文基金: 公益性行业(农业)科研专项 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 国家现代农业产业技术体系建设项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
草鱼出血病细胞培养灭活疫苗微囊制备与口服免疫效果研究 草鱼出血病是我国养殖草鱼最为严重的病毒性疾病,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)。草鱼出血病流行范围广,持续时间长,死亡率高,对草鱼养殖业造成了巨大的经济损失,严重威胁我国草鱼养殖... 李瑞伟关键词:草鱼出血病 口服免疫 文献传递 患病大鲵摩氏摩根菌的分离与鉴定 被引量:19 2014年 从患病大鲵肝脏中分离到1株优势菌SX01,通过Biolog微生物自动鉴定系统、16S rDNA序列分析及构建系统发育树的方法对纯培养的细菌进行鉴定,并进行人工感染试验及药敏试验。结果表明,该分离菌为摩氏摩根菌(Morganella morganii),对大鲵具有致病性。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南等10种药物高度敏感。 李瑞伟 曾令兵 张辉 范玉顶 周勇 杨星关键词:药敏试验 大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究 被引量:17 2013年 为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。 孙建滨 曾令兵 张辉 孟彦 徐进 周勇 王芳 李瑞伟 刘秋凤关键词:虹彩病毒 灭活 患病黄额闭壳龟中产酸克雷伯菌的分离与鉴定 被引量:3 2012年 从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮等10种药物高度敏感。 周勇 曾令兵 李瑞伟 高正勇 孙建滨 范玉顶关键词:药敏试验 草鱼出血病细胞疫苗微囊制备与体外释放研究 被引量:4 2013年 以海藻酸钠、壳聚糖以及草鱼出血病细胞灭活疫苗为原材料,采用复凝聚法制备草鱼出血病口服微囊疫苗。通过单因素试验和正交试验,研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度以及加入疫苗体积对微囊疫苗包封率的影响,确定了其最佳制备工艺。结果显示,各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为:海藻酸钠浓度>疫苗加入量>壳聚糖浓度>氯化钙浓度;制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为:海藻酸钠浓度为1.5%,壳聚糖浓度为1%,氯化钙浓度为4%,加入疫苗体积为2 mL。该微囊疫苗平均粒径为(7.02±3.95)μm,平均包封率为60.53%,平均载蛋白量为8.12 mg/g,在pH 7.4的PBS溶液、生理盐水溶液中具有良好的释放性能。 李瑞伟 曾令兵 张辉 肖艺 周勇 范玉顶 刘秋凤 孙建滨关键词:草鱼出血病 细胞疫苗 海藻酸钠 壳聚糖 微载体规模化培养草鱼细胞与病毒的工艺及优化 被引量:6 2013年 研究了在悬浮培养系统中使用微载体Cephodex规模化培养草鱼肾脏组织细胞CIK和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的条件并进行了优化。结果表明,Cephodex是一种适合CIK细胞贴壁生长的微载体,搅拌方式(搅拌时间/静止时间)及血清浓度(0%、5%、10%、15%)对CIK细胞在Cephodex微载体上的贴附效率有影响。贴附期以转速35 r/min、每静置45 min搅拌2 min的间歇搅拌方式最佳,8 h后细胞贴附率可达90%以上;细胞贴附期培养基中的血清浓度为5%。当Cephodex微载体用量10 mg/mL、细胞初始接种密度2.5×105cells/mL、连续搅拌速度40 r/min时可获得最佳的细胞生长效能。用优化的最佳工艺条件大规模培养CIK细胞,接种感染复数为0.1的GCRV病毒3 d后,培养细胞出现典型细胞病变效应,病毒滴度(lgTCID50/mL)为8.5。本项研究为草鱼出血病疫苗规模化制备技术研究奠定了基础。 刘秋凤 曾令兵 周勇 马杰 范玉顶 张辉 李瑞伟关键词:微载体 患病大鲵类志贺邻单胞菌的分离与鉴定 被引量:16 2014年 从患病濒死大鲵(Andrias davidianus)肝脏中分离到1株病原菌YZ01,经Biolog微生物系统鉴定及16S rDNA序列的系统发育分析,均表明该病原菌为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。人工感染试验可致健康大鲵出现与自然患病大鲵相同的症状,并从感染患病大鲵体内再次分离到该病原菌。药物敏感试验表明,该菌株对头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素和头孢呋辛等18种药物敏感。 杨星 曾令兵 李瑞伟 张辉 范玉顶 周勇关键词:类志贺邻单胞菌 药敏试验