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羊种布鲁氏菌M5-90疫苗株bp26基因突变株的构建及其免疫原性研究: 布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生菌,由其引发的布鲁氏菌病是一种在世界范围内广泛存在并传播的、以流产和发热为特征的人畜共患传染病。该病对人、畜危害极大,近年呈现出回升的势头。“检、杀、免”是当前防控、消灭动物布鲁氏菌...; 李臻; 关键词：布鲁氏菌免疫原性; 文献传递

牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用被引量：4: 2010年; 以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的保守基因5＇-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为101~106copies/μL,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高102倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%（18/25）,与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。; 任艳陈创夫乔军王鹏雁盛金良王远志张沾李臻; 关键词：牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应子VceC功能的初步研究被引量：17: 2011年; 为研究布鲁氏菌(Brucella)Ⅳ型分泌系统效应子VceC的功能,本研究从羊种布鲁氏菌16M株基因组中克隆vceC基因片段,插入pEGFP-N1中,构建真核表达重组pEGFP-vceC。经脂质体转染HPT-8细胞,荧光显微镜观察、western blot鉴定目的蛋白在HPT-8细胞中表达情况,检测细胞凋亡、NO释放量及LDH活力。Western blot检测显示VceC在细胞中表达,转染pEGFP-vceC后的细胞凋亡、细胞上清液中NO释放量及LDH活力比对照组显著增加(p<0.05)。本研究初步表明VceC蛋白具有细胞毒性作用,为进一步研究VceC的功能奠定了基础。; 张沾陈创夫张辉张艳张娜李臻陈瑞花张豫; 关键词：羊种布鲁氏菌

布鲁氏菌M5-90疫苗株virB2基因缺失株的构建及鉴定被引量：14: 2010年; 【目的】构建布鲁氏菌M5-90疫苗株virB2基因缺失株。【方法】利用常规分子生物学技术构建自杀载体pGEM-7zf-ΔvirB2-sacB,通过同源重组的方法,将电转化后的布鲁氏菌分别经100 mg/L氨苄抗性筛选和5%蔗糖敏感性筛选,获得基因缺失株。对获得的基因缺失株进行PCR鉴定和稳定性检测。【结果】成功构建M5-90ΔvirB2基因缺失株,并且该缺失株在10代以内未发生回复突变。【结论】为研发新型布鲁氏菌弱毒基因缺失活苗奠定基础。; 李臻张红星唐利燕陈创夫王远志; 关键词：布鲁氏菌基因缺失株

布鲁氏菌M5-90 bp26表位缺失株的构建及对肝脏的影响研究: 2013年; 目的:构建羊种布鲁氏菌表位缺失株M5-90 bp26,以小鼠的肝脏为模型进行毒力评价。方法:利用SacB负筛选标记的方法构建两株M5-90 bp26表位缺失株并进行生物学性状和Western Blot验证;用3.0×106CFU/0.2mL M5-90疫苗株及缺失株分别免疫BALB/c小鼠,在10d、20d、30d处死小鼠,HE染色观察肝脏的病理变化。结果:经测序和Western Blot分析成功获得M5-90Δbp261、M5-90Δbp262两株突变株;常规生物学鉴定未发生生物学性状的改变;HE染色表明bp26缺失株毒力均低于疫苗株M5-90。结论:结合CFU计数及脾脏指数首次证实肝脏可作为毒力判定的标准;构建的布鲁氏菌基因突变株M5-90Δbp262具有毒力弱,并具有血清学鉴别诊断的"标签"作用,可作为未来鉴别诊断新型布鲁氏菌疫苗的候选株。; 程婷婷任晓丽陈创夫王远志石峰李臻张科张俊波; 关键词：布鲁氏菌疫苗肝脏

布鲁氏菌M5-90ΔvirB2基因缺失株免疫小鼠抗体及相关细胞因子的检测研究被引量：7: 2011年; 对构建的M5-90ΔvirB2基因缺失株进行免疫原性初步研究。分别用1×106 CFU剂量的M5-90ΔvirB2株与M5-90疫苗株接种BALB/c小鼠,SAT试验和RBPT试验验证体液免疫产生的抗体水平;用ELISA方法检测小鼠外周血细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α。结果表明,抗体水平检测结果显示M5-90ΔvirB2弱于M5-90;细胞因子检测水平显示M5-90ΔvirB2也低于M5-90。本研究为布鲁氏菌疫苗株M5-90的改造奠定了基础,并提供了相关的理论依据。; 李臻陈创夫王远志葛阳春张红星杨明锋张辉; 关键词：布鲁氏菌基因缺失株抗体水平细胞因子

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李臻