杜琴
- 作品数：44 被引量：144H指数：7
- 供职机构：川北医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划四川省应用基础研究计划项目四川省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学农业科学生物学更多>>
- 慢性乙型肝炎患者血清中sICOS和sPD-1升高及意义被引量：5
- 2015年
- 目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中可溶性可诱导共刺激分子(s ICOS)和可溶性程序性死亡蛋白1(s PD-1)的蛋白水平,并初步探讨其意义。方法收集80例CHB患者和30例健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs)和血液上清。根据HBs Ag和HBe Ag测定值,将CHB患者分为HBe Ag(-)和HBe Ag(+)两组;并将HBe Ag(+)组分为免疫耐受期和免疫清除期。用ELISA法检测以上研究对象外周血上清中s ICOS和s PD-1蛋白浓度。用实时荧光定量PCR检测PBMCs中ICOS、PD-1和PD-1Δex3的表达。结果与对照相比,s ICOS在CHB患者中均增高(P<0.05);而s PD-1仅在HBe Ag(+)组显著增高(P<0.01),其中免疫清除期比免疫耐受期患者增高更明显(P<0.05)。CHB患者的s PD-1与AST呈正相关(P<0.01);且HBe Ag(+)组的s PD-1与ALT呈正相关(P<0.01);CHB患者的s ICOS与HBV-DNA呈弱的负相关性(P<0.05)。活化前,两组CHB患者的ICOS mRNA表达水平均降低(P<0.05)。结论 s ICOS和s PD-1在CHB患者的血清中均异常增高,提示s ICOS和s PD-1可能参与了CHB的发生发展。
- 王东生杜琴刘彦信张国元郑德先
- 关键词：ICOSPD-1慢性乙型肝炎
- 重组SSB蛋白表达、鉴定及评价被引量：1
- 2019年
- 目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*His-pet41a重组表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌OverExpress C41(DE3)中,经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用C端的His标签(Histag)进行Ni-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达形式,蛋白印迹法(WB)鉴定重组蛋白的免疫原性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和特异性。结果 PCR扩增获得目的基因,菌落PCR示重组表达质粒构建成功,转化感受态OverExpress C41(DE3)后经诱导有高效表达,SDS-PAGE显示GST-SSB-6*His重组蛋白为上清可溶性表达,WB示重组蛋白有足够的免疫原性,能与外周血中的抗SSB抗体发生特异性反应,特异性达100%。结论成功构建了GST-SSB-6*His-PET41a重组表达质粒,经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步建立应用于国产仪器的全自动定量检测抗SSB自身抗体的磁微粒化学发光试剂,奠定了基础。
- 杜琴卢小岚王强汪光蓉罗文依王舒琪姚丽华张国元刘剑平王东生
- 关键词：SSB重组质粒蛋白表达蛋白鉴定
- 利用石墨烯—二硫化钼—全氟磺酸树脂检测尿酸的方法
- 本发明公开了一种利用石墨烯—二硫化钼—全氟磺酸树脂检测尿酸的方法，其特征在于：按下列步骤进行，a、制备石墨烯—二硫化钼—全氟磺酸树脂混合物；b、吸取石墨烯—二硫化钼—全氟磺酸树脂复合物酒精悬浊液0.005ml，滴加至玻碳...
- 周京国晏波王东生刑艳青玉凤蒋兴亮杜琴
- 文献传递
- 慢性肝炎患者血清中sICOS和sPD-1的表达及意义
- 目的:检测慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)和慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者血清中可溶性可诱导共刺激分子(soluble inducible co-stim...
- 杜琴
- 关键词：ICOSPD-1慢性肝炎乙型丙型
- 文献传递
- 尿素解离法降低新型冠状病毒IgM和IgG检测结果假阳性的效果评价被引量：1
- 2020年
- 探讨引起新型冠状病毒(SARS-CoV-2)免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)抗体检测结果假阳性的干扰因素,改良检测方法,完善实验室检测方案。本研究收集2020年1月2日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的门诊及住院患者血清样本共74份,其中19例为SARS-CoV-2核酸检测确诊阳性,10例为其他呼吸道病毒IgM抗体阳性,10例肝炎病毒抗体IgM阳性,20例类风湿因子IgM阳性,15例抗核抗体阳性。采用胶体金免疫层析法(试剂A、试剂B)分别对研究对象血清进行SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体检测,并对结果为SARS-CoV-2 IgM或SARS-CoV-2 IgG阳性的病例进行分析,发现造成检测结果假阳性的可能因素。再采用合适浓度的尿素对检测为阳性结果的血清及3例SARS-CoV-2 IgM阳性的COVID-19早期患者血清进行解离,解离后分别重新测定SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体。采用SPSS19.0统计软件对数据进行统计学分析。结果显示,19例COVID-19确诊患者血清中,试剂A检出SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体阳性数为15例及18例,试剂B检出SARSCoV-2IgM、IgG抗体阳性数均为12例;20例类风湿因子IgM阳性患者血清中,试剂A检出SARS-CoV-2IgM、IgG抗体阳性数为16例及14例;15例高滴度ANA阳性患者血清中,试剂B检出4例SARS-CoV-2 IgG抗体阳性。尿素解离浓度为2 mol/L时,试剂A检出的RF-IgM阳性血清中的16例SARS-CoV-2 IgM抗体有14例转阴,14例SARS-CoV-2 IgG抗体有13例转阴,而试剂A在COVID-19确诊患者血清中检出的SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体均未出现阴转;尿素解离浓度为4 mol/L时,试剂B检出的ANA阳性血清中的4例SARS-CoV-2 IgG抗体全部转阴,而在COVID-19确诊患者血清中检出的的SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体均未出现阴转。另外,经过尿素解离后,试剂A和试剂B在3例COVID-19早期患者血清中检出的SARS-CoV-2 IgM抗体也都未出现阴转。本研究提示,IgM型类风湿因子易造成试剂A检测血清SARS-CoV-2 IgM、IgG结果的假�
- 汪光蓉牟代勇卢小岚杜琴张兵王强郭晓兰
- 关键词：胶体金免疫层析法免疫球蛋白M免疫球蛋白G假阳性反应尿素
- 尿素解离法纠正2019新型冠状病毒IgM抗体检测结果假阳性的效果评价被引量：10
- 2020年
- 目的:了解引起2019新型冠状病毒(2019-nCoV)免疫球蛋白M(IgM)抗体检测结果假阳性的干扰因素,探讨相应的解决方案。方法:2020年1月22日至2月15日就诊于川北医学院附属医院的不同病原体感染及相关慢性疾病患者血清样本共71份,采用胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法检测71例患者血清中2019-nCoV IgM抗体,其中包括6例2019-nCoV肺炎确诊患者,5例A型流感病毒IgM阳性患者,5例B型流感病毒IgM阳性患者,5例肺炎支原体IgM阳性患者,5例嗜肺军团菌IgM阳性患者和29例类风湿因子IgM阳性患者,5例高血压患者,5例糖尿病患者,6例人类免疫缺陷病毒感染患者;然后对2019-nCoV IgM抗体阳性结果进行分析,探讨造成检测结果假阳性的可能因素;再采用尿素解离试验对阳性结果的血清进行解离,以尿素最佳解离浓度进行解离后重新测定2019-nCoV IgM抗体。采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:6例2019新型冠状病毒肺炎确诊患者和18例中高水平类风湿因子IgM阳性患者血清中2019-nCoVIgM抗体检测为阳性,其余47例受检者血清均为阴性。胶体金免疫层析法的尿素解离浓度为6 mol/L时,上述18例中高水平类风湿因子IgM阳性患者的17例的2019-nCoVIgM抗体检测为阴性,6例新型冠状病毒肺炎确诊患者血清检测仍为阳性。酶联免疫吸附法的尿素解离浓度为4 mol/L,解离时间为10 min,且亲和指数<0.46设定为阴性时,15例类风湿因子IgM阳性血清的2019-nCoVIgM抗体检测为阴性,6例2019新型冠状病毒肺炎确诊患者血清检测仍为阳性。结论:中高水平IgM型类风湿因子易造成胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法检测血清2019-nCoVIgM结果的假阳性,针对检测结果阳性的样本进行尿素解离将有利于降低假阳性的发生概率。
- 王强杜琴郭斌郭杨柳方莉郭晓兰
- 关键词：冠状病毒属尿素免疫球蛋白M假阳性反应免疫层析法
- 血清NSE,CEA,SCC,CYFRA21-1和ProGRP联合检测诊断肺癌及与其病理分型的关系被引量：4
- 2013年
- 目的 探讨神经元特异度烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌抗原（SCCA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）和胃泌素释放肽前体（ProGRP）在肺癌诊断中的价值,分析几项肿瘤标志物水平与其病理分型的关系.方法 采用化学发光法分别检测64例肺癌患者,58例肺良性疾病患者血清NSE,CEA,SCCA,CYFRA21-1及ProGRP的含量.结果 肺癌组各肿瘤标志物血清水平皆显著高于肺部良性疾病组（t=3.36～7.41,P值均〈0.05）,NSE＋CEA＋CYFRA21-1＋SCCA＋ProGRP 联检对肺癌诊断的灵敏度、特异度和准确度分别为81.25%,82.76%和81.97%,灵敏度和准确度明显大于各标志物单项检测（t=3.11～4.13,P值均〈0.05）,肺癌肿瘤标志物血清水平与病理类型有关,血清NSE,ProGRP水平在小细胞肺癌（SCLC）时显著升高（F=31.20,P〈0.05）,CEA在腺癌时显著升高（F=25.36,P〈0.05）,而血清CYFRA21-1和SCCA水平则在鳞癌时显著升高（F=11.24～25.36,P值均〈0.05）.结论 NSE,CEA,CYFRA21-1,SCCA及ProGRP肿瘤标志物检测有利于指导肺癌的病理分型,其联检明显提高了对肺癌诊断的灵敏度.
- 汪光蓉王强凡瞿明杜琴杜娟李淑云张国元
- 关键词：鳞状细胞癌抗原细胞角蛋白19片段胃泌素释放肽前体
- PML—RARα融合基因相关蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化
- 2017年
- 目的构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒，在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化。方法利用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）以PML-RARα全长质粒为模板分别扩增出长度均为1200bp的PML和RARα序列，并将它们分别插入PET32a（＋）质粒中，构建重组表达质粒，化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆，菌落PCR筛选阳性转化子，双酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。正确重组的表达质粒分别命名为PML-Flag-PET32a（＋）和Flag-RARα-PET32a（＋）。将正确重组的表达质粒转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，利用表达蛋白的组氨酸＂标签＂（His-tag）进行Ni2＋-树脂柱亲和层析纯化，SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结果PCR扩增获得目的基因，重组表达质粒经EcoRI／HindIII双酶切和测序鉴定证明构建正确。转化感受态BL21（DE3）并经诱导后得到高效表达，SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白。结论成功构建重组表达质粒，并经诱导表达后可纯化出目的蛋白，为进一步的抗体制备等实验奠定了基础。
- 杜琴蔡嘉镜蒋春萍徐磊张国元王东生
- 关键词：重组质粒蛋白纯化急性早幼粒细胞白血病
- 川东北地区表面健康人群抗核糖体P蛋白抗体参考范围调查
- 2014年
- 目的建立适合川东北地区表面健康人群抗核糖体P蛋白抗体（Anti-Rib-P）的参考范围。方法体格检查和相关的实验室检查均无异常的表面健康人群共118人,按性别和年龄层次进行分组,采用Alegria全自动酶联免疫分析仪和配套的检测试剂以及检测参数检测其血清Anti-Rib-P浓度。结果 Anti-Rib-P检测系统的天内和天间的检测精密度良好,其他性能参数符合临床使用要求。表面健康人群〈40岁年龄组血清Anti-Rib-P浓度为（2.15±0.50）IU/ml,明显低于≥40岁年龄组的（2.80±1.00）IU/ml,差异有统计学意义（Z=-5.872,P=0.000）;而不同性别之间血清Anti-Rib-P检测结果差异无统计学意义（Z=-0.368,P=0.713）。血清Anti-Rib-P参考范围在〈40岁年龄组为0.00~2.90 IU/ml,≥40岁年龄组为0.00~5.02 IU/ml。结论Anti-Rib-P参考范围应按年龄分别设定,建立一个适合本地区人群的Anti-Rib-P参考范围具有重要的临床应用价值。
- 蔡艳娟王强王东生凡瞿明汪光蓉杜琴卢小岚张国元
- 关键词：抗核糖体P蛋白抗体
- 不同方法检测HBeAg低值血清的效果评价被引量：2
- 2014年
- 目的 通过检测HBeAg低值血清,评价ELISA方法和时间分辨免疫荧光法（IrMA）的检测效果.方法 对2014年1月至6月我院HBeAg阳性结果进行回顾性分析,同时收集门诊和住院受检人群化学发光法（CMIA）检测HBeAg结果为1.00～29.99 S/CO区间内的低值血清样本81份,采用ELISA和IFMA法进行复孔检测.结果 HBsAg阳性人群的HBeAg检测结果与HBsAg呈正相关（r=0.680,P＜0.01）.HBeAg阳性样本占HBsAg阳性样本的32.69％,HBeAg低值样本占HBeAg阳性样本的39.35％,均主要分布于青中年人群.HBeAg阳性率随HBsAg阳性人群的年龄增高而降低（x2=386.041,P＜0.01）.ELISA和IFMA法检测HBeAg低值样本的阳性率分别为60.49％和45.68％,两者比较差异无统计学意义（x2=3.569,P＞0.05）.两种方法在检测1.00～4.99S/CO、5.00～29.99 S/CO水平的阳性率分别为25.64％、92.86％（ELISA）和10.26％、78.57％（IFMA）.相关性分析中,ELISA和IFMA法检测HBeAg低值样本的结果与CMIA方法检测结果均呈明显正相关（r=0.868和0.858,P＜0.01）.结论 由于方法灵敏度方面的原因,ELISA和IFMA法在检测HBeAg低值样本时存在较高比例的漏检情况,因此上述两种方法不适用于检测HBeAg低值样本以评估受检者感染HBV的疾病状况.
- 严明生王强杜琴王东生蔡艳娟汪光蓉凡瞿明张国元
- 关键词：ELISA时间分辨免疫荧光法化学发光法乙肝E抗原
