杨浩萌
- 作品数：16 被引量：95H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院饲料研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国际科技合作重点项目计划新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 木聚糖酶XYNB分子中折叠股B1和B2间的疏水作用对酶热稳定性的影响被引量：13
- 2005年
- 对来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响。将突变酶XYNB′在毕赤酵母中表达,表达的XYNB′经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,XYNB′的耐热性比XYNB有明显的提高,但最适温度与原酶一样为6 0℃。另外,XYNB′的最适pH、Km值及比活性均有一定的改变。实验证实了木聚糖酶XYNB的氮端芳香族氨基酸之间的疏水相互作用与其热稳定性相关,为进一步的结构与功能研究提供了优良的基因材料。
- 杨浩萌姚斌罗会颖张王照王亚茹袁铁铮柏映国伍宁丰范云六
- 白地霉ch-3低温脂肪酶基因的克隆与表达被引量：4
- 2007年
- 目的:脂肪酶是世界主要工业用酶制剂之一,用基因工程方法克隆与表达白地霉(Geotrichum candidum)ch-3菌株的低温脂肪酶基因。方法:用PCR方法从白地霉ch-3的总DNA中扩增得到一种低温脂肪酶基因lip,将PCR产物连接到pBluescriptⅡSK(+)载体上,测序证明正确后再将基因lip插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9α中,含有目的基因的重组质粒在毕赤酵母中进行诱导表达。结果:毕赤酵母成功表达了lip基因,其活性为37U/mL。SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶蛋白相对分子质量约62kDa,比推测分子量大,lip的表达产物可能被糖基化修饰。初步研究表明:重组脂肪酶最适温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活性,对热敏感。结论:实现了低温脂肪酶在毕赤酵母的成功表达,为进一步研究低温酶催化机制和工业化应用打下基础。
- 付建红姚斌杨浩萌黄火清石玉瑚
- 关键词：低温脂肪酶基因克隆巴斯德毕赤酵母
- 来源于橄榄绿链霉菌A1的木聚糖酶XYNB的分子改良
- 本研究从提高木聚糖酶XYNB的热稳定性入手，通过定点突变和DNAshuffling的方法对木聚糖酶XYNB进行定向改良，将突变酶在毕赤酵母中表达纯化并对其酶学性质进行分析，以确定突变效果。同时，对该酶的催化残基、影响最适...
- 杨浩萌
- 关键词：木聚糖酶定点突变毕赤酵母表达
- 木聚糖酶分子结构与重要酶学性质关系的研究进展被引量：45
- 2005年
- 木聚糖是一种多聚五碳糖 ,是植物细胞中主要的半纤维素成分。木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶 ,它在饲料、造纸、食品、能源工业和环境科学上有着广阔的应用前景。随着分子生物学、结构生物学的发展及蛋白质工程的应用 ,对木聚糖酶结构和功能的研究不断深入。这里重点阐述与酶的活性、热稳定性、作用pH、等电点、底物亲和性及催化效率等重要性质相关的分子结构研究进展 ,讨论了其进一步的研究发展方向。研究木聚糖酶结构与功能的关系 ,对进一步加深木聚糖酶作用机制的了解、指导木聚糖酶的分子改良有重要意义。
- 杨浩萌姚斌范云六
- 关键词：木聚糖酶热稳定性
- 高比活木聚糖酶的表达载体
- 本发明提供了一种高比活木聚糖酶的表达载体。具体地，本发明提供了包含高比活的木聚糖酶基因的表达载体pBinxynB’和pBinSPxynB’及其在转基因植物生物反应器中的应用。将高比活性木聚糖酶基因插入高效植物表达载体，通...
- 姚斌王亚茹杨培龙罗会颖杨浩萌史秀云
- 文献传递
- 一种共表达溶菌酶和木聚糖酶的方法、及制备作为替代抗生素的饲料添加剂的方法
- 本发明涉及农业生物技术领域，具体地，具体涉及一种共表达溶菌酶和木聚糖酶的方法、及制备作为替代抗生素的饲料添加剂的方法。所述方法包括在毕赤酵母中同时表达核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的溶菌酶酶基因和核苷酸序列如SE...
- 黄火清王苑杨浩萌罗会颖柏映国涂涛苏小运张杰王亚茹姚斌
- 文献传递
- 白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达
- 2008年
- 构建了白地霉脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,为进一步进行蛋白质工程改造和脂肪酶应用奠定了基础。从新疆昌吉市油脂化工厂含油冻土中分离得到1株低温脂肪酶产生菌-白地霉ch-3。该菌发酵上清液中的脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活力。应用PCR技术从白地霉ch-3基因组DNA中克隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,将该基因与原核表达质粒载体pET-22b(+)连接,构建重组质粒pETl-ip1,转化E.coliBL21(DE3),酶切鉴定,筛选得到重组菌。十二烷基磺酸钠-聚丙希酰胺(SDS-PAGE)显示重组脂肪酶Ⅰ的相对分子质量约为5.8×104,酶活为2.73 U/mL,表明lip1基因的表达产物具有正常的生物学活性。白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能够在大肠杆菌中有效地表达。
- 付建红姚斌杨浩萌欧阳平凯石玉瑚
- 关键词：大肠杆菌脂肪酶基因克隆
- 来源于Penicillium sp.C1的水产用中性植酸酶基因在毕赤酵母中的表达及性质研究被引量：1
- 2020年
- 通过简并引物和TAIL-PCR技术从青霉Penicillium sp. C1菌株的基因组DNA中克隆得到一个新的植酸酶基因,命名为phyC1。其结构基因全长1 477 bp,5’端包含58 bp的内含子序列,该基因编码472个氨基酸和一个终止密码子,前23个氨基酸为信号肽。将PhyC1的成熟蛋白的编码基因在毕赤酵母菌GS115中高效分泌表达,重组蛋白经硫酸铵沉淀和阴离子交换柱和分子筛纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明:重组植酸酶PhyC1最适pH为6.5,在pH5.0-10.0的条件下具有较好的稳定性;重组植酸酶PhyC1最适温度为50℃。与现有商品植酸酶相比,PhyC1具有两个显著的特性,如低温条件下具有高活性,尤其是在低于20℃时;在中性pH 7.0条件下仍具有90%以上的相对酶活性,因此,植酸酶PhyC1的优良特性为其在水产行业的应用奠定基础。
- 李雅楠余利红陈新美杨浩萌黄火清
- 关键词：中性植酸酶青霉毕赤酵母
- 高比活木聚糖酶的表达载体
- 本发明提供了一种高比活木聚糖酶的表达载体。具体地，本发明提供了包含高比活的木聚糖酶基因的表达载体pBinxynB’和pBinSPxynB’及其在转基因植物生物反应器中的应用。将高比活性木聚糖酶基因插入高效植物表达载体，通...
- 姚斌王亚茹杨培龙罗会颖杨浩萌史秀云
- 文献传递
- N13D、S40E点突变提高木聚糖酶XYNB的热稳定性被引量：12
- 2007年
- 对来源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模和序列比较,设计了N13D、S40E的定点突变,以期改善中温酶XYNB的热稳定性。突变酶N13D、S40E分别在毕赤酵母中表达,经纯化后与野生型酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,突变酶N13D和S40E在70℃处理5min,热稳定性比XYNB分别提高了24.76%和14.46%;突变酶N13D的比活性比XYNB提高了22%。在其他性质方面突变酶N13D、S40E与野生型酶XYNB基本相似。通过对木聚糖酶XYNB的定点突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料。
- 杨浩萌王亚茹伍宁丰姚斌
- 关键词：木聚糖酶热稳定性定点突变
