汤华
- 作品数：50 被引量：30H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- HBs-shRNA重组腺病毒构建及鉴定
- 目的构建表达HBV S区短发卡RNA(shRNA)的重组腺病毒,并在体外验证其干扰效果方法(1)从真核表达载体pGenesil-HBs-shRNA中酶切得到U6启动子及S区shRNA片段。构建穿梭质粒pAdTrack-C...
- 张靖南邹程程曹漪伊盛艳蕊王森张云栋汤华
- AZI基因被捕获的鉴定实验
- 2010年
- 目的 确立基因捕获细胞中被捕获的基因名称. 方法 Southern印迹确定合适的限制性内切酶,用质粒拯救（plasmid rescue）获得含有细胞染色体DNA的质粒,测序.结果 本次实验中,被捕获载体整合的基因是AZI基因. 结论质粒拯救方法能确立质粒整合细胞染色体上准确的位置.
- 唐任宽田园园张磊王李英汤华
- HBx-shRNA重组腺病毒的构建及功能鉴定
- 2013年
- 目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble sequence的表达启动子U6连同shRNA亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建pAdTrack-CMV-U6-HBxshRNA和对照pAdTrack-CMV-U6-Scramble sequence穿梭质粒;酶切及DNA测序鉴定后,经PmeⅠ线性化后转化入感受态AdEasier细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence,PacⅠ酶切后转染AD293细胞获得重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA和Ad-U6-Scramble sequence;扩增病毒,测定滴度;以RT-PCR和real-time PCR鉴定重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA对HBx的干扰效果。结果:酶切鉴定得到阳性pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence重组质粒;转染到AD293细胞并包装成功;RT-PCR以及real-time PCR表明,重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA携带的干扰片段能够明显干扰HBx表达(P=0.01)。结论:成功构建了HBx特异性shRNA重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA,它能抑制HepG2.2.15细胞中的HBx的表达,为研究HBx作为肝癌基因治疗作用的一个靶点以及机制奠定基础。
- 刘正淑李凯邹程程王森盛艳蕊汤华
- 关键词：重组腺病毒乙型肝炎病毒X蛋白SHRNA肝细胞肝癌
- 利用捕获载体解析小鼠基因在生物发育过程中的功能被引量：12
- 2005年
- 利用特殊构建的捕获载体(trappingvector)随机插入胚胎干细胞(ES细胞)的基因组,被插入基因的转录过程被迫中止,用这样的ES细胞制作出小鼠,可以得到被插入基因的小鼠变异系,通过对变异小鼠的表现型分析,阐明该基因在生长发育过程中的功能和作用。
- 汤华唐任宽
- 关键词：生长发育胚胎干细胞基因功能
- 乙型肝炎病毒调节Pasha启动子活性的初步研究
- 2012年
- 目的:研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)对microRNA形成相关因子Pasha表达的调控,并对其作用机制进行初步探讨。方法:用RT-PCR,Western blot的方法检测HepG2细胞及稳定表达HBV的HepG2-H7细胞中Pasha的表达差异。构建Pasha启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒,分别转染HepG2细胞及HepG2-H7细胞,检测HBV对Pasha启动子的影响。将Pasha启动子质粒与HBV 4种蛋白的真核表达质粒共转染HepG2细胞,寻找对启动子影响较大的HBV蛋白。结果:RT-PCR和Western blot的结果显示Pasha在HepG2-H7细胞中的表达较HepG2细胞明显下降。萤火虫荧光素酶活性分析显示HBV能抑制Pasha启动子的活性,且HBx和HBs蛋白对其影响较大。结论:HBV蛋白可以通过抑制Pasha启动子活性调节其在HepG2-H7细胞中的表达。
- 任敏曲嘉琳秦栋栋李凯黄爱龙汤华
- 关键词：乙型肝炎病毒启动子基因表达与调控
- HBV通过增强DNAJB4启动子活性调节其在HepG2．2．15细胞中的表达被引量：4
- 2009年
- 目的初步探讨HBV与DNAJB4基因的转录调节作用机制。方法用RT-PCR及Real—timePCR检测HepG2．2．15细胞和HepG2细胞中DNAJB4在mRNA水平上的表达差异。构建DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒，分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞，比较虫荧光素酶活性。结果在mRNA水平上，DNAJB4在HepG2．2．15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的2．59倍，且二者有显著性差异（P〈0．01）。DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性是其对照组的2．28倍。转染HBs和HBc表达质粒组的相对荧光素酶活性分别是其对照组的2．11倍和1．77倍，而HBx、HBp表达质粒对荧光素酶活性没有影响。结论在HepG2．2．15细胞中，HBV能通过增强DNAJB4启动子活性增加DNAJB4转录水平的表达，其中HBs和HBc蛋白起主要作用。
- 张小花万涛张磊田园园黄婷婷汤华
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2.2.15细胞基因表达与调控
- 多聚嘧啶序列结合蛋白的表达、纯化及其与HBV转录后调节元件RNA结合的分析
- 2008年
- 目的在大肠埃希菌中表达并纯化多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)-His融合蛋白,并鉴定PTB与HBV转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)RNA的体外结合。方法构建PTB-His融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法进行纯化。用磁珠结合与Western印迹的方法,验证PTB与HPRE RNA在体外的特异性结合。结果成功构建了PTB-His融合蛋白的原核表达载体,并在体外大量表达后用亲和层析的方法得到了高纯度的PTB-His融合蛋白。磁珠结合沉淀与Western印迹实验证明PTB与HPRE RNA在体外能特异性的结合。结论体外表达的PTB融合蛋白能与HPRE RNA特异性的结合。
- 程丽英李毅蔡雪飞刘湘黄爱龙汤华
- 关键词：原核表达载体
- 乙型肝炎病毒HBx蛋白抑制TTRAP启动子活性的体外研究
- 2010年
- 旨在探讨体外培养条件下HBx蛋白对TTRAP(TRAF and TNF receptor-associated protein)基因转录水平表达的影响。用RT-PCR及Real-time PCR检测TTRAP在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达;构建TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒;分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞,比较虫荧光素酶活性。RT-PCR和Real-time PCR结果显示,TTRAP在HepG2.2.15细胞中的表达量分别是其在HepG2细胞中表达量的44.9%和27.8%(P<0.05)。TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性,与对照组相比下降了43.8%。转染HBx表达质粒组的相对荧光素酶活性与其对照组相比下降了35%,而转染HBc、HBs及HBp表达质粒组对相对荧光素酶活性没有影响。因此证实HBx蛋白能抑制TTRAP启动子活性。
- 张小花张磊田园园王丽英黄爱龙汤华
- 关键词：HBX蛋白启动子活性HEPG2.2.15细胞HEPG2细胞
- HBV通过增强RhoC的启动子活性提高其在HepG2.2.15中的表达
- 王李英田园园张磊任敏黄婷婷张小花黄爱龙汤华
- 丙型肝炎病毒P7蛋白体外原核表达状况的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:扩增丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV)P7蛋白基因,克隆到多个原核表达系统,观察P7蛋白在体外表达的情况,获取具有生物学活性的HCVP7重组蛋白。方法:设计扩增全长HCVP7基因片段的特异引物,以H/FL质粒DNA(含HCV1acDNA全长序列)为模板,通过PCR扩增全长HCV P7基因,定向克隆到pQE30、pGEX 4T-2、pET32a(+)3种不同类型的原核表达载体中。将重组后包含HCVP7基因的原核表达载体转化表达型大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或SG13009(PREP4),并做异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定HCV P7蛋白原核表达的情况。结论:获得可溶性的重组蛋白GST-HCVP7和Trx-HCVP7,为进一步研究P7蛋白的生物学功能奠定基础。
- 陈可胡接力胡源张文露王增产汤华黄爱龙蔡雪飞
- 关键词：丙型肝炎病毒原核表达
