王增禄
- 作品数：45 被引量：158H指数：7
- 供职机构：第四军医大学药学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队“十一五”科技攻关课题国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 槐角染料木素的结构鉴定及预防骨质疏松症的药理研究被引量：13
- 2004年
- 目的 确证槐角染料木素的化学结构并研究其药理学作用。方法 ①以核磁共振、红外光谱、质谱和紫外光谱对槐角染料木素的结构进行鉴定。②♀SD大鼠随机分为 6组 :对照组 (假手术 +生理盐水 ) ;模型组 (去卵巢 +生理盐水 ) ;尼尔雌醇组 (去卵巢 +尼尔雌醇 ) ;大剂量组 (去卵巢 +染料木素 18mg·kg-1) ;中剂量组 (去卵巢 +染料木素 9mg·kg-1) ;小剂量组 (去卵巢 +染料木素 4 5mg·kg-1)。在手术后d 8开始灌胃给药 ,每日 1次 (尼尔雌醇组每周 1次 ) ;分别于术后第 0、1、2、4、8、12周从各组各取 10只大鼠 ,处死取骨作骨密度、骨Ca2 + 、P3 + 、Mg2 + 和组织形态学测定。结果 ①四谱技术测定数据确证 ,槐角染料木素的化学结构为5 ,7,4′ 三羟基异黄酮。②动物实验结果表明 ,染料木素在中、小剂量可明显增强模型大鼠股骨和胫骨的骨密度 ,特别在第 4周与模型组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;小剂量组可明显升高骨Ca2 + 水平 ,其它各用药组均可升高骨P3 + 、Mg2 + 水平 ;中、小剂量组可明显增加模型大鼠的骨小梁面积百分比 (%Tb .Ar)和骨小梁厚度 (Tb .Th)。结论 槐角染料木素与市场销售的染料木素化学结构相同 ;槐角染料木素在中、小剂量组具有预防去势大鼠骨质丢失的作用 。
- 王增禄孙纪元王多宁王剑波谢艳华王四旺赵文明
- 关键词：染料木素化学结构药理作用骨质疏松
- 八种酶和胰蛋白酶抑制剂的联产(英文)被引量：1
- 2001年
- 目的 为提高酶产率和综合利用胰脏而对酶的联产工艺进行实验研究 .方法 采用酸、碱抽提、硫酸铵分级沉淀、膜过滤、色谱分离等技术 ,从 1kg猪胰脏中同时分离纯化9种酶 .结果 各酶的比活力及总活力分别为 :胰蛋白酶16 0 0 0苯甲酰 - L -精氨酸 (BAEE) U· mg- 1 蛋白 ,2 8.4× 10 6BAEE U ;弹性蛋白酶 12 0 U· mg- 1 蛋白 ,6 0 0 0 U;缓激肽酶40 .2 8U· mg- 1 蛋白 ,3876 U;胰凝乳蛋白酶 2 2 0 0 0 ATEE U· mg- 1蛋白 ,19.5× 10 6 ATEE U;胰蛋白酶抑制剂 2 0 89T.I.U·mg- 1蛋白 ,3172 7T.I.U;羧肽酶 A9.5 U·mg- 1蛋白 ,3988U ;羧肽酶 B 15 4.8U· mg- 1 蛋白 ,346 75 .2 U ;核糖核酸酶 A 80 Kunitz U· m g- 1 蛋白 ,80 0 U;脱氧核糖核酸酶 I137.8U· m g- 1 蛋白 ,10 6 0 0 0 U .结论 经多次优选优化 ,建立了简易合理的工艺流程 ,从同批猪胰脏中联合纯化 8种高活性酶和胰蛋白酶抑制剂 .为充分利用胰脏资源 ,降低成本 。
- 王增禄张英起卢军茹炳根赵文明
- 关键词：胰脏蛋白酶抑制剂
- γ射线辐射对透明质酸质量的影响被引量：8
- 1995年
- γ射线辐射对透明质酸质量的影响王增禄，杨泽田，徐平西（第四军医大学低温分子生物室，西安７１００３２）ＥＦＦＥＣＴＯＦγ－ＲＡＹＲＡＤＩＡＴＩＯＮＯＮＨＹＡＬＵＲＯＮＩＣＡＣＩＤ￥ＷＡＮＧＺｅｎｇ－Ｌｕ；ＹＡＮＧＺｅ－Ｔｉａｎ；ＸＵＰｉｎｇ－Ｘｉ（Ｃｒ...
- 王增禄杨泽田徐平西
- 关键词：Γ射线透明质酸眼科药物
- 融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长的抑制作用
- 2010年
- 目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。
- 王小霞张英起颜真薛晓畅王增禄张衍国余春艳
- 关键词：干扰素Α2AΑ-黑素细胞刺激素
- 含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。
- 李曼黄晨张伟王增禄李晶杜锐孙世仁张鹏张英起
- 关键词：蛋白转导域原核表达纯化生物学活性
- 花椒籽仁油对实验性高脂血症大鼠的防治作用被引量：42
- 2007年
- 目的:研究花椒籽仁油对实验性高脂血症大鼠脂质代谢的影响,探讨其对高脂血症的防治作用机制.方法:30只健康SD大鼠随机分为3组:对照组、高脂模型组及花椒油组,对照组普通饲料喂养,其余两组均高脂饲料喂养,花椒油组同时给予花椒籽仁油灌胃,10wk后断颈取血,进行血脂、流变学检测,取肝组织测定SOD,CAT活性、MDA含量及抑制羟自由基能力.结果:与模型组相比,花椒油组的CHOL,TG,HBV,LBV降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C增高(P<0.05),而肝组织匀浆的SOD,CAT活性及抑制羟自由基能力均增强(P<0.05,P<0.01),MDA含量降低(P<0.05).结论:花椒籽仁油具有调节血脂、改善血流变、防止脂质过氧化的作用,其作用机制与其主要成分多不饱和脂肪酸的作用有关.
- 刘永英王多宁刘渊声杨颖赵雁武王增禄杨继庆
- 关键词：高脂血症脂质代谢血液黏度氧自由基
- 应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α被引量：14
- 2002年
- 目的 应用基因工程技术 ,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子 α (novelrecombinanthumantumornecrosisfactor α ,nrhTNF α) ,并对其生物学活性、理化性质进行鉴定 ,为进入临床前研究提供基础。方法 应用PCR技术 ,将hTNF α基因的 5′端 17个氨基酸的编码序列删除 ,基因中Pro8Ser9Asp10 的编码序列用Arg Lys Arg的编码序列取代 ,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代。将hTNF α突变基因 ,插入原核高效表达载体pBV2 2 0中 ,构建高表达工程菌株。纯化表达产物 ,对连续 3批制备的新型rhTNF α,按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定。结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明 ,nrhTNF α与天然的hTNF α相比较 ,N末端缺失了 7个氨基酸 ,13位氨基酸为Arg Lys Arg ,其后为天然hTNF α 11位以后的氨基酸。 15 7位Leu的密码子被Phe的密码子所取代。产物表达量占菌体蛋白的 6 7.4 %。经 (NH4) 2 SO4沉淀、Q SepharoseF .F .及S SepharoseF .F .柱层析分离纯化后 ,产品的纯度达 99% ,比活性达 1× 10 9IU/mg蛋白。结论成功地制备了nrhTNF ,对连续 3批制备的nrhTNF α按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定 。
- 张英起赵宁李波刘磊王增禄朱宝娥颜真苏成芝
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子-Α基因表达大肠杆菌
- 恒河猴肌注新型重组人肿瘤坏死因子的药代动力学被引量：2
- 2001年
- 目的 研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在恒河猴体内的药代动力学行为 .方法 采用 EL ISA法测定恒河猴 im nrh TNFα后的血药浓度 .结果 恒河猴按 40 μg·kg- 1 剂量 im nrh TNFα后 ,血液中的平均达峰时间为 1.7h;峰浓度的个体差异较大 ,范围为 5 75～ 112 0 ng· L- 1 ,平均峰浓度为 833ng· L- 1 ;药物在血液中的消除符合一房室模型 ,半衰期 T1 / 2 为 1.4～ 2 .4(平均 1.9) h.结论 nrh TNFα im后 ,能被恒河猴吸入血 ,在血液中的消除符合一房室模型 ,在灵长类动物恒河猴的药代动力学行为与啮齿类动物小鼠的相类似 。
- 陈拯民蔡永明曾勇高连用顾以保李全胜刘昌孝张英起赵宁王增禄
- 关键词：肿瘤坏死因子药代动力学猕猴属
- 聚乙二醇化重组人Cu,Zn-SOD改构体制备工艺的优化及其半衰期测定
- 2014年
- 目的优化聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)改构体(rmhCu,Zn-SOD)的制备工艺,以期延长其在体内的半衰期。方法以相对分子质量5 000的甲氧基聚乙二醇乙酸-羟基琥珀酰亚胺酯(mPEG-SPA)作为修饰剂,对rmhCu,Zn-SOD蛋白进行化学修饰,并对mPEG-SPA与rmhCu,Zn-SOD的摩尔比、反应缓冲液、反应温度、反应方式及反应时间进行优化;利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤色谱法对PEG化rmhCu,Zn-SOD进行分离纯化,并检测其在小鼠体内的半衰期。结果 PEG化rmhCu,Zn-SOD的最佳制备工艺为mPEG-SPA与rmhCu,Zn-SOD的摩尔比1.5∶1,缓冲液为pH 8.5的磷酸盐缓冲液,反应液混匀后4℃静置反应1 h;纯化的修饰产物的纯度约为90%,残余酶活力为(84.3±2.3)%,蛋白修饰率为(65.4±1.9)%;与未修饰的rmhCu,Zn-SOD相比,PEG化rmhCu,Zn-SOD的半衰期延长了约7倍。结论优化了PEG化rmhCu,Zn-SOD的制备工艺;PEG化修饰有效延长了该改构体蛋白在体内的半衰期。
- 张琨张月娟万一王增禄
- 关键词：改构体聚乙二醇化学修饰半衰期
- 无标签重组人硫氧还蛋白的大规模表达、纯化及活性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:利用基因工程的方法原核表达无标签的重组人硫氧还蛋白(rhTrx)并对其进行大规模表达、纯化和鉴定。方法:从人胚胎肾HEK293细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,经两步离子交换层析纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting、HPLC、MALDI-TOF-MS及经典的胰岛素二硫键还原法对重组蛋白进行鉴定。结果:构建成功了rhTrx基因表达载体;实现了rhTrx在原核细胞中的可溶性表达;纯化出的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析证实为rhTrx;HPLC和MALDI-TOF-MS分析表明,纯化出的目的蛋白纯度大于95%;胰岛素二硫键还原法证实纯化出的rhTrx具有生物学活性。结论:成功构建了rhTrx的原核表达体系,建立了rhTrx的纯化和鉴定方法,为其进一步的理论研究和生产开发提供了有效基础数据。
- 郭云萍孙璐张立剑王增禄高超杨强刘毅张英起屈延陶凌
- 关键词：表达纯化生物活性
