王晓艳
- 作品数：23 被引量：85H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划黑龙江省国际合作项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡传染性贫血病毒vp2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 本文利用特异性引物将从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到vp2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28...
- 王晓艳王笑梅高玉龙高宏雷陆桂丽
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP2基因克隆表达
- 文献传递
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析被引量：7
- 2006年
- 用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。
- 程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位
- J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立被引量：12
- 2005年
- 本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL_2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法。
- 郭艳付朝阳宋素泉高宏雷王笑梅王英张厚双王晓艳胡建民
- 关键词：J亚群禽白血病ELISA诊断方法
- 鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究被引量：1
- 2008年
- 利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。
- 林欢高宏雷王晓艳高玉龙宋修庆李术强王笑梅
- 关键词：鸡贫血病毒VP1基因VP2基因毕赤酵母
- 噬菌体展示技术分析鸡贫血病毒VP1蛋白抗原结构特征
- 引言：鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)是圆环病毒科(Circoviridae),环形病毒属(Gyrovirus)的唯一成员(Pringle,1999)。CAV 基因组由3个部分或完全重叠的开...
- 王晓艳高玉龙高宏雷付朝阳邓小芸林欢祁小乐王笑梅
- 文献传递
- 鸡传染性贫血病毒VP2基因的表达及其免疫活性分析被引量：4
- 2006年
- 利用特异性引物从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到VP2基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至BamHⅠ和SalⅠ双酶切处理的表达载体pET-28a中,构建了原核表达质粒pET-28-VP2。将pET-28-VP2转化至感受态E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约31kDa的目的蛋白以可溶性形式表达于上清中。Western blot分析发现,表达产物与鸡传染性贫血的阳性血清发生特异性反应。纯化蛋白免疫小鼠后制得的多抗可以与全病毒发生反应,证明其具有免疫原性,为进一步研究VP2蛋白的功能及开展CIAV疫苗及诊断试剂的研制奠定了基础。
- 王晓艳王笑梅高玉龙高宏雷陆桂丽
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP2基因克隆
- 鸡传染性贫血病毒重组抗原间接ELISA诊断方法的建立
- 本研究在国内首次应用重组抗原,成功建立了检测鸡传染性贫血病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法.确定抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清最适稀释度为1:100,其作用时间为60min,酶标抗体最适作用时间的60min,S/...
- 王英王笑梅高宏雷付朝阳包晓玮王晓艳
- 关键词：鸡传染性贫血病毒间接ELISA血清抗体流行病学血清学诊断
- 文献传递
- 鸡贫血病毒衣壳蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备
- 鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)为圆环病毒科(Circoviridae)环形病毒属(Gyrovirus)的代表成员,该病毒由日本学者Yuasa于1979年首次分离到,我国于1992年由崔现兰...
- 王晓艳文刚高玉龙高宏雷王笑梅
- 关键词：鸡贫血病毒衣壳蛋白纯化
- 文献传递
- J亚群禽白血病JL-2株gp85基因的克隆与表达被引量：6
- 2005年
- 本实验在分离鉴定J亚群禽白血病JL_2株的基础上,利用PCR方法扩增出包括gp85基因在内的长度为960bp的DNA片段。将其连到PGEX_6p_1载体上,构建了重组表达质粒PGEX_6P-1/gp85,对质粒进行序列分析并在IPTG的诱导下进行表达。SDS_PAGE分析结果表明,融合蛋白(54 Ku)在BL21中得到有效表达。表达产物占菌体总蛋白的31.8%。Western Blot结果表明,表达产物可与ALV_J阳性血清发生特异性反应。这些结果为进一步研究gp85蛋白的功能及研制ALV_J ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
- 宋素泉付朝阳高宏雷王笑梅曾祥伟郭艳王英张厚双王晓艳魏萍
- 关键词：GP85基因克隆
- 鸡贫血病毒Taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立被引量：17
- 2009年
- 根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到10个病毒拷贝/μL,与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复试验相关系数都小于5%。实验数据证明该检测方法敏感性高,特异性好,重复性佳。
- 宋修庆高宏雷王晓艳林欢宇文延青王永强王笑梅
- 关键词：鸡贫血病毒TAQ荧光定量PCR
