王洪法
- 作品数：52 被引量：236H指数：9
- 供职机构：山东省医学科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗弓形虫感染ROP2核酸疫苗的研究被引量：5
- 2005年
- 目的研究弓形虫核酸疫苗,以用于弓形虫病的防治。方法根据ROP2基因序列,设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物,扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体,然后再亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗;应用裸pc-DNA3-ROP2免疫小鼠,通过免疫学指标的检测,评价小鼠的免疫应答反应,最后应用弓形虫RH株攻击实验,评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值。结果以ROP2基因为模板,PCR扩增出1.7kbDNA条带,与预想结果一致;将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2(PUCm-T-ROP2),然后亚克隆并构建了pc-DNA-ROP2重组体,通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确,ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列;在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示,疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应;攻击实验结果显示,实验组小鼠的存活时间明显延长,并且开始死亡时间明显延迟(P<0.001),实验组9只小鼠中有1只长期存活;在实验的整个过程中,没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应。结论该疫苗免疫原作用强,具有很好的开发应用价值,目前可在动物群体中试验应用。
- 韩广东魏庆宽张佃波李瑾崔勇李桂萍王洪法刘玉冰刘克义
- 关键词：弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 山东省班氏丝虫病传播阈值的研究被引量：6
- 1997年
- 在鲁南原班氏丝虫病高度流行区的郯城县胜利乡花园村，于基本消灭后第５年（１９８４）开始，在不采取防治措施的情况下，纵向观察１０年，微丝蚴率由观察前的０．５６％降至０．１２％，观察前９例残存微丝蚴血症者，其中有８例陆续自然转阴。原残存微丝蚴血症者第１０年检测血中ＩｇＧ４抗体转阴率为８８．８９％。蚊媒自然感染率１９８４～１９８６年分别为０．２１％、０．１９％和０．０６％，第１０年（１９９３年）未再发现蚊媒幼丝虫。年传播潜势由３．４７降到０。结果表明，在当地自然环境条件下，蚊媒密度以人饵诱捕法调查不用蚊帐人群叮人率为２４．１～５２．５只／人·夜，使用蚊帐人群叮人率为１３．５～２１只／人·夜，居民微丝蚴率为０．５６％及残存微丝蚴血症者６０μｌ血微丝蚴平均密度为６．６～２０．７条的情况下，班氏丝虫病处于传播阈值以下，居民微丝蚴率逐步降低，趋于终止传播。
- 王培义尹舜高长兰盛琦赵中平李登俊曹新春刘伦华万功群刘波公茂庆刘新张佃波王洪法
- 关键词：丝虫病班氏丝虫病低密度微丝蚴血症
- 抗弓形虫感染DNA疫苗的研究
- 目的研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2...
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王用斌张佃波王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 文献传递
- 四川省黑水县利什曼原虫家犬感染率的检测被引量：5
- 2010年
- 目的 了解四川省黑水县利什曼病流行区家犬的利什曼原虫感染现状,并比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能.方法 2009年5月在犬源型利什曼病疫区四川省黑水县随机选取的无内脏利什曼病现症的家犬,采集静脉血,采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体,用两组PCR引物RV1、RV2和K13A、K13B检测血样中利什曼原虫特异DNA,并比较两种检测方法的敏感性.结果 PCR法检测抗凝静脉血阳性检出率为30.47%（32/105）,ELISA法检测血清阳性检出率为19.05%（20/105）.结论 四川省黑水县存在大量的利什曼原虫无症状感染犬,PCR是检测无症状感染较敏感的方法.
- 屈金辉赵桂华余清顺王洪法仲维霞陈志荣王淮东西格基崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：利什曼病感染率PCRELISA
- 弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展被引量：10
- 2015年
- 棒状体蛋白16(ROP16)是弓形虫棒状体蛋白家族成员,其蛋白结构存在丝氨酸、苏氨酸激酶区,是弓形虫入侵过程中的重要毒力因子。ROP16可分泌到宿主细胞核,能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT3/6,干扰宿主细胞信号通路传导,在弓形虫入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用。本文对弓形虫ROP16的发现、功能、免疫保护性等方面进行综述。
- 刘功振王彬王洪法
- 关键词：弓形虫磷酸化
- 抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上 ,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用 ,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。 方法 用六钩蚴粗制抗原免疫家兔 ,制备兔抗六钩蚴抗体 (Ab1) ,再用Ab1免疫昆明小白鼠 ,制备抗独特型抗体 (Ab2 ) ,免疫猪体 ,以 3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染 ,90d后剖杀 ,观察感染情况。 结果 5头试验猪只有 1头在膈肌发现 1个囊虫 ,而 2头阳性对照猪均被感染 ,各检查部位囊虫数平均为 4.5个 /10 0g和 3 .2个 /10 0 g。 结论 抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。
- 王洪法张红花李怀菊赵长磊陈锡欣岳继娥杨淑芳
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴抗独特型抗体
- 蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫杀伤作用的研究被引量：5
- 2011年
- 目的研究蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫的抑杀作用，探讨此抗菌肽可作为治疗黑热病的药物的可能性。方法培养利什曼原虫至适当浓度，接种于96孔组织培养板中，设实验组和对照组，实验组分别加入10ul浓度为30、60、90、120、150、180ug／ml的蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液，每个浓度重复9孔，对照组加相应体积的对照表达产物，分别在连续培养24、48和72h后，每孔加入20ul四甲基偶氮唑盐（5mg／ml），继续培养4h，每孔加入100ul formanzan溶解液，孵育4h左右，在570nm测定吸光度，根据吸光度数值计算杀伤率。结果实验组按浓度由低到高（30～180ug/ml）对应的杀伤率在培养24h后为20．12％、41．39％、64．89％、65．14％、66．49％和66．49％，培养48h后为40．12％、67．34％、75．11％、82．03％、82．75％和82．75％；培养72h后为45．89％、65．57％、78．49％、82．58％、85．38％和85．38％。蛔虫抗菌肽发酵产物浓度为150ug／ml时，杀伤作用最大，杀伤率为85．38％，IC50为50ug／ml。结论蛔虫抗菌肽对利什曼原虫有很强的杀伤作用。
- 仲维霞屈金辉王洪法赵桂华崔勇
- 关键词：抗菌肽猪蛔虫杜氏利什曼原虫杀伤作用
- 抗菌肽作用机制及改造策略研究进展被引量：9
- 2013年
- 抗菌肽是生物体先天性免疫系统的重要组成成分,是多种不同具有抗菌活性天然多肽分子的统称。研究发现抗菌肽具有抗包括G+细菌,G-细菌,真菌,支原体,病毒在内的多种病原体的广谱作用活性,有些抗菌肽还具有抗肿瘤活性。本文主要综述了抗菌肽的分类、作用机制、改造策略及其应用中存在的问题。
- 孙长峰仲维霞王洪法
- 关键词：抗菌肽
- 新疆喀什地区利什曼原虫人群感染率调查被引量：5
- 2010年
- 目的了解现阶段新疆喀什地区人群利什曼原虫感染现状,为制定防治规划提供依据。比较PCR和ELISA检测利什曼原虫无症状感染的效能。方法选取2009年9月新疆喀什地区黑热病流行严重的1县3乡四个调查点,在当地疾病预防控制中心的帮助下,采集黑热病患者及其家属和邻居的血液样品,分别编号,每份血样分抗凝血和非抗凝血。采用ELISA方法检测血清中利什曼原虫特异性抗体;用两组PCR引物RV1、RV2和KI3A、KI3B检测血样中利什曼原虫特异DNA片段。结果 PCR法阳性检出率为82.67%,ELISA法阳性检出率为69.33%。结论现阶段新疆喀什地区黑热病感染率仍然颇高,尤其表现在与患者密切接触的的患者家属和邻居;PCR是检测无症状感染较敏感的方法。
- 屈金辉王洪法赵桂华仲维霞凯赛尔窦海平崔勇李瑾孔凡红
- 关键词：黑热病感染率ELISAPCR
- 弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2(ROP2)靶基因,构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物,应用PCR扩增ROP2基因片段,回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T;用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子,将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3,并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7kbROP2基因片段,克隆于pUCm-T载体中,再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3,经筛选鉴定,构建pc-DNA3-ROP2重组质粒;测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。结论弓形虫ROP2基因片段,经TA克隆及亚克隆,构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。
- 魏庆宽张佃波李瑾李桂萍王洪法崔勇柏雪莲付斌刘玉冰宰德富黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：弓形虫克隆基因重组
