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禽偏肺病毒的分离鉴定及Nested RT-PCR检测方法的建立与应用: 禽偏肺病毒/(Avian metapneumovirus, aMPV/)，是家禽常见的呼吸道病原之一。aMPV感染火鸡可引起火鸡鼻气管炎，感染产蛋鸡可导致产蛋率下降、孵化率降低。aMPV也被认为是肉鸡肿头综合征/(Swo...; 薛聪; 文献传递

商品肉鸡中包涵体肝炎病毒的分离鉴定: 从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株鸡包涵体肝炎病毒，分别命名为山东章丘株(SDZQ)、山东费县株(SDFX)、山东日照株(SDRZ)和山东潍坊株(SDWF)。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶-2-脱氧...; 国纪垒刁有祥薛聪王蛟李建侠唐熠程彦丽; 关键词：商品肉鸡包涵体肝炎

1株B亚型禽偏肺病毒的分离与鉴定被引量：8: 2014年; 从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料，通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料，以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚，盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养，呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮，有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序，并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示，与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高，为97．4％～99．3％；与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低，为77．4％～78．1％；而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低，为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒，将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。; 薛聪唐熠陈琳崔京腾欧全宾孙晓艳裴苹苹刁有祥

B亚型禽偏肺病毒重组G蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：4: 2013年; 以纯化的B亚型禽偏肺病毒(aMPV)疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA方法。将构建好的重组质粒转入Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,获得重组G蛋白。利用亲和层析法对表达产物进行纯化,并用Western-blotting对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组G蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA诊断方法。结果显示,成功表达并纯化了B亚型aMPV疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白,Western-blotting检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组G蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组G蛋白与新城疫、禽流感(H9N2)、传染性支气管炎和传染性法氏囊阳性血清均不发生交叉反应。该方法与法国IDEXX公司生产的aMPV抗体检测试剂盒符合率为96.0%。采用本试验建立的间接ELISA方法对山东省7个地区鸡场的1 139份鸡血清进行了检测,结果表明,山东省部分地区aMPV的抗体阳性率为37.05%。本试验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实山东省部分地区存在aMPV感染现象。这一研究为aMPV诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。; 陈琳刁有祥邹金峰唐熠程彦丽欧全宾薛聪崔京腾鞠小军孙晓艳裴萍萍; 关键词：B亚型间接ELISA

B亚型禽偏肺病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用被引量：3: 2013年; 利用Primer Explorer V4在线软件设计针对B亚型禽偏肺病毒(aMPV)F基因的特异性引物,并从反应时间、温度、各组分浓度等方面优化了反应体系和反应条件,建立了B亚型aMPV逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测方法。该方法能够在63℃条件下1h内实现B亚型aMPV F基因片段的特异性扩增,与其他病毒,如H9N2亚型禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)等的核酸无交叉反应。反应结果可直接用肉眼判断。对质粒DNA的最小检测量为1×102拷贝/μL。利用建立的检测方法对20份疑似aMPV样品进行检测,其阳性检出率为10%。结果表明,建立的B亚型aMPV RT-LAMP检测方法具有快速、准确、特异性强、灵敏度高的特点,可应用于相关疾病的临床诊断。; 鞠小军刁有祥唐熠武利利薛聪崔京腾宋晓娜

B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2013年; 根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性。经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为107copies/μL,第2次扩增的敏感性为102copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍。应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性。结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础。; 薛聪刁有祥唐熠陈琳鞠小军崔京腾欧全宾; 关键词：F基因

Ⅰ群禽腺病毒山东株的分离鉴定及hexon基因的克隆与分析被引量：16: 2012年; 从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株病毒。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶-2-脱氧核苷抑制,表明毒株的核酸类型为DNA;对乙醚和氯仿有抵抗力;耐酸不耐碱;对热敏感。根据已发表的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因的保守区域设计合成了2对引物。用这2对引物对4株病毒的核酸模板进行PCR扩增,结果均扩增出与设计片段大小一致的片段。测序分析表明,4株分离株为Ⅰ群禽腺病毒。用本实验室自制的Ⅰ群禽腺病毒12个血清型参考毒株的抗血清进行双向琼脂扩散试验,证明4株病毒中1株为血清2型,其余3株为血清8型。; 国纪垒刁有祥薛聪王蛟李建侠唐熠程彦丽; 关键词：血清型

Ⅰ群禽腺病毒山东株的分离鉴定及hexon基因的克隆与分析被引量：1: 2013年; 从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株病毒。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶-2-脱氧核苷抑制，表明毒株的核酸类型为DNA；对乙醚和氯仿有抵抗力；耐酸不耐碱；对热敏感。根据已发表的I群禽腺病毒hexon基因的保守区域设计合成了2E引物。用这2对引物对4株病毒的核酸模板进行PCR扩增，结果均扩增出与设计片段大小一致的片段。测序分析表明，4株分离株为I群禽腺病毒。用本实验室自制的I群禽腺病毒12个血清型参考毒株的抗血清进行双向琼脂扩散试验，证明4株病毒中1株为血清2型，其余3株为血清8型。; 国纪垒刁有祥薛聪; 关键词：禽腺病毒 N基因山东株克隆鸡包涵体肝炎琼脂扩散试验

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