袁金钱
- 作品数：14 被引量：30H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划霍英东青年教师基金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 旋毛虫Ts43基因真核表达载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达
- 2007年
- 利用RT-PCR技术从黑龙江省猪源旋毛虫获得了Ts43基因,并克隆入pcDNA3.1-CT-GFP真核表达载体中构建重组质粒,用该重组质粒在脂质体介导下转染Vero E6细胞,GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液样品中有1条约66 ku的条带,可被小鼠旋毛虫阳性血清所识别,与预计大小一致,说明,真核表达载体pcDNA3.1-CT-GFP中的Ts43基因在VeroE6细胞中获得了表达,表达产物具有抗原性。
- 王君路义鑫姜曰晓朱江威朱艳梅袁金钱宋铭忻
- 关键词：旋毛虫克隆真核表达
- 旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究被引量：8
- 2009年
- 根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×102拷贝(10-5条旋毛虫),建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。
- 张子群谢晓峰袁金钱由轩徐义刚单琳琳宋铭忻
- 关键词：旋毛虫实时荧光PCR
- 旋毛虫28S rRNA基因片段的克隆及其在分类学上的应用被引量：1
- 2011年
- 为了探讨所采集旋毛虫的分类,利用PCR方法克隆了猪旋毛虫黑龙江隔离种核糖体28S rRNA序列的基因片段。序列分析结果表明,猪旋毛虫黑龙江隔离种与旋毛形线虫(Trichinella spiralis,T1)的进化关系较近,确定为旋毛形线虫(Trichinella spiralis)。结果与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了新的理论依据。
- 李成魏颖袁金钱宋铭忻
- 关键词：旋毛虫RRNA隔离种
- 改良型贝尔曼氏装置
- 本实用新型提供了一种检查动物和人体内的线虫时稳定性好、灵敏度高、检查时间短、成本低的改良型贝尔曼氏装置。它包括铁架台5和设置在铁架台5上的漏斗1、一端连接漏斗1底端的胶皮管2、一端连接胶皮管2另一端的试管3、装设在短试管...
- 宋铭忻路义鑫马广鹏韩彩霞袁金钱朱江巍姜曰晓王君朱艳梅
- 文献传递
- 一例海涂放牧山羊寄生虫病的诊治
- 2010年
- 陈建祥高建龙袁金钱沈奇顾来根
- 关键词：羊寄生虫病海涂诊治放牧萨能山羊本地山羊
- 旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49kuES结构基因的克隆与序列分析
- 根据Genebank中已发表的序列(M64242)为参考设计引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K的方法提取总RNA,用RT-PCR方法从6个旋毛虫隔离种的成囊前期幼虫中扩增出了49kuES结构基因,将目的基因定向克隆入pMD...
- 路义鑫宋铭忻姜曰晓王君朱艳梅朱江巍袁金钱
- 关键词：旋毛虫成囊前期幼虫克隆
- 文献传递
- 本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2007年
- 根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物，用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增了HSP70基因，将目的基因克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明，成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明，HSP70基因比较保守，不同物种之间氨基酸的同源性在40％～80％。与布氏旋毛虫HSP70序列相比，CDS区多出9个碱基，但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94％，存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。
- 袁金钱路义鑫韩彩霞宋铭忻
- 关键词：本地毛形线虫HSP70基因
- 黑龙江省松花江地区绵羊胃肠道线虫虫卵排出与成虫寄生的季节动态被引量：8
- 2007年
- 采用粪便检查法、幼虫培养法和蠕虫学剖检法对黑龙江省松花江地区羊胃肠道线虫虫卵排出与成虫寄生的季节动态进行了研究。结果表明,成年羊胃肠道线虫的虫卵排出量和成虫寄生量于5月出现一次明显的春季高潮,8月又出现一次较小的高峰,而一年的其他时期,虫卵排出量和成虫寄生量很低。羊胃肠道线虫的优势虫种是捻转血矛线虫、哥伦比亚食道口线虫、羊仰口线虫、毛圆线虫和毛首线虫。羔羊粪便中最早检获虫卵的时间是6月下旬,一年内虫卵排出量只在7月下旬出现一次高峰。研究结果对控制黑龙江省羊消化道线虫病有十分重要的意义。
- 宋铭忻马广鹏韩彩霞朱江巍袁金钱朱艳梅路义鑫
- 关键词：绵羊胃肠道线虫
- 重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)的免疫效果评价被引量：1
- 2009年
- 为评价H5N1高致病性禽流感二价灭活苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)的免疫效果。选择健康无禽流感免疫史的62日龄肉鸡20羽作为保护期外组(Ⅰ组);选择健康并有2次H5N1亚型Re-5株疫苗免疫史的110日龄肉鸡19羽作为保护期内组(Ⅱ组)。每羽胸肌注射二价苗0.5 mL。试验证实,重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)免疫注射后,未见临床异常反应,一次免疫注射后即可达到群体合格率70%以上。
- 陈建祥袁金钱孙勇艇沈奇李娅徐小燕
- 关键词：重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫效果
- 鸡组蛋白去乙酰化酶3的重组表达与结构信息学分析被引量：1
- 2014年
- 为比较柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)与鸡的组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白质序列和结构差异,以发现和筛选E.tenella HDAC3(EtHDAC3)的特异性抑制物。用RTPCR方法从杂交黄羽肉鸡的肠上皮细胞克隆ChHDAC3基因,以原核表达载体pMAL-C2X构建重组质粒pMAL-C2X-ChHDAC3,经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Transetta,进行IPTG诱导表达。使用Swiss-Model对ChHDAC3和EtHDAC3进行同源建模,比较分析ChHDAC3和EtHDAC3的活性位点。利用Autodock 4.2进行分子对接,研究抑制剂Apicidin与ChHDAC3、EtHDAC3结合模式的差异。结果显示,克隆的ChHDAC3基因的ORF由1 287个核苷酸组成,编码428个氨基酸,能在大肠杆菌中进行可溶性表达。构建的ChHDAC3和EtHDAC3的三维模型均由8个串联的β折叠和11个α螺旋组成,其活性位点高度保守,仅在表面识别区有1个氨基酸的差异。Apicidin与EtHDAC3有更低的结合能,提示Apicidin对EtHDAC3具有更强的抑制活性和选择性。
- 路义鑫刘兵马雪婷殷昊龚振兴宋铭忻袁金钱蔡建平
- 关键词：同源建模分子对接
