郑晓红
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学药学院药物化学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 尺寸排阻色谱柱上尿素梯度复性全长人PPAR-γ被引量：4
- 2010年
- 建立尺寸排阻色谱柱上尿素梯度复性全长人PPAR-γ重组蛋白的方法。利用尺寸排阻色谱柱上尿素梯度除去变性剂直接复性变性蛋白。添加尿素和精氨酸抑制聚集以提高复性产率,加入Zn2+促进变性蛋白形成正确折叠。复性后,重组蛋白的尺寸排阻色谱保留体积增大;紫外光谱最大吸收波长从234.0nm变为280.8nm;基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析重组蛋白的完整性,测得分子量与理论值一致;放射配体受体结合饱和实验测得解离常数(Kd)为89±4nmol/L;复性产率为52.7%。结果表明本文所建立的方法能成功用于复性变性全长人PPAR-γ,获得可用于结构和功能研究的具有生物学活性的全长人PPAR-γ蛋白。
- 李伟张雪梅郑晓红段雯余瑜
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体复性紫外光谱
- 全长人PPAR-γ的表达、纯化与结构确证
- 2010年
- 目的建立表达、纯化结构完整的全长人PPAR-γ的方法。方法构建pReceiver-B01-PPAR-γ质粒并转化E.coli BL21(DE3)细胞,诱导表达重组蛋白,优化细胞生长条件;利用亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化重组蛋白;胶内酶解重组蛋白,用离子阱质谱仪分析二维Agilent HPlC-Chip纯化的酶解片段;基于MS/MS搜索IPI、Swiss-Prot、NCBInr和MSDB数据库,鉴定重组蛋白。结果在优化的细胞生长条件(TB介质、37℃、0.8 mM IPTG、诱导3 h),从每升TB中可获得280 mg重组蛋白;两步纯化后,获得176 mg、纯度为95%的均质重组PPAR-γ蛋白;经质谱分析和搜索蛋白质数据库,获得均匀地分布在整个PPAR-γ多肽链中的33个阳性肽段,覆盖率为60%,表明重组蛋白为结构完整的全长人PPAR-γ。配体结合活性位点S289、H323、H449和Y473无突变,保证全长人PPAR-γ与配体结合的生物学活性。结论本文所建立的方法能成功用于大量表达结构完整的全长人PPAR-γ,有利于进一步的结构、功能研究和活性配体的筛选。
- 李伟杨晓兰胡雪原郑晓红段雯夏铸余瑜
- 关键词：纯化
- 静脉注射德氮吡格在小鼠的组织分布及排泄研究被引量：1
- 2013年
- 德氮吡格（Tetrazanbigen，TNBG）是重庆医科大学药学院余瑜教授首创合成的氮杂甾烷类化合物[1]。前期研究表明，TNBG主要干扰肿瘤细胞的脂代谢过程、干扰肝癌细胞株QGY-7701蛋白表达，从而发挥抗肿瘤的作用[2-3]本课题组已经申请了TNBG专利保护，并已经成功建立了德氮吡格在血浆及肝脏组织中的含量测定方法[4]，目前缺少该物质的组织分布研究资料。
- 刘嫱邝少轶陈志琼李伟郑晓红余瑜
- 关键词：德氮吡格抗肿瘤药物动力学排泄高效液相色谱法
