钟文
- 作品数：12 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省社会发展科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 粘膜免疫ClpX蛋白对小鼠肺炎链球菌感染的保护效果及机制的实验研究
- 钟文董杰张雪梅尹一兵胥文春王虹黄远帅曹炬龚艺徐绣宇闵迅张彦青
- 通过替代失活的方法分析核酸片段在肺炎链球菌毒力中的作用
- 2011年
- 目的鉴定基因spd—ABC、spd-1672、sp-1673和长间隔序列spd—J在肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，S．pn）毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应（LFH—PCR）的方法分别构建这4个序列的红霉素抗性基因（erm）替代缺失突变体，通过PCR和测序鉴定是否构建成功；通过绘制生长曲线观察基因对细菌生长繁殖的影响，通过小鼠毒力实验观察基因对细菌致病性的影响。结果所构建缺陷菌目的基因由eFm基因完全替代；spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J3个片段缺陷菌的生长趋势与野生菌没有明显差异，生长大约5hA值均可达到峰值，而spd-1672缺陷菌出现明显的延迟现象，生长8h后其4值才达到最高值；野生菌与缺失spd—ABC、spd-1673和长间隔序列spd—J的缺陷菌感染小鼠各组半数死亡时间分别为19、22、24和24h，差异无统计学意义，而spd-1672缺陷菌感染小鼠的半数死亡时间在75h左右，显著长于野生菌感染小鼠组（P〈0．05）。结论在构建的4个单个基因缺失突变体中，spd-1672缺陷后．S．pn生长明显延迟，毒力显著下降，提示spd-1672是s-Pn的一个新的毒力因子。
- 张彦青黄健张群钟文胥文春王虹张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌毒力
- 通过替代失活的方法分析核酸片段在细菌毒力中作用
- 张彦青黄健张群钟文胥文春王虹张雪梅
- 肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的 构建肺炎链球菌SpxA蛋白的原核表达系统,制备其多克隆抗体.方法 设计引物,利用PCR技术扩增肺炎链球菌D39菌株的spxA基因,并插入表达载体pET-28a（＋）内,测序鉴定.重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,以IPTG诱导表达含6个组氨酸标签的SpxA重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体.用ELISA及Western印迹方法分别检测多克隆抗体的效价及特异性.结果 从大肠埃希菌中诱导出高表达的SpxA重组蛋白,纯化后免疫小鼠获得抗血清,ELISA测定其效价可达1：2 560 000以上,Western印迹结果显示其能特异性地作用于肺炎链球菌SpxA.结论 成功构建了pET-28a（＋）-spxA原核表达质粒,获得了高纯度的目的 蛋白和高滴度、高特异性的多克隆抗体.
- 陈倩钟文张群黄远帅张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌多克隆抗体
- 通过替代失活的方法分析核酸片段在细菌毒力中作用
- 目的为鉴定基因spd-ABC、spd-1672、spd-1673和长间隔序列spd-J在细菌毒力中的作用。方法采用长臂同源聚合酶链反应(LFH-PCR)的方法分别构建这四个序列的红霉素抗性基因(erm)替代缺失突变体,通...
- 张彦青黄健张群钟文胥文春王虹张雪梅
- 文献传递
- 肺炎链球菌热休克蛋白ClpL的原核表达、纯化及抗原特性分析
- 2012年
- 目的原核表达并纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)热休克蛋白ClpL,并评价其作为S.pn疫苗候选蛋白的可行性。方法PCR扩增S.pn D39全长ClpL基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组ClpL蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗ClpL多克隆抗体的效价及亚型;Western blot分析ClpL蛋白在5种常见S.pn中的保守性;流式细胞术及Western blot分析ClpL蛋白在S.pn中的亚细胞定位。结果重组表达质粒pET-28a(+)-ClpL经双酶切及测序证实构建正确;ClpL蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度达90%,浓度为4.97 mg/ml;免疫小鼠可产生高滴度、高特异性的IgG抗体,以IgG1和IgG2b亚型为主;ClpL蛋白在5株常见S.pn中均有表达;ClpL蛋白为分泌型蛋白,不表达于S.pn表面。结论原核表达并纯化了S.pn ClpL蛋白,其作为一种在S.pn中保守存在的分泌型蛋白,可能是一种较好的疫苗候选蛋白。
- 钟文张群龚艺张彦青陈倩陈特董杰王虹张雪梅
- 关键词：链球菌肺炎原核细胞纯化
- 肺炎链球菌假想转录因子LytR的表达、纯化、晶体生长及优化被引量：2
- 2013年
- 本研究通过大量表达、纯化肺炎链球菌(S.pn)假想转录因子LytR,以用于晶体生长、优化及三维结构解析。以S.pn D39血清型LytR基因为DNA模板、pET-32a(+)为表达质粒、E.coli BL 21(DE 3)为表达菌株,经成功克隆、表达及纯化后,获得大量、上清表达,且纯度>90%的LytR重组蛋白(含His标签);经悬滴气相扩散法行蛋白晶体培养、初筛及优化,获得体形较大、外观规则的棒状晶体,该晶体X射线衍射能力达4.0A。本研究为假想转录因子LytR三维结构的解析及其生物学研究奠定基础。
- 闵迅钟文赵沙沙董杰董珊珊周爱娥闫文娟汪德强
- 关键词：肺炎链球菌蛋白质纯化
- 粘膜免疫ClpX蛋白对小鼠肺炎链球菌感染的保护效果及机制的实验研究
- 目的： 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，S.pn)定植于人类上呼吸道粘膜表面，能引起肺炎、脑膜炎、败血症等一系列疾病，在全球范围内有较高的发病率和病死率。随着抗生素耐药形势的日趋严峻，疫苗...
- 钟文
- 关键词：肺炎链球菌
- 文献传递
- 肺炎链球菌疫苗候选蛋白质谷氨酰胺tRNA合成酶的保守性与抗原性分析被引量：2
- 2012年
- 目的分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA syn-thetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性。方法 PCR扩增S.pn D39标准菌株的Gts基因,构建pET32a(+)-Gts原核表达质粒并测序。扩增S.pn不同血清型的Gts基因,测序后比对分析其保守性。表达Gts重组蛋白质,并进行纯化和western blot鉴定。用Gts重组蛋白质免疫BALB/c小鼠制备抗Gts的多克隆抗体并测定其效价。western blot分析Gts在不同血清型S.pn中的表达情况。ELISA法测定本地区不同年龄段的健康人及患者血清中抗Gts抗体的效价。结果构建了以D39血清型S.pn为DNA模版的pET32a(+)-Gts表达质粒,其测序结果与预期相符。8株不同血清型S.pn的Gts基因编码区大小与D39菌株一致,约为1 461 bp;经测序后序列比对,其基因一致性>99.0%。经Ni柱纯化得到纯度>95%的Gts重组蛋白质,且能与抗His tag标签抗体特异性结合。采用Gts蛋白质经腹腔免疫小鼠后,其血清抗Gts抗体滴度高达1.024×106(5.12×105,4.096×106),与对照组比较有显著差异(P<0.01)。western blot分析证实,8种不同血清型S.pn全菌裂解物均在Mr约55.9×103处出现特异性反应条带。在不同年龄段的健康人群及患者血清中,均产生高滴度的抗Gts抗体,且随着年龄增加而递增。结论 Gts重组蛋白质免疫原性好,在不同血清型的S.pn中均高度保守,且诱导产生的抗体反应存在年龄依赖性,是一个良好的候选疫苗靶点。
- 闵迅黄美容黄健董杰陈特王虹钟文尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌保守性抗原性疫苗
- 肺炎链球菌蛋白PotD的表达纯化及免疫活性分析被引量：1
- 2014年
- 目的研究PotD蛋白免疫保护活性,探讨其作为疫苗候选蛋白的可能性。方法构建、表达、纯化PotD蛋白,通过免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,评估其免疫原性,并进一步分析其对儿童的免疫保护效应;采用PCR技术扩增8株不同血清型S.pn中PotD基因后进行测序鉴定分析基因序列的保守性;再通过western blot技术分析8株菌中PotD蛋白的表达水平,以评估PotD蛋白保守性;采用粘附抑制实验分析PotD蛋白的免疫保护活性。结果成功获得纯度大于95%的PotD目的蛋白,将其免疫小鼠后获得高效价抗体;在10岁以下儿童S.pn感染者及健康带菌者血清中均有抗PotD存在;对8株不同血清型S.pn PotD基因进行PCR扩增和测序发现8株细菌中该基因具有高度保守性;Western blot技术分析证实,8株不同血清型S.pn均表达该蛋白;粘附抑制实验证实,重组PotD蛋白及其抗体均能够显著抑制S.pn对A549细胞的粘附作用。结论 PotD蛋白制备方便,在我国流行S.pn血清型中有良好的保守性和免疫原性,能够显著抑制S.pn对宿主细胞的粘附,可能成为良好的蛋白疫苗靶点。
- 闵迅黄健黄美容钟文董杰陈特张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌保守性抗原性
