钟茂华
- 作品数：13 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 原核表达、稀释复性的可溶性HLA-G1抑制混合淋巴细胞培养中T细胞增殖
- 2007年
- 目的：探讨原核表达体外稀释复性的可溶性人类白细胞抗原G1（soluble HLA-G1，sHLA-G1）对体外混合淋巴细胞反应中T细胞增殖的影响。方法利用原核表达的sHIA-G1的重链、轻链及人工合成的九肽，折叠形成正确构象的sHLA-G1．肽复合物；在混合淋巴细胞培养（MLC）体系中加入折叠所得的sHLA-G1-肽复合物及相同浓度的对照物，流式细胞仪检测T细胞的增殖情况。结果sHLA-G1．肽复合物加入到混合淋巴细胞培养中能够抑制T细胞的增殖，3个个体的抑制率分别为28．5％、32．5％及22．1％（Dunnett t检验，P〈0．05）；这种抑制作用可以被HLA-G特异性McAb（G11E5）所逆转。结论通过原核表达，体外稀释复性的方法可以大量制备正确构象的sHLA-G1-肽复合物，该复合物分子能够抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖。
- 夏芳珍钟茂华张彩娥陆盛军吴雄文梁智辉龚非力
- 关键词：T细胞增殖人类白细胞抗原G混合淋巴细胞反应
- 应用PCR-SSP方法研究武汉地区HLA-A*02等位基因的多态性
- 目的:HLA-A*02不同亚型在提呈抗原肽及诱导特异性CTL方面的功能差异一直是研究的热点,而且在临床器官移植过程中HLA-A*02亚型不匹配引起的强烈的同种反应也越来越受到重视。为此我们建立一种能够快速检测出17个HL...
- 梁兵梁智辉朱丽君翁秀芳卢小玲钟茂华梅奕吴雄文
- 关键词：等位基因PCR-SSP多态性
- 文献传递
- 加载HPV6E7抗原肽的HLA-A2单体及其四聚体的制备和鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的制备可生物素化的可溶性HLA-A2/HPV6E7单体,进一步组装成PE标记的可溶性HLA-A2/HPV6E7四聚体。方法以原核表达的sHLA-A2BSP为重链,β2m为轻链,与人工合成的HPV6E7(22-30)抗原肽(GLH-CYEQLV)利用稀释法进行共折叠复性得到单体。利用HLAI类分子单抗(W6/3)和抗Bzm抗体进行Westernblot和ELISA鉴定折叠产物的构象。以BirA酶对其进行生物素化,经过超滤离心后得到纯化的sHLA-A2/HPV6E7单体,再与Streptavidin-PE按4:1比例混合形成四聚体。结果该四聚体具有与HLA-A2阳性HPV6感染的CA患者的抗原特异性CTL结合活性。结论成功获得了天然构象的sHLA-A2/HPV6E7单体及PE标记的HLA-A2/HPV6E7四聚体。
- 张彩娥邓云华吴雄文梁智辉翁秀芳卢小玲夏芳珍钟茂华陆盛军
- 关键词：HLA-A2尖锐湿疣细胞毒性T细胞
- 自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞
- 目的:证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽／MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞。方法:本研究利用仅表达HLA-A2、TAP缺陷的T2细胞,将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr369-377...
- 翁秀芳梁智辉卢小玲钟茂华陆盛军张彩娥梁兵邓靖吴雄文
- 关键词：特异性
- 文献传递
- 用人工抗原提呈细胞探索肽在T细胞同种识别机制中作用的研究
- 对于同种抗原的本质,以及同种反应性T细胞是否与普通抗原反应性T细胞一样具有抗原肽／MHC复合物特异性,一直存在争论。我们用重组的MHC／肽复合物和人工抗原提呈细胞探索CD8+T细胞的同种识别机制。用H-2Kd限制性的来自...
- 梁智辉卢小玲吴雄文翁秀芳陆盛军张彩娥钟茂华肖伟梁兵梅弈朱丽君
- 文献传递
- 自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞被引量：1
- 2007年
- 在同种反应性T细胞(同种T细胞)识别的配体中,抗原肽的作用是免疫学长期争论的问题,即同种T细胞识别是否具有抗原肽特异性.为了证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽/MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞,本研究利用仅表达HLA-A2,TAP缺陷的T2细胞,将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr369-377)和EB病毒来源的病毒抗原肽(LMP2A426-434)分别加载到T2细胞上,使T2细胞提呈单一的T细胞抗原识别表位,并且选择4个HLA-A2阳性(HLA-A2+ve)与4个HLA-A2阴性(HLA-A2-ve)个体的PBL样本,与加载上述抗原肽的T2细胞混合培养.在此实验系统中,HLA-A2+ve PBL与加载病毒抗原肽的T2细胞(T2/LMP)混合培养代表T细胞对普通抗原的反应,而HLA-A2-ve PBL与加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)混合培养则为T细胞对同种抗原的反应.利用特异性pMHC四聚体染色与特异性细胞毒试验检测LTMLC诱生CTL的特异性,其中利用HIV抗原肽(Gag77-85)作为对照.结果显示:(ⅰ)T2/LMP与HLA-A2+ve个体的PBL混合培养产生CTL(CTL-T2/LMP),CTL-T2/LMP对T2/LMP的杀伤显著高于对照T2/HIV的杀伤(26.52%±3.72%vs7.01%±0.87%,P<0.001);LMP四聚体对CTL-T2/LMP染色的阳性细胞数显著高于对照HIV四聚体(0.98%±0.33%vs0.05%±0.01%,P=0.0014);(ⅱ)加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)可诱导HLA-A2-ve个体的PBL产生CTL(CTL-T2/Tyr),CTL-T2/Tyr对T2/Tyr的杀伤显著高于对T2/HIV的杀伤(28.07%±2.58%vs6.87±1.01%,P<0.001);Tyr四聚体对CTL-T2/Tyr染色的阳性细胞数显著高于HIV四聚体(0.88%±0.3%vs0.06±0.03%,P=0.0018).结果说明:结合于自身MHC分子上的病毒抗原肽与结合于同种MHC分子上的自身抗原肽都能诱导产生抗原肽特异性的CTL;在LTMLC诱生的同种CTL中,有相当数量的CTL具有pMHC特异性,这些同种CTL的识别机制与普通抗原反应性CTL一样,识别的对象也是特异性的pMHC.支持了同种抗原的pMHC种类繁多造成同种T细胞反应强度极高的假说.�
- 翁秀芳梁智辉卢小玲钟茂华陆盛军张彩娥邓靖吴雄文龚非力
- 可溶性HLA-G1-肽复合物的体外折叠和鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的合成可溶性HLA-G1-肽复合物。方法利用原核高效表达的可溶性HLA-G1重链和轻链(β2m),在人工合成的HLA-G1限制性九肽(KGPPAALTL)存在的条件下,通过稀释复性折叠成可溶性HLA-G1-肽复合物。利用特异性抗体(W6/32及兔抗人β2m抗体)进行免疫印迹及酶联免疫吸附试验,检测稀释复性的折叠产物。结果折叠复合物含有35%可溶性HLA-G1-肽复合物、5%可溶性HLA-G1重链聚合体及60%复性的β2m3种成分。结论通过原核表达、体外折叠能够获得大量可溶性HLA-G1-肽复合物。
- 夏芳珍吴雄文钟茂华褚利霞翁秀芳张彩娥卢小玲梁智辉
- 关键词：MHCI类可溶性稀释复性
- HGPRT缺陷型T淋巴瘤细胞系的建立与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞。方法通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jur16-TG细胞。比较Jurkat细胞与Jur16-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况。结果在含20μg/ml 6-TG的培养液中,Jur16-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡。在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8mol/L或8×10-8mol/L时,Jur16-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7~10 d。Jur16-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jur16-TG细胞与PBL融合。结论突变筛选出的单克隆细胞株Jur16-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞。
- 翁秀芳吴雄文梁智辉陆盛军卢小玲张彩娥钟茂华陈雪玲龚非力
- 可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化被引量：1
- 2008年
- 目的探讨可溶性HLA-G-肽复合物的体外制备与纯化。方法原核高效表达的HLA-G重链及轻链(β2m)在抗原肽(人工合成九肽NH2-KGPPAALTL-COOH)的存在下,通过稀释复性折叠成HLA-G-肽复合物,采用凝胶过滤层析对折叠复合物进行纯化。利用特异性抗体(mAb W6/32和兔抗人β2m抗体)进行ELISA和Western blot对纯化产物进行鉴定。结果折叠复合物中,主要含有HLA-G重链聚合体、HLA-G-肽复合物及β2m3种成分,纯化后主要为HLA-G-肽复合物。结论成功地获得纯度较高的可溶性HLA-G-肽复合物单体,为进一步研究HLA-G的生物学功能奠定了基础。
- 钟茂华翁秀芳梁智辉夏芳珍李佳楠陈雪玲吴雄文
- 关键词：稀释复性凝胶过滤层析
- 用人工抗原提呈细胞诱导肽特异性同种T淋巴细胞治疗肿瘤的研究
- 自身T细胞对自身MHC分子提呈的肿瘤抗原肽的反应通常是微弱和无效应的。同种限制性T细胞库的存在有可能产生针对非自身MHC分子结合的自身肽的T细胞,因为自身耐受是针对自身MHC分子提呈的自身肽无反应。因此,同种T细胞为过继...
- 卢小玲梁智辉吴雄文翁秀芳陆盛军张彩娥钟茂华肖伟梁兵梅弈朱丽君
- 文献传递
