陈实
- 作品数：14 被引量：21H指数：3
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项北京市科委科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 流行性腮腺炎疫苗株S79全基因序列测定与分析被引量：2
- 2010年
- 目的 腮腺炎疫苗株S79工作种子噬斑纯化及全基因组测序,针对国内已经分离出的毒株,从分子生物学角度探讨疫苗保护力相关问题.方法 噬斑纯化S79疫苗株,利用RT-PCR分段扩增S79株两种亚株的全基因并测序,比较S79株与其来源株Jeryl Lynn（JL）核酸序列差异;从GenBank中获得WHO各基因型参考株和中国腮腺炎流行株疏水蛋白（SH）序列,分析病毒株和疫苗株遗传距离,并构建基因亲缘性关系树.结果 S79疫苗株由两种亚株构成,比例为2∶5（major∶minor）,获得全基因序列并递交GenBank;与相应的JL株相比,核苷酸序列同源性分别为99.7%和100%.亚株序列中存在散在区段异源重组.S79疫苗株为A基因型,中国的流行株为F基因型,遗传距离为11.2%～20.0%.结论 S79疫苗株由两种亚株构成,两亚株的全基因序列与JL株基本一致,但亚株的比例与国际上应用的其他JL疫苗株存在较大差异.疫苗株与中国流行株不属于同一基因型,遗传距离较远.S79疫苗免疫保护效果的差异可能主要与疫苗株和流行株不属于同一基因型有关.
- 张靖梁宇陈实于洁靳玉琴马智静张学峰卫江波李启明
- 关键词：腮腺炎病毒
- 一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法
- 本发明提供了一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法。本发明的重组多形汉逊酵母菌(Hansenula polymorpha)包含乙肝病毒的L蛋白的编码基因和S蛋白的编码基因。本发明的多形汉逊酵母菌与现有技术相比具有以下优点和积...
- 李启明张靖张学峰梁宇靳玉琴马智静陈实于洁
- 文献传递
- DNA序列、重组载体、单和双营养缺陷型多形汉逊酵母菌、及其制备方法
- 本发明涉及一种双营养缺陷型酵母菌，所述酵母菌为多形汉逊酵母菌(Hansenula polymorpha)，该多形汉逊酵母菌的乳清酸苷-5-磷酸脱羧酶基因和β-异丙基苹果酸脱氢酶基因都被阻断。本发明还涉及该双营养缺陷型酵母...
- 李启明梁宇靳玉琴张靖陈实张学峰马智静于洁卫江波沈心亮
- 文献传递
- 基于汉逊酵母 HPV68b L1蛋白的 VLPs免疫学效果研究
- 2015年
- 目的：对重组表达HPV68 b L1蛋白的汉逊酵母工程菌进行高密度发酵，并对L1蛋白形成的类病毒颗粒（virus-like particles，VLPs）进行纯化、鉴定及免疫学效果评价。方法 HPV68b L1的酵母工程菌经过发酵，系列纯化和颗粒重构后获得VLPs抗原，对该抗原进行蛋白纯度、颗粒形态及免疫原性等检定，与铝佐剂吸附后免疫动物，利用假病毒体外中和试验评价其对HPV68 b型及HPV68a型的保护效果。结果发酵后的工程菌经过纯化和颗粒重构后，获得纯度大于95％的VLPs，电镜结果显示，其颗粒形态均一，大小与天然病毒颗粒接近。假病毒体外中和试验结果显示， HPV68b型VLPs抗原可诱导小鼠体内产生较高滴度的中和抗体，同时对HPV68a型也具有一定的交叉保护作用。结论验证了重组HPV68 b型VLPs蛋白用于疫苗生产的可行性，可作为多价HPV疫苗的组分。
- 陈实靳玉琴杜丽芳梁宇郭舒杨李启明
- 关键词：汉逊酵母
- 重组诺如病毒GⅠ．1和GⅡ．4型类病毒颗粒免疫效果初步评价被引量：10
- 2016年
- 目的初步评价基于汉逊酵母表达系统的重组诺如病毒（norovirus，NoV）GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白类病毒颗粒（virus-like particles，VLPs）的免疫效果。方法将纯化后VLPs经SDS-PAGE和Western blot分析及鉴定，透射电镜观察颗粒形态，动态光散射仪分析颗粒粒径大小及分布情况。将GⅠ.1和GⅡ.4型VLPs按照不同的免疫方案免疫BALB/c小鼠，组织血清抗原（histo-blood group antigen，HBGA）-VLPs阻断试验检测50%阻断滴度（50% of blocking titer，BT50）。结果纯化后重组GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白纯度大于90%，Western blot分析可见特异性条带。VLPs直径为30～50 nm，界限清晰，颗粒直径与天然病毒颗粒接近，颗粒大小分布均一。免疫小鼠血清中佐剂组BT50明显高于无佐剂组。结论应用含铝佐剂的GⅠ.1和GⅡ.4型VP1 VLPs免疫小鼠，诱生了较好的HBGA阻断抗体，可作为诺如病毒疫苗的组分抗原。
- 马智静唐芳张学峰张靖侯俊伟陈实李启明
- 关键词：诺如病毒
- 人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法和外源蛋白表达盒、表达系统
- 本发明涉及一种人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法，该方法使人乳头瘤病毒的结构蛋白L1和L2在同一双缺陷型甲醇酵母菌表达系统中共表达，所述表达系统使用包含以下元件的外源蛋白表达盒：a)标记基因序列；b)源自甲醇酵母菌的启动子...
- 李启明张靖陈实靳玉琴马智静梁宇张学峰于洁卫江波沈心亮
- 文献传递
- 麻疹疫苗株S-191全基因序列测定及与流行株进化关系的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的对国内现在使用的Shanghai-191（S-191）疫苗株进行全基因组测序，针对国内已经分离出的毒株，分析它们与疫苗株的核酸序列差异以及流行特征。方法利用RT-PCR的方法分段扩增S-191疫苗株的全基因并测序，从GenBank中获得全球24条麻疹全基因序列和211株中国各省分离到的麻疹流行株以及WHO各基因型参考株的N基因C端456个核苷酸序列，计算麻疹序列13个编码区和非编码区的突变率，分析病毒株和疫苗株基因型和遗传距离，构建基因亲缘性关系树。结果获得S-191疫苗株的全基因序列并递交GenBank收录，进化树分析表明大部分流行株为H1基因型。各省流行株与S-191相比遗传距离为6．7％～8．2％。突变率分析显示非编码区的突变率明显高于编码区，编码区中N基因的突变率最大。结论本研究表明，中国大陆的麻疹病毒流行株以H1基因型为主，不存在明显的地域流行差异，在时间上也没有明显的突变积累特征。S-191疫苗株与近年来的麻疹流行株在遗传距离上差异较大，其保护作用需做进一步追踪探讨。
- 于洁王海龙陈实张靖张卿靳玉琴李启明
- 关键词：麻疹病毒RT-PCR
- 拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的以拟多形假丝酵母菌（ATCC26012）为材料，构建遗传稳定性良好的尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型工程化菌株。方法利用物化及基因工程等方法对拟多形假丝酵母菌株的染色体进行改造，将ura3基因和leu2基因进行定向诱变，以获得尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，并对其进行生物学鉴定，包括菌株的遗传稳定性、基因序列及生理生化特征分析等。结果筛选得到尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，鉴定结果显示该菌株遗传稳定性良好，标志基因均发生定向改变，生理生化结果显示该菌株能利用多种碳源和氮源，且生长状况良好。结论拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造为进一步研究该菌株的遗传学奠定了基础，为多价蛋白组成类病毒颗粒的外源表达提供了工程化宿主。进而，为复杂疫苗抗原的重组表达和功能研究提供了技术手段。
- 梁宇靳玉琴张靖陈实李启明
- 关键词：营养缺陷型
- 多糖结合疫苗及其制备方法
- 本发明涉及一种多糖结合疫苗，包含细菌多糖与载体蛋白的化学偶联物，所述载体蛋白为细菌粘膜侵袭相关蛋白，如大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A1、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A2、肺炎球菌表面蛋白、肺炎球菌表面黏...
- 李启明张学峰马智静唐玉龙张靖陈实靳玉琴卫江波
- 文献传递
- 一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法
- 本发明提供了一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法。本发明的重组多形汉逊酵母菌(Hansenula polymorpha)包含乙肝病毒的L蛋白的编码基因和S蛋白的编码基因。本发明的多形汉逊酵母菌与现有技术相比具有以下优点和积...
- 李启明张靖张学峰梁宇靳玉琴马智静陈实于洁
- 文献传递
