陈诚
- 作品数：33 被引量：62H指数：5
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- 绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究被引量：3
- 2017年
- 【方法】利用PCR方法对绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征。将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体p ET-32a(+),构建重组表达载体p ET-32a(+)-p74C,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达。【结果】MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9~31位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C磷酸化位点。同源性分析显示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列与标准株MO-SC01氨基酸序列同源率为86.5%,其羧基端为P74蛋白抗原集中区。SDS-PAGE检测结果显示,表达的P74蛋白抗原表位集中区片段对分子质量约为35.5 k Da,与理论值相符;Western blot分析表明重组P74蛋白具有较强的反应原性。【结论】本研究为进一步筛选MO亚单位疫苗及血清学诊断的候选抗原奠定了前期基础。
- 卢海亭孟庆玲乔军彭叶龙陈诚田路路贡莎莎才学鹏陈创夫
- 关键词：绵羊肺炎支原体克隆原核表达反应原性
- 绵羊肺炎支原体多表位融合抗原MO-meAg5及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体多表位融合抗原MO‑meAg5及其制备方法和应用，通过MO基因组的提取、表达文库的构建、筛选，MO多表位融合抗原基因的构建和在大肠杆菌中的表达，得到具有良好免疫原性的抗原蛋白，即本发明的绵羊...
- 乔军陈诚孟庆玲胡政香马玉田路路卢海亭曹旭东陈创夫
- 文献传递
- 细粒棘球蚴TSP6基因的克隆、表达及重组蛋白反应原性研究
- 细粒棘球蚴病(Echinococcosis)是由细粒棘球绦虫的中绦期幼虫-细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)寄生于人、畜脏器内所引起的一种严重危害人们健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫病,导...
- 刘田莉孟庆玲乔军陈诚张星星田路路
- hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌毒力及环境应激的影响
- 引言单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性致病菌,可引起人畜流产、脑膜脑炎、败血症等症状,是世界卫生组织规定的四大食源性致病菌之一。该菌具有很强的环境应...
- 卢海亭乔军孟庆玲彭叶龙陈诚张星星田路路陈创夫
- 文献传递
- 绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌的构建及其免疫原性分析被引量：2
- 2017年
- 【目的】构建绵羊肺炎支原体(MO)p74基因重组单核细胞增生李斯特菌(LM)并分析其免疫原性,为研发MO重组活疫苗奠定基础。【方法】采用PCR方法从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因的上、下游同源片段a和b,从质粒pET-32a(+)-p74中扩增出MOp74目的基因片段,利用重叠延伸PCR方法(SOE-PCR)将扩增的3个片段融合成ap74b基因片段,克隆入pMD19-T载体中进行测序鉴定。将ap74b片段从pMD19-T载体上切下亚克隆入pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ap74b重组穿梭质粒,电转化至LM-SB5株感受态细胞,用氯霉素和高温双重压力筛选得到重组菌LM-Δrli60-ap74b。并通过SDS-PAGE及Western blot分析重组菌P74蛋白的表达情况,通过小鼠免疫试验检测其免疫原性。【结果】成功扩增出了rli60基因的上下游同源片段a、b及p74目的片段,采用SOEPCR方法获得融合片段ap74b,并成功亚克隆于穿梭质粒pKSV7中。对重组菌PCR鉴定结果表明,外源基因MO p74定点整合于LM基因组中。体外稳定性检验表明,p74基因能在LM基因组中稳定存在。SDS-PAGE结果表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b可表达蛋白分子质量约为17ku重组蛋白;Western blot分析表明,表达的重组蛋白能与MO阳性血清发生特异性免疫反应。小鼠免疫试验表明,重组菌LM-Δrli60-ap74b菌液可诱导机体产生抗MO特异性抗体,证实该重组菌具有一定的免疫原性,重组菌能诱导机体产生1∶8~1∶16的抗体效价。【结论】获得了具有免疫原性的绵羊肺炎支原体p74基因重组单核细胞增生李斯特菌。
- 卢海亭乔军孟庆玲彭叶龙陈诚田路路贡莎莎才学鹏陈创夫
- 关键词：绵羊肺炎支原体单核细胞增生李斯特菌同源重组
- 细粒棘球蚴RTN4基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2016年
- 【目的】克隆细粒棘球蚴(Eg)内质网膜蛋白4(Reticulon-4,RTN4)抗原基因,对其序列进行生物信息学分析。【方法】采集感染Eg的绵羊肝脏和肺脏,提取Eg头节总RNA为模板,对RTN4基因进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T载体后测序,对其核苷酸序列及氨基酸序列进行生物信息学分析。【结果】Eg RTN4cDNA全长654bp,编码217个氨基酸,蛋白质分子质量为25.3ku,等电点为8.83。编码氨基酸序列中含有1个N端酰基化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和4个蛋白激酶C磷酸化位点。经生物信息学软件预测,RTN4蛋白的抗原表位区主要集中在第1-47位、第71-147位和第171-217位区域;含有2个高度疏水区,2个跨膜区,膜外区分别位于第1-47位和第171-217位。【结论】成功克隆了Eg RTN4基因,预测了其编码蛋白抗原的结构和表位。
- 刘田莉孟庆玲乔军陈诚马玉胡政香才学鹏陈创夫
- 关键词：细粒棘球蚴抗原基因基因克隆生物信息学分析
- 细粒棘球蚴TSP6基因的克隆、表达及重组蛋白反应原性研究
- 目的:细粒棘球蚴病(Echinococcosis)是由细粒棘球绦虫的中绦期幼虫-细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)寄生于人、畜脏器内所引起的一种严重危害人们健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫...
- 刘田莉孟庆玲乔军陈诚张星星田路路
- 关键词：细粒棘球蚴克隆
- 文献传递
- 绵羊肺炎支原体膜蛋白p56基因的克隆、表达及反应原性研究被引量：6
- 2016年
- 为了分析绵羊肺炎支原体(MO)膜蛋白p56的反应原性,本研究以MO新疆流行株为模板,设计特异性引物对p56抗原集中区段进行PCR扩增,将扩增产物克隆测序,进一步亚克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-p56原核表达载体。将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG对重组菌进行诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果表明,SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为44 kDa;Western blot分析表明该重组蛋白可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,证实表达的重组p56融合蛋白具有良好的反应原性,为进一步研发MO检测用抗原奠定了前期基础。
- 陈诚乔军孟庆玲刘田莉胡政香马玉才学鹏陈创夫
- 关键词：MO膜蛋白克隆原核表达反应原性
- 细粒棘球蚴铁蛋白(ferritin)基因的克隆及生物信息学分析
- 棘球蚴病是由棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)的中绦期幼虫寄生在哺乳动物脏器内所引起的一种人畜共患寄生虫病。研究发现,Eg编码的许多抗原基因可在六钩蚴阶段高效表达,如蛋白酶抑制剂、四跨膜蛋白...
- 陈英孟庆玲乔军刘田莉陈诚贡莎莎卢海亭田路路钟文强孟丹
- 关键词：细粒棘球蚴克隆生物信息学分析
- 文献传递
- ncRNA伴侣分子hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境适应能力的影响被引量：3
- 2015年
- Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42℃和氯霉素压力下进行同源重组,筛选LM-SB5 hfq基因缺失株,并分析hfq基因缺失株在不同温度、pH、高盐、乙醇、H_2O_2、Triton X-100胁迫环境下的适应能力.结果成功构建得到一株遗传性稳定的LM hfq基因缺失株LM-Δhfq;LM-Δhfq对5%NaCl、3.5%乙醇、0.1%H_2O_2的适应能力显著降低,对30℃、37℃、42℃、pH 4、pH 9及Triton X-100的适应能力没有显著变化,表明Hfq参与了LM对高盐、乙醇、H_2O_2胁迫环境的适应过程.本研究为进一步揭示Hfq蛋白在参与ncRNA调控细菌生命活动的机制奠定了基础.
- 卢海亭乔军孟庆玲彭叶龙陈诚刘田莉谢堃才学鹏陈创夫
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌分子伴侣
