陶颖
- 作品数：12 被引量：21H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅重点项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 沉默信息调节因子3促进肝癌细胞凋亡及其机制研究被引量：1
- 2016年
- 该文旨在探讨沉默信息调节因子3(sirtuin 3,SIRT3)对肝癌细胞凋亡的影响,并研究SIRT3调节肝癌细胞凋亡的分子机制。运用流式细胞术检测SIRT3过表达对肝癌细胞系(SMMC-7721和SK-Hep-1)凋亡的影响;通过si RNA靶向沉默SIRT3并检测SIRT3沉默对肝癌细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析SIRT3对Bcl-2家族成员m RNA水平的影响,筛选受SIRT3调节的Bcl-2家族成员;Western blot进一步检测SIRT3对目标Bcl-2家族成员蛋白水平的影响;流式细胞术分析目标Bcl-2家族成员在SIRT3诱导肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示,SIRT3过表达促进肝癌细胞凋亡并引起Bax mRNA和蛋白水平升高;SIRT3沉默抑制肝癌细胞凋亡,同时也抑制Bax蛋白水平表达,Bax沉默显著减少了SIRT3过表达细胞中的凋亡数目。该研究结果提示,SIRT3通过凋亡调节基因Bax诱导肝癌细胞凋亡。
- 陶颖陈娟
- 关键词：肝细胞癌BAX
- Sirtuin1(SIRT1)通过转录因子AP-1调节HBV的转录和复制
- 目的研究Sirtuin 1(SIRT1)在乙型肝炎病毒(HBV)复制中的作用,并探讨SIRT1在调节HBV复制过程中可能的机制。方法运用Real-time PCR、western-blot分析SIRT1在HBV复制细胞中...
- 任吉华陶颖宋春丽李宛蔚冉龙宽陈娟
- 一种新的DNA分子克隆方法被引量：10
- 2011年
- DNA分子克隆是基本的分子生物学实验技术,传统的分子克隆方法大多需经过酶切链接过程,但在某些情况下,没有合适的酶切位点往往会成为阻碍克隆进行的障碍.本文描述了一种新的分子克隆方法,称为不依赖酶切和链接的分子克隆(RLIC).利用RLIC,将3种不同大小的DNA片段克隆到3种不同载体,证明了这种方法的有效性和可靠性.由于该方法不受限制性酶切序列限制,省去了酶切连接步骤,因此具有很大的灵活性和简便性,在分子生物学研究方面有广泛应用前景.
- 黄媛陶颖张文露黄爱龙胡接力
- 关键词：DNA分子克隆
- 沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法 Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞集落形成能力的影响;q RT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果 SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P〈0.001）,使肝癌细胞DNA合成下降了约57%（P〈0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约51%~61%（P〈0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P〈0.01）。结论 SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。
- 陶颖陈娟
- 关键词：肝癌增殖
- SIRT1基因沉默诱导肝癌细胞老化及其机制被引量：5
- 2012年
- 目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-time PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。BrdU标记实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化;β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化;Western blot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRNA及蛋白水平。SIRT1沉默能抑制肝癌细胞的增殖,抑制率达70%～80%;同时,SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞:感染shCont的细胞处于G1期比例为(44.29±0.36)%,而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞为(69.20±1.24)%,感染shSIRT1-2的细胞处于G1期比例为(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高,阳性细胞占40%～50%(P<0.05),并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论 SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。
- 宋春丽任吉华张祯祯陶颖陈娟
- 关键词：肿瘤细胞系细胞衰老
- 乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响
- 2013年
- 通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽,研究各种改造对HBc功能的影响。采用RLIC方法,构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体,并构建与HBc功能互补的质粒HBV1.1c-,将不同重组体与HBV1.1c-共转染HEK293细胞,通过观察荧光及Southern blotting检测病毒复制中间体,判断相应基因工程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响。RLIC方法可有效地用来进行片段缺失,且缺失片段大小及位置无明显限制。带柔性或刚性接头的重组HBc-EGFP均可产生绿色荧光,但荧光在细胞内分布形态不同,两种重组HBc-EGFP均不能支持正常的HBV复制,各种截短的插入片段以及aa79-80单独缺失体亦不能支持HBV复制。结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具,不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响,aa79-80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用。
- 陈江燕黄荣陶颖黄媛罗英英黄爱龙胡接力
- 关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白绿色荧光蛋白基因工程
- HBsAg缺失型乙型肝炎病毒复制细胞模型的建立及其对乙型肝炎病毒复制的影响被引量：1
- 2013年
- 目的体外构建HBsAg缺失型乙型肝炎病毒(HBV)复制细胞模型,并探讨HBsAg对HBV复制的影响。方法定点突变pch9质粒上HBV 1.1倍体基因S蛋白表达区,构建HBV1.1倍体HBsAg突变质粒,并进行测序鉴定;将鉴定正确的突变质粒瞬时转染HepG2细胞,设未突变pch9质粒转染细胞作为对照,采用ELISA法检测转染72 h的细胞培养上清中HBsAg的表达;Southern blot及Real-time PCR法检测转染72 h的细胞内HBV DNA的复制水平。结果定点突变质粒经测序证实构建正确;突变质粒转染72 h的细胞培养上清中HBsAg A450值为(0.06±0.003),表达呈阴性,对照细胞A450值为(1.82±0.010),表达呈阳性,转染突变质粒72 h的细胞内HBV DNA条带浓度明显高于转染未突变质粒的细胞;转染突变质粒的细胞内HBV DNA绝对拷贝数分别为9.33×106、5.26×106,约为转染未突变质粒(6.91×105)的7.6～13.5倍。结论已成功构建了HBsAg缺失型HBV复制细胞模型,为HBV DNA复制及相关研究提供了实验依据;推测HBsAg是HBV DNA形成的自限性因素,能够负调控HBVDNA复制。
- 潘万龙方岩许舸罗强黄媛陶颖黄爱龙胡接力
- 关键词：表面抗原突变
- 腹泻型肠易激综合征患者肠道微生物特征及其与躯体、精神症状的关联分析
- 陶颖
- SIRT1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨慢病毒介导沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因的shRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计、合成2对针对SIRT1基因shRNA的寡核苷酸序列,与pLentilox3.7-GFP载体连接产生重组慢病毒质粒pshSIRT1-1、pshSIRT1-2,同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照pshCont。将表达shRNA的载体plentilox3.7与pLP1、pLP2和pLP/VSVG 3种质粒共转染293FT细胞,包装产生慢病毒并测定病毒滴度。将慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7,行real time-PCR和Western blot验证SIRT1基因的沉默效果,台盼蓝排斥实验和流式细胞仪分别检测其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。结果:成功构建靶向SIRT1基因shRNA慢病毒载体并获得了相应的慢病毒。2个靶向SIRT1的shRNA均能有效抑制SIRT1基因的表达(P=0.000 2),并使MCF-7细胞增殖明显减慢,凋亡明显增加(P=0.006 0)。结论:靶向SIRT1基因RNA干扰能显著抑制MCF-7细胞的生长并促进其凋亡。
- 陶颖陈可宋春丽任吉华陈娟
- 关键词：慢病毒乳腺癌细胞RNA干扰
- 基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统
- 目的:以慢病毒系统为基础，结合HBV聚合酶反式互补技术建立一种全新的HBV体外表型分析系统。 方法: 1.将HBV pol克隆到慢病毒载体pLenti-mcs，得到重组质粒pLenti-pol，重组质粒pLenti-...
- 陶颖
- 关键词：重组慢病毒耐药突变药物敏感性
