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人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1: 2008年; 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。; 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉; 关键词：MAVS 转录活性

线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达: 2008年; 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。; 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉; 关键词：MAVS IFN-Β 荧光素酶报告基因

ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用被引量：3: 2009年; 目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。; 马红芳何湘王可王芳焦新安张艳红章金刚钟辉; 关键词：丙肝病毒报告基因

福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统效应子IpaH4．5功能的初步研究被引量：3: 2009年; 目的:IpaH家族是福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应子的成员,但功能不清,特别是对IpaH4.5的研究未见报道。本研究拟探讨IpaH4.5的功能。方法:克隆了福氏志贺菌2a 301株的IpaH4.5基因,构建了带Flag和GFP标签的IpaH4.5真核表达载体。通过Western印迹和共聚焦确定IpaH4.5在真核细胞293T中的表达和定位,通过报道基因的方法观察IpaH4.5对宿主细胞NF-κB途径的影响。结果:Western印迹证实IpaH4.5在真核细胞中有表达,激光共聚焦确定IpaH4.5在真核细胞中定位于细胞膜和细胞核,通过报道基因观察到它可以抑制宿主细胞的NF-κB途径。结论:发现IpaH4.5可以抑制NF-κB途径,为进一步研究IpaH4.5的功能奠定了基础。; 王芳王芳马红芳何湘苑锡铜姜铮刘大伟赵江丽赵红庆袁静钟辉; 关键词：福氏志贺菌宿主细胞 NF-ΚB途径

人细小病毒B19检测技术: 人细小病毒B19属细小病毒科、细小病毒亚科、红病毒属，是一种体积微小、无囊膜的单链DNA病毒，直径约20～25nm。本文介绍了B19病毒的抗体检测、抗原检测以及核酸检测等人细小病毒B19检测技术。; 马红芳赵雄章金刚; 关键词：人细小病毒病毒感染免疫学检验抗体测定; 文献传递

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马红芳